Geenitehnoloogia eksami kordamisküsimused (0)
Elu - Luuletused, mis räägivad elus olemisest, kuid ka elust pärast surma ja enne sündi.
Geenitehnoloogia eksami kordamisküsimused
Bioteaduse metoodika
Loodusseadused
on teaduslike faktide üldistused, mis võimaldavad samaaegselt
selgitada mitmeid loodusnähtusi. (Teaduslik
teadmine
tekib siis, kui mitu uurijat jõuab ühesugusekatsejärel sama
tulemuseni).
Ühe teadusharu piires kogutud teadmised ja avastatud loodusseadused
moodustavad teadusliku
teooria. Pädeva
teadusliku teooria alusel on võimalik ennustada nähtusi/fakte, mida
hiljem saab tõestada eksperimentaalselt.
Hüpotees
peab olema faltsifitseeritav (tõetatakse/lükatakse ümber)
Bioteaduste
uurimisobjektid pärinevad loodusest : biomolekulid , rakud ,
organismid, populatsioonid, liigid, ökosüsteemid. Kasutatavad
meetodid jaotatakse : vaatlus,
võrdlus
(võrdlev anatoomi , geenijärjestuse võrdlus), katse
(kui muudetakse üht tingimust ja võrreldakse tulemusi nii muudetud
kui muutmata tingimustega katse puhul)
1)Probleemi
püstitamine
2) Taustinfo kogunemine
3)Hüpoteesi
sõnastamine
4)Hüpoteesi
kontrollimine
5)Tulemuste
analüüs ja järelduste tegemine
Eluslooduse organiseerituse tasemed
MOLEKULAARNE tase – molekulaarbioloogia , geenitehnoloogia, süsteemibioloogia . Esmane organiseerituse tase. Kõikjal, kus on elu, esinevad biomolekulid: sahhariidid , lipiidid , valgud , nukleiinhapped .
ORGANELLI tase – (molekulaarne) rakubioloogia . Uuritakse raku organelle: tuum, ribosoomid , mitokondrid , lüsoosoomid jne. Kui need rakkudest eraldada, ei kanna nad enam elu tunnuseid. Organellide koostööst tulenevad rakkude omadused.
3)RAKU tase – rakubioloogia, tsütoloogia . Uuritakse nii eukarüootseid kui ka prokarüootseid rakke. Rakk on elu esmane organiseerituse tase, kus ilmnevad kõik elu omadused.
KOE tase - histoloogia, arengubioloogia /embrüoloogia. Inimesel põhikoed: epiteel -, lihas-, närvi- ja sidekude. Taimede koed : tugi-, juht- katte, põhikude). Rakkude ehitus ja talitlus on kooskõlas vastavate kudede ja organite talitlusega. Sarnase ehituse ja talitlusega rakud moodustavadki koe.
ELUNDI tase – ERI KOED moodustavad ELUNDID e. ORGANEID (anatoomia, füsioloogia ). Organitest moodustuvad ELUNDKONNAD e. ORGANSÜSTEEMID (füsioloogia) . Elundkond on samuti elu organiseerituse üks tase.
ORGANISMI tase – organism talitlus sõltub tema elundite(kondanse) koostööst, regulatsiooniga tagatakse sisekeskkonna stabiilsus, neuraalne regulatsioon , humoraalne regulatsioon. Organismid koos omakorda moodustavad
POPULATSIOONIDES taseme – ühel asustusalal elavad sama liiki organismid. ( Kadrioru oravad, Peipsi kilud)
LIIGI tase – üks peamisi. Uurib, mis on ühe konkreetse liigi eripära ( pruunkaru , valgejänes)
ÖKÖSÜSTEEMI TASE – organismid + keskkond (st ümbritsev elus- ja eluta lodus – ökoloogia ). Nt taimekooslus, loomakooslus , muldkeskkond.
Ühisel territooriumil omavahel toitumissuhetes olevad organismid – Kogu ELU KÕRGEIM TASE – BIOSFÄÄR , hõlmab kogu Maad ümbritsevat elu sisaldavat kihti. ( atmosfäär , litosfäär, hüdrosfäär )
Suhkrute lühiiseloomustus
Süsivesikud ehk sahhariidid on orgaanilised ühendid, mis sisaldavad süsinikku,
hapnikku ja vesinikku. Sahhariidide peamisteks ülesanneteks on:
Energeetiline funktsioon – esmane energiaalikkas (1g sahhariidi lagundamisel vabaneb 17.6 kJ energiat)
Struktuurne ehk ehituslik funktsioon – tselluloos taimerakukestades, kitiin lülijalgsete toestes
Varuaine ülesanne – glükogeen loomades , seentes ning tärklis ja inuliin taimedes
Kaitsefunktsioon – süsivesikud kaitsevad organismi ärakülmumise eest
Ligimeelitamise funktsioon – õige magus nektar meelitab putukaid ligi.
Süsivesikud
jaotuvad kolmeks (nii mono - kui ka oligosahhariide kutsutakse
suhkruteks, kuna nad on magusamaitselised )
Monosahhariidid ehk lihtsuhkrud
- koosnevad enamasti 3 kuni 6 süsinikust.
- Neist tähtsamad on viiesüsinikulised riboos ja desoksüriboos , mis kuuluvad nukleiinhapete koostisesse.
- Lisaks on olulised kuuesüsinikulised glükoos ehk viinamarjasuhkur ja fruktoos ehk puuviljasuhkur, mis mõlemad on olulised makroenergilised molekulid, mida organismid kasutavad oma elutegevuseks.
Oligosahhariidid
- moodustunud kahe- kolme monosahhariidi ( disahhariidid ) ühinemisel.
- Näiteks sahharoos (roo-ja peedisuhkur), mis on moodustunud glükoosi ja fruktoosi ühinemisel, maltoos ehk linnasesuhkur , mis on moodustunud kahest glükoosijäägist ja laktoos ehk piimasuhkur , mis on moodustunud glükoosist ja galaktoosist. Neid suhkruid kasutatakse samuti peamiselt energia saamiseks.
Polüsahhariidid
- on kõrgmolekulaarsed orgaanilised ühendid, mis koosnevad monosahhariidide lülidest ehk monomeeridest.
- Tuntumad polüsahhariidid on tärklis, mis on fotosünteesi käigus sünteesitud glükoosi varu (talletunud tärklise kujul), tselluloos, samuti sünteesitud glükoosist ning mis on taime rakukesta ja tugikoe rakkude peamine koostisosa , kitiin, lülijalgsete välisskeleti ja seente rakukesta peamine koostisosa, ja glükogeen, loomne tärklis, mida sälitatakse glükoosivarudena maksas ja lihastes.
Lipiidide iseloomustus
Lipiidid on hüdrofoobsed ehk vees mittelahustuvad orgaanilised ained ( õlid , rasvad , vahad). Lipiidid koosnevad alkoholist ja rasvhappejääkidest.
- Lihtlipiidid – neutraalrasvad, mille alla kuuluvad taimsed vedelad rasvad ( rapsiõli ), tahked loomsed rasvad ( pekk ) ja vahad, mis on nii taimsed (puuviljade vahakiht), kui ka loomsed (mesilaste kärjed)
- Liitlipiidid ehk fosfolipiidid – rakumembraani koostises, üks rasvhappejääk on asendunud fosfaatrühmaga.
- Tsüklilised lipiidid ehk steroidid – tsükliliste alkoholoide ja lipiidide estrid , mis ei lahustu vees.
Lipiidide
ülesanded:
- Energeetiline – 1 g lipiidi lagundamiel saadakse 38,9 kJ energiat
- Struktuurne ehk ehituslik ( rakumembraan koosneb fosfolipiidsest kaksikkihist.
- Varuaine funktsioon
- Kaitsefunktsioon (siseorganite ümber olev rasvkoe kiht kaitseb põrutuste eest, nahaalune rasvkude ärakülmumise eest, lindudel kaitseb märgumise eest)
- Ainevahetuslik funktsioon – lipiidide täielikul oksüdatsioonil moodustuvad süsihappegaas ja vesi (metaboolse vee teke). Iseloomulik kaamlile .
- Bioregulatoorne funktsioon (hormoonid, östrogeen, testosteroon jne)
Aminohapped ja valgud
Aminohape – orgaaniline
ühend, mis sisaldab karboksüülrühma (COOH) ja aminorühma (NH2).
Kakskümmend peamist aminohapet on võimelised peptiidsidemeid
moodustades „kasvama“ valkudeks.
Asendamatud
aminohapped-
aminohapped, mida inimese organism ei suuda ise toota. Asendamatuid aminohappeid on täiskasvanul inimesel 8, lastel 10.
Aminohappeid
tähistatakse kolmetäheliste
lühenditega. Aminohapete omadused mõjutavad nende asukohta valgus
: laenguta on hüdrofiilsed ja asuvad valgu välispinnal;
Mittepolaarsed on hüdrofoobsed ja need valgu sisepinnal; aluselised ja happelised on polaarsed ja paiknevad valgu välispinnal.
Valgud
ehk proteiinid - inimese
elutegevuseks vajalikud polüpeptiidid, mis koosnevad
aminohappejääkidest. Valke on eelkõige vaja organismide
ülesehituseks, kaitseks, stabiilsuseks ja mteabolismi tagamiseks.
Valkude süntees toimub ribosoomides ( translatsioon )
- Lihtvalgud – valgud, mis koosnevad vaid aminohapetest ning on organismile kergesti omandatavad. (munvalge- albumiin )
- Liitvalgud – valgud, mis koosnevad valgulistest ja mittevalgulisest osast. ( hemoglobiin –rauda sisaldav valk)
Polüpeptiid –
mitmest aminohappest koosnev aminohapete ahel ehk peptiidahel. Mitu
polüpeptiidi võib moodustada valgu molekuli.
Denaturatsioon –
valgu kõrgema struktuuri lagunemine madalamat järku struktuuriks
(muna keetmisel munavalge tahkub). Vastupidine on renaturatsioon (juuksed
tõmbavad pärast sirgendamist mingi hetk uuesti lokki)
Ensüüm – valgulise
ehitusega katalüsaator , mis kiirendab biokeemilisi reaktsioone
kehas.
Valkude
ülesanded:
- Ensümaatiline (reguleerivad reaktsioonide kiirust – amülaas lagundab tärklist )
- Stuktuurne (küüned, karvad , kõõlused , suled)
- Kaitsefunktsioon ( antikehad , verehüübimisvalgud)
- Varuaine (munavalge)
- Energeetiline – eraldub 17,6 kJ
- Transpordi funktsioon (hemoglobiin transpordib hapnikku)
Nukleiinhapte lühiiseloomustus
Nukleiinhapped
– biopolümeerid , mille monomeerik on nukleotiid . Nukleotiid
koosneb fosfaatfühmast, suhkrujäägist (desoksüriboos, riboos) ja
lämmastikalusest (A, U, G, C)
- DNA esmane struktuur - nukleotiidijääkide hulk ja järjestus DNA üksikahelas. Üksikahelaline DNA esineb rakus sünteesiprotsessides ja teatud viirustes.
- DNA sekundaarstruktuur - DNA levinuim esinemisvorm. ( biheeliks ja kaksikspiraal)
- DNA tertsiaalstruktuur - tekib DNA ja valkude koosmõjul. DNA + valgud = kromosoomid .
REPLIKATSIOON (DNAlt DNA)
TRANSKRIPTSIOON (DNAlt mRNA ja rRNA)
TRANSLATSIOON
(mRNAlt VALK)
DNA ja RNA erinevused
Tunnus
DNA
RNA
1) monomeer
desoksüribonukleotiid
ribonukleotiid
2)sahhariid
desoksüriboos
riboos
3)N-alused
A=T, G=C
A=U, G=C
4)struktuur
biheeliks , so kaks ahelat , mis on kruvikujuliselt keerdunud
üks ahel
5) klassid
tRNA, rRNA, mRNA jt
6)ülesanne
päriliku informatsiooni säilitamine ja edasiandmine
pärilikkuse realiseerimine
7)leidmine
tuumas, mitokondrites, kloroplastides
tuumas, mitokondrites, kloroplastides, ribosoomis, tsütoplasmas
Kolm põhilist RNA klassi. Nende funktsioonid
mRNA (informatsiooni RNA) – päriliku info ülekannu rakutuumast ribosoomidesse. mRNA sünteesitakse ühe DNA ahela järgi. Toob geneetilise info rakus asuvatest kromosoomidest tsütoplasmas asuvatesse ribosoomidesse.
tRNA (transpordi RNA) – mRNA poolt saabunud info lahtimõtestamine. Aminohapete transportimine tsütoplasmast ribosoomidesse. Toovad „õiged“ aminohapped ribosoomidesse ja lülitavad need valgusünteesiahelasse (tRNA antikoodon). Iga tRNA suudab siduda ainult ühte aminohapet.
rRNA (ribosoomi RNA) – valkude süntees ehk translatsioon ribosoomides (mRNA nukleotiidse järjestuse põhjal luuakse vastava aminohappelise järjestusega valk)
Prokarüootsete ja Eukarüootsete rakkude peamised erinevused
Prokarüootsed e eeltumsed rakud
Eukarüootsed e päristuumsed rakud
1)tüübid
bakterid
taimede, loomade, seente rakud ja protistid
2)tuum
puudub, selle asemel on tuumapiirkond
on kahemembraaniga ümbritsetud tuum
3)tuumamebraan
puudub
on olemas
4)DNA
DNA hulk on väiksem, on üks rõngaskromosoom. Histoonid puuduvad
DNA´d on rohkem, on lineaarsed kromosoomid
Histoonid
5)sisemembraanistik(tsütopalsma-võrgustik, organellid )
puudub
on arenenud
6) tsütoplasma
jäik ja liikumatu
vedelam ja liikuv
Raku- ja rakutuumamembraani lühiiseloomustus
Rakutuumaümbris
koosneb kahest membraanist. Membraanides paiknevad poorid , mille
kaudu toimub ainete liikumine tuuma sisemusse ja sealt välja.
Ehituselt on tuumamembraan sarnane rakumembraaniga.
Rakumembraan
ehk tsütoplasma membraan -
rakku ümbritsev membraan, mis eraldab rakku väliskeskkonnast.
Koosneb kahes kihis paiknevatest fosfolipiidide molekulidest ehk
fosfolipiidsest kaksikkihist. Membraani välispinnal paiknevad ka
korrapäratult erinevaid ülesandeid täitavad valgud.
Ülesanded:
- Annab rakule kuju ja kaitseb rakku laialivalgumise eest
- Kaitseb rakku väliskeskkonna halbade tegurite eest
- Reguleerib aine-, info- ja energiavahetust ( difusioon , osmoos) raku ja väliskeskonnavahel ( integraalne valk- membraani läbiv valk, üks ots ühelpool ja teine väljaspoolmembraani nt transpordivalk)
Membraansete organellide ehitus ja funktsioon
Mitokondrite ja kloroplastide ehitus ja funktsioon
Mitokonder
on ümbritsetud kahe membraaniga
Sisemembraan
moodustab arvukaid kurde ja sopistusi, mida nimetatakse
harjakesteks..
Seal
leidub mitokondrile omaseid DNA ja RNA molekule. Mitokondri DNA
sisaldab geneetilist infot organellille vajalike RNA ja valkude
sünteesiks.
Valke
sünteesitakse mitokondri sees olevates ribosoomides.
Strooma – kloroplasti poolvedel sisemus, milles on lahustunud valgud.
Tülakloidid
ehk lamellid –
kloroplasti sees asuvad membraanidest moodusised, mis paiknevaid
üksteisega kohakuti.
Lisaks
sellele on kloroplasti sisemuses DNA, RNA ja valgu molekule. DNA omab
pärilikku infot kloroplastile omaste RNA ja valkude sünteesiks. Kloroplast sisaldab ka ribosoome, mis sünteesivad sellele
organellile vajalikke valke.
Tsütoskeleti funktsioonid
Tsütoskelett koosneb niitjatest valkudest. Ta moodustab tsütoplasmas võrkja
struktuuri, mis ühendab rakumembraani, tuuma välismembraani,
tsütoplasmavõrgustiku ja enamiku rakuorganelle. Tsütoskelett on
raku tugi- ja liikumissüsteem (hoiab organelle õigel kohal,
säilitab kuju ja vormi). Tsütoskelett aitab kaasa rahu
paljunemisele.
Bakteriraku ehitus
Nukleoid – tuumapiirkond,
kus paiknevad DNA ja sellega seostuvad valgud.
Haploidne kromosoomistik Bakterirakutuumapiirkonnas
on üks rõngakujuline kromosoom .
Rakumembraan
ehk plasmamembraan – katab
bakteriraku tsütoplasmat
Kapsel -
kaitsefunktsioon välismõju eest
Vibur –
aitab rakul liikuda
Piilid –
aitab kinnituda
Spoorid
–
moodustuvad bakteritel ebasootseta tingimuste üleelamiseks
Plasmiidid (DNA väike rõngasmolekul) –selle
asetsevad geenid , mis aitavad bakteril nt antibiootilises keskonnas
omandada resitentsust.
NB!
Bakteritel
puuduvad mitokondrid, plastiidid , tsentrioolid , tsütoplasmavõrgustik,
Golgi komspleks, lüsosoomid .
Rakukest (NB! Taimerakk !!!)
- Koosneb tselluloosist, ligniinist ja pektiinist.
- Noorel rakul on õhuke, vananedes pakseneb
- Poorid – nende kaudu toimub ainevahetus
- Funktsioonid :
- Kaitseb välismõjude eest
- Annab taimerakule kindla kuju ja tugevuse, taimele püstise asendi
- Kaitseb rakku siserõhu (tugori) eest.
- Rakukestal ka transportfunktsioon ( juhtkimpude võrgustik)
Eukariootide riigid ja nende peamised tunnused
Riik
Taimed
Loomad
Protistid
Seened
Toitumine
autotroofsed
Heterotroofid
Nii autotroofid kui ka heterotroofid
Heterotroofsed: Sapotroof (surnud orgaaniline aine) ja biotroof (teised organismid)
Eripära
Kloroplastid , kromoplastid, tsentraalvakuoolid, rakukest (tselluloos)
Enamasti üherakulised
Elavad niisketes paikades
Rakukest koosneb kitiinist
Tsütoskelett puutub
Varuaine
Tärklis
Glükogeen
-
Glükogeen
Seenerakk
Seeneraku
tsütoplasmas on samad
organellid, mis on loomarakuehituses.
Kuna
seened on heterotroofse ehitusega, siis puuduvad
neil taimerakule omased plastiidid
ja vakuoolid.
Üherakulised
pärmseened on ümarad, aga hulkraksete seente hüüfe moodustavad
rakud on pikad ja silindrikujulised.
Seenerakk
on ümbritsetud membraaniga
(sarnaneb looma ja taimeraku omaga).
Membraanist
väljapoole jääb rakukest koosneb kitiinist.
Rakukest kaitseb, toestab rakku ja annab talle kindla kuju. Kuna
enamik seeni toitub kogu keha pinnaga, siis liiguvad vesi ja selles
lahustunud ained läbi rakukesta ja membraani tsütoplasmasse osmoosi
teel.
Seeneraku keskosas asub kahe membraaniga ümbritsetud
rakutuum.Tsütoplasmas paiknevad mitokondrid varustavad rakku
energiaga.
Taimerakk
Taimerakule
on iseloomulikud vakuoolid,
plasmiidid ja rakukest.
Mitokondrid
varustavad rakku energiaga,
mida on vaja tema elutegevuseks ja olemasolevate rakustruktuuride
säilitamiseks.
Hapnikku
tarbides muundavad nad süsivesikutes ja rasvades peituva energia
rakkudele kättesaadavaks
Tsütoplasma
on raku sees. See sisaldab rohkesti vett ning selles on lahustunud
orgaanilisi ja anorgaanilisi aineid, Rakumembraan
eraldab
rakku teistest rakkudest kui ka ümbritsevast keskkonnast.
Vakuool on
õhukese membraaniga ümbritsetud vee ja selles lahustunud ainete
mahuti.
Kloroplastid
on
plastiidid, milles toimub fotosüntees . Neis valmistatakse
orgaanilisi aineid, kasutades päikese energiat.
Rakukest
(koosneb tselulloosist) annab taimerakule tugevuse ja kuju.
Loomarakk. Loomsed koed
Epiteelkude – katab
kehapinda (naha pindmine osa) ja ümbritseb sise-organeid, rakud on
tihedalt üksteise kõrval, struktuur tugev. Kaitseb teisi kudesid keskonna-mõjutuste eest.
Lihaskude
–
aitab organismil teostada termoregulatsiooni ning liikuda. Koosneb
erilistest rakkudest, mis on võimelised mõõtmeid muutma (tõmbumine, lõtvumine)
Sidekude
–
kude, mis seob organismi tervikuks, kõige levinum ( veri , luu-ja kõhrkude ). Rakud asetsevad hajusalt, palju rakuvaheainet
Närvikude –
koosneb närvirakkudest, kannab edasi elektrilisi signaale ( erutus ).
Rakud on varustatud pikkade jätketega.
Kudede uuenemine: Rakkude jagunemine, suremine , tüvirakud , diferentseerumine
Kude
uuendatakse
tänu TÜVI-RAKKUDELE, mis jagunevad as-sümeetriliselt st üks tütarrakk kahest suudab edasi jaguneda, kuid teine tütarrakk asub
diferetsneeruma
ehk eristuma,
omandades antud rakutüübile spetsiifilsied tunnused (kuju,
funkstsiooni jne).
Vanad
rakud surevad programmeeritud rakusurma
ehk APOPTOOSI
käigus.
Tüvirakud
diferentseeruvad mingi kindla koe rakuks.
Rakkude
juures keskonnas asuvad spetsiifilised valgulised (kasvu) faktorid ja
signaalmolekulid suunavad
rakkude diferentseerumist
induktsiooni abil – näiteks lahustuv signaalmolekul indutseerivast
rakust seostub tüviraku rakupinna retseptorile, mis seejärel
omandab ensümaatilise aktiivsuse ja edastab signaali järgnevatele
molekulidele nende ensümaatilise modifitseerimie abil. Need omakorda
modiftseerivad järgmisi valke. Signaaliülekande raja (ahela)
viimane aktiveeritud lülivalk liigub tuuma ja osaleb antud rakutüübi
funktsioneerimiseks vajalike geenide ‘’sisselülitamises’’.
Tüviraku
potentsus (võime diferetseeruda eri rakutüüpideks) väheneb
diferentseerumise käigus järk-järgult.
Rakkudevaheline signaliseerimine
Rakud
kasutavad selleks, et omavahel signaale vahetada ning infot edasi
anda, seda on vaja nende protsesside kontrollimisel:
Rakkudevahelised signaalid jaotuvad järgmiselt: otsene (jukstakriinne), lühikese vahemaaga (parakriinne) nt neurontransmitterid, pikk vahemaa (endokriinsed) nt hormoonid, insuliin
Geenitehnoloogia mudelorganismid
Mudelorganism
on organism,
mida kasutatakse bioloogiliste protsesside uurimisel . Mudelorganismid kasvavad kiiresti, nendega on
lihtne ja odav töötada ning nad on laialdaselt kättesaadavad.
- Bakterid – E.coli ( soolekepike ), teiste bakterite viirused (oluline replikatsiooni, transkriptsiooni, translatsiooni uurimisel.
- Seened – pärm , filantsed seened
- Kõrgemad taimed – nisu, riis , müürlook (odav, kiire areng, hea genoom )
- Hulkraksed loomad
- Varbuss (vähe rakke – apoptoosi uurminie) , äädikakärbes (embrüo areng, pärilikkuse tunnuste pärandumine)
- Sebrakala (odav, hulkrakne , võimalikud geneetilised katsed, kerge embrüaalset arengut jälgida), hiir , rott
Mudelorganisme
kasutatakse:
- Eetilised põhjused – me ei tee katseid liigikaaslastega
- Majanduslikud põhjused – mudelorganismide kasutus ei tohi olla kallis
- Ajaloolised põhjused –mõni mudelorganism on osutunud domineerivaks
- Evolutsioonilised põhjused – mudelorganismid peaksid adekvaatselt peegeldama võimalikult paljude sugulasrühmade omadusi.
- Biomeditsiinilised – peegeldaksid erinevaid haiguseid ja nende tekkemehannisme.
DNA pakkimine, kromosoomide ehitus
Kromosoom
– eukarüootse raku tuuma element, mis koosneb ühest pikast kokkupakitud DNA
molekulist ja teda koos hoidvatest valkudest. Kromosoom asub
eukarüootse raku tuumas ning sisaldab kogu vajalikku informatsiooni,
mis on vajalik rakkude talituseks.
Kromatiin –
aine, millest koosneb kromosoom
Kromatiid – on
üks kahest kromosoomi osast, mis on tekkinud DNA jagunemise käigus.
Histoonid
– Valgud,
mille ümber on mässitud DNA ahelad , kaitsevad DNA-d ja aitavad seda
kokkupakkida.
Inimesel
on keharakkudes 44 autosoomi ja 2 sugukromosoomi (kas XX või XY)
DNA
pakkimine: DNA keerub ümber histoonide (DNA on mässitud ümber
histoonide) tekib nukleosoom , nukleosoomide keerdumsel tekib
kromatiin. Kromatiin keerdub omakorda -> tekib kromotiid. Ja
kromotiidist koosnem kromosoom.
DNA replikatsioon
Replikatsioon
–
ehk DNA süntees, mille käigus DNA kahekordistatakse ehk
duplitseeritakse. Replikatsioon on vajalik raku jagunemiseks, et uued
rakud saaksid võrdselt identsed DNAd.
Komplementaarsusprintsiip
– nukleotiidide
vastavus üksteisele. (A-T, C-G)
Etapid:
1. Ensüüm nimega helikaas lõhub DNA biheeliksi ning tekitab ahelate
lahtikeerdumise
2.
Ensüüm nimega DNA- polümeraas liitub ühe lahku läinud DNA ahelaga
- Sünteesib suunal 5’-3’ (DNA polümeraas)
- Juhtahel sünteesitakse pidevana, mahajääv ahel Okazaki fragmentidena (on vaja 3’OH otsa, mis tuleb RNA praimerist – seda sünteesib DNA primaas)
- Tühimikud täidab DNA polümeraas ja erifragmendid ühendab DNA ligaas
3.
Ensüüm nimega DNA-polümeraas sünteesib eraldunud DNA ahelatest
identsed DNA molekulid (komplementaarsusprintsiibi alusel.)
4.
Replikatsiooni viimases etapis valmivad sünteesid uued DNA molekulid
NB!
Replikatsioon toimub ->
raku tuumas, tuumapiirkonnas, mitokondrites ja kolorplastides.
Geen ja Genoom
Geen
– DNA
lõik(täieliku
nukleiinhappe järjestus), mis on vajalik funktsionaalse valgu- või
RNA molekuli sünteesiks.
Genoom
- ühes
liigiomases kromosoomikomplektis sisalduv geneetiline materjal ehk
sisuliselt siis DNA.
Transkriptsioon
Transkriptsioon
– protsess,
mille käigus kopeeritakse DNA geneeriline kood RNA
molekulile.
Promootor – DNA
järjestus, millelt algab transkriptsioon.
Terminaator – DNA
järjestus, mille juures lõppeb transkriptsioon
mRNA
transkriptsiooni etapid:
Ensüüm RNA polümeraas liitub DNA molekuliga ning keerab selle lahti.
Ensüüm RNA-polümeraas sünteesib DNA lõigust komplementaarse RNA molekuli.
preRNA, mis koosneb eksonitest ja intronitest
splaissingu teel lõigatakse intronid välja, jäävad ainult eksonid
Eksonitest moodustub küps RNA
Ensüüm RNA-polümeraas jõuab terminaatorpiirkonda.
DNA ahel suletakse ensüümide abil.
Geeni kopeerimisel valmib mRNA, mis viiakse rakutuumast välja ribosoomidesse. (lisaks võib luua ka tRNAd ja rRNAd )
NB!
Toimub rakutuumas , tuumapiirkonnas, mitokondrites ja kloroplastides.
mRNA erinevused prokaüootidel ja eukarüootidel
Prokarüootidel on geeni poolt
määratav esmane transkript võrdne mRNA-ga
ning ta on ka kohe transleeritav. Eukarüootides toimub
aga esmalt eellas- ehk pre-mRNA süntees,
misjärel toimub nn. eellas-mRNA protsessing küpseks mRNA-molekuliks.
Eukarüoodid :
Geenis
intronid, pre-mRNA läbib splaisingu, modifitseeritakse (5’cap ja
3’polüA-saba) ja eksporditakse tuumast tsütoplasmasse
Transkriptsiooniks
on vaja aktivaatorvalke
Promootorid
on keerulisemad
Üks
mRNA kodeerib eukarüootidel ainult ühtevalku, prok mitut.
Protsessitud
mRNA transporditakse tsütoplasmasse ning alles seal toimub
translatsioon. Erinevalt eukarüootidest, kus transkriptsioon ja
translatsioon on ajaliselt ja ruumiliselt teineteisest lahutatud,
toimuvad prokarüootsetes
rakkudes mõlemad protsessid korraga: parasjagu sünteesitavalt mRNA
molekulilt algab kohe ka translatsioon.
mRNA protsessing
mRNA
protsessing – pre
m-RNA süntees küpseks mRNA molekuliks.
Protsessing
toimub enne
translatsiooni!
Intronid
– mittekodeerivad
alad
Eksonid
– kodeerivad alad
Protsessingu
käigus lõigatakse intronid RNA-st välja. Selle tulemusel
ühendatakse omavahel kodeerivad eksonite alad. Intronite
väljalõikamist nimetatakse geeni splaissinguks.
Valku kodeerivate geenide pre-mRNA splaissingp
eab toimuma väga täpselt, et mRNA saaks kodeerida funktsionaalset
valku.
Intronite täpne
väljalõikamine peab toimuma nukleotiidi täpsusega,
vastasel juhul läheb lugemisraam paigast
ära.
Splaissingu läbiviimiseks
moodustub makromolekulaarne struktuur, mida
nimetatakse splaissosoomiks.
Kõik nimetatud protsessid toimuvad tuumas.
Protsessitud
mRNA transporditaksetsütoplasmasse,
kus ta transleeritakse.
Geneetiline kood
Igale aminohappele vastab DNA molekulis kolmest nukleotiidist koosnev
koodon
ehk triplett.
Geneetiline
kood – mRNA
nukleotiidide triplettide vastavus aminohapetele valgu molekulis.
Omadused:
universaalne, sünonüümne (ühel aminohappel mitu koodonit ),
ühetähenduslik (ühel koodonil ei ole mitu aminohapet) mittekattuv.
Initsiaatorkoodon
ehk alguskoodon – AUG
Sopp
ehk terminaatorkoodon – UGA,
UAA, UAG
Translatsioon, tRNA ja ribosoomide ehitus
Translatsioon
– ehk valgusüntees on tsütoplasmas
paiknevatel
ribosoomidel toimuv valkude tootmise protsess.
Valke
sünteesitakse aminohapetest.
Selleks,
et teada, missuguseid aminohappeid tuleb ritta seada, tuleb
erinevatel ensüümidel lugeda RNA molekulile kirjutatud koodi, kus
igale koodonile vastab üks aminohape.
Valgusüntees
algab alati initrsaatorkoodoniga.
Transplatsiooni
etapid:
Tuumast tsütoplasmasse sattunud mRNA kinnitub ribosoomile, kus ta jõuab initsaatorkoodonini. Seejärel jääb ta tRNA-d ootama, kes protsessi tõlkima hakkaks .
Selle jaoks, et tõlkida mRNA informatsiooni on vajalik tRNA molekulide olemasolu (mRNA-l on koodon, tRNA-l antikoodon). mRNA koodonis olev AUG ühineb initsaator-tRNA antikoodoniga UAC.
Süsteemi siseneb järgmine tRNA (mille küljes on uur aminohape) ning ensüümide abil sünteesitakse aminohapete vahel peptiidside. Seejärel esimene tRNA lahkub .
Järjest
liitub tekkiva ahelaga juurde tRNA abiga uusi aminohappeid.
Lõpuks jõutakse stoppkoodonini, sellega on sünteesimine lõppenud.
Seejärel eraldatakse komponendid ensüümi abiga ning on valmis moodustunud valgu primaarstruktuur .
Translatsiooniga valmib valgu primaarstruktuur, valgu lõplik ruumiline struktuur oleneb tema aminohappelisest järjestusest. Valk pakitakse kokku kõrgemat järku struktuuriks ja modifitseeritakse Golgi kompleksis.
Ribosoomid
– neis
puuduvad membraanid, sisaldavad rRNA ja valgumolekule. Ribosoomides
toimub vlgu süntees. Leidub tüsotplasmas ja tsütoplasmavõrgustikus
tRNA
molekuli sekundaarstruktuur on ristikheinakujuline. tRNA molekuli
otste paardumisel tekkiv kaksikahelaline osa on „ akseptor -õlg“.
Sellele 3’ otsaga paardumata nukleotiidile liidetakse estersidemega
aminohape.
Valgusünteesi regulatsioon (Vt. Pikemalt translatsiooni alt)
- Toimub ribosoomis.
- Osalevad mRNA, tRNA ja rRNA.
- mRNA seostub ribosoomiga.
- Translatsioon algab alguskoodoniga AUG.
- Komplementaarse antikoodoniga tRNA toob esimese (kindla) aminohappe ribosoomi.
- Teine tRNA mahub ka koos oma aminohappega ribosoomi.
- Kahe aminohappe vahele tekib tugev peptiidside
Translatsioon
lõpeb stoppkoodonitega
32,
Ribosüümid ja RNA maailm
Ribosüüm on ribonukleiinhape ,
millel on katalüütilised omadused.
Ribosüümid on ensüümid ,
mis aga ei koosne polüpeptiididest,
nagu enamik ensüüme, vaid polünukleotiididest.
Ribosüüm-
ensüüm, mis ei ole valguline, aga koosneb RNA ahelatest.
Seda
peetakse ensüümiks, sest ribosoomi koosseisu kuuluv rRNA sünteesib
valgusünteesi käigus peptiididemeid aminohapete vahel.
Arvatakse
et RNA oli DNA eellane.
Arvatakse, et olles üheahelaline ja võimeline moodustama
mitmesuguseid tertsiaarstruktuure, võis kunagi olla ensümaatilise
aktiivsusega ja katalüüsida ise enda replikatsiooni. Esmase info kandjaks olid RNA molekulid. 1982 a leiti, et on olemas RNA, millel
on katalüüsi võime, mida nimetati ribosüümiks.
Geeniekspression ja selle regulatsioon
Geeniekspressioon ehk geenide avaldumine
on mitmetasandiline protsess, millesse on seotud kõik valgusünteesi
etapid.
Leidub
4 tüüpi geene:
- Geenid, mis avalduvad kõikides rakkudes
- Geenid, mis avalduvad ühe kindla koe rakkudes
- Geenid, mis avalduvad mingil kindlal eluetapil
- Geenid, mis ei avaldu kunagi
Regulaatoraine/valk
– reguleerib
transkriptsiooni ehk mRNA sünteesi. Regulaator võib
transkriptsiooni kas aktiveerida või represseerida. Nt hormoonid, vitamiinid
Repressor – transkriptsiooni
takistav valk, mis ei lase RNA polümeraasil kinnituda promootorile
Aktivaator
– transkriptsiooni
soodustav valk, mis aitab RNA polümeraasil promootorile kinnituda.
Struktuurigeenid
-
kodeerivad kõiki RNA või valgumolekule, v.a regulaatoraineid
Näiteks hemoglobiin
Regulaatorgeenid – geenid,
mis kodeerivad eelkõige regulaatorelemente. Regulaatorgeenide abil
on võimalik regulaatorite hulka reguleerida, millega omakorda on
võimalik reguleerida struktuurigeenide avaldadumist.
Ebaõige
geeni avaldumine või rakule vajaliku geeni mitteavaldumine võib
kaasa tuua suuri muutusi raku ehituses ja talitluses. Sünteesitakse
näiteks rakuvõõraid valke või pidurdub normaalsete rakkude
ainevahetus.
Vähkkasvajate
teke on
põhjustatud geeniregulatsioonihäiretest, mis võivad tulla
genotüübi iseärasusest, olla tingitud keskkonnateguritest või
mõlema koosmõjust.
Geeniekspressiooni regulatsioon, sarnasused ja erinevused prokarüootidel ja eukarüootidel
Eukarüootidel:
- Regulatoorsed valgud on transkriptsioonifaktorid (TF).
- TF seostudes teiste geenide cis elementidega reguleerivad nende geenide ekspressiooni: “trans- acting ” faktorid.
Prokarüootidel:
- Operon koosneb: struktuurgeenid , promootor, operaator (DNA järjestus, millele seostub repressorvalk, et kõrvalpaiknevate struktuurgeenide transkriptsiooni inhibeerida) ja muud regulatoorsed järjestused
- Regulatoorsed valgud on sigma-abifaktor: soodustab RNA-Pol seostumist kindlatele DNA järjestustele, aktivaator: seostub DNAga, soodustab transkriptsiooni initsiatsiooni, repressor: seostub operaatoriga ja takistab initsiatsiooni = negatiivne regulatsioon.
Ühisjooned :
- Polütsistroonsed geenid, st mitmed sarnase funktsiooniga geenid on paiknevad koos ja reguleeritakse ühiselt --- operon.
- Geeni regulatsioon on peamiselt negatiivne, vahendatud repressorvalkude kaudu. Alles induktori seostumine repressoriga inaktiveerib viimase ja võimaldab ekspressiooni.
- regulatsioon toimib läbi paljude cis-acting elementide ja trans-acting faktorite vaheliste seoste.
- mitte-kovalentsed
Lac ja Trp operonid, nende reguleerimise sarnasused ja erinevused
Lac
operon oli esimesena avastatud operon, selle põhjal saab kirjeldada
tüüpilise operoni funktsioone. See koosneb kolmest järjestikusest
struktuurgeenist, promootorist, terminaatorist ja operaatorist. lac
operoni reguleeritakse mitmete faktoritega, seal hulgas glükoosi ja
laktoosi esinemisest keskkonnas. See
on näide derepressioonist ehk negatiivselt indutseeritava operoni
mudelis
Trp-operon
- trp operon on konstitutiivne, ekspresseerub pidevalt.
- trp operon kodeerib Trp (aminohape trüptofaan) sünteesiraja 5 ensüümi
- trp repressor avaldub, kuid ei seostu ise operaatoriga.
- Kui [Trp] on kõrgem kui rakul vaja, moodustab repressor kompleksi Trp-ga. See seostub operaatoriga, blokeerides ekspressiooni (ja Trp sünteesi).
Cis-elemendid, trans-faktorid
Cis-acting
elemendid
– DNA järjestused, mis mõjutavad oma läheduses paikneva geeni
ekspressiooni. Eri
geenidel eri kombinatsioonid cis-elementidest
Trans-acting
faktorid
- transkriptsioonifaktorite
seostudes
teiste geenide cis-elementidega
reguleerivad
nende geenide ekspressiooni
Rekombinantse DNA metoodika alused
Rekombinantne
DNA on soovikohaselt muudetud DNA järjestus.
Rekombinantse
DNA same restrikaaside abil.
Metoodika
alused:
- E.coli rakkude transformatsioon võõrDNA-ga (ehk võõr-DNA viimine E.coli rakkudesse) – plasmiidid
- DNA molekulide lõikamine ja ühendamine - restriktaasid, ligaas
- analüüsimeetodid võõrDNA jälgimiseks - elektroforees , hübridiseerimine
Restriktaasid
Restriktaasid
- ensüümid , mis lõikavad DNA kindla järjestuse ära
(äratundmiskoht), tekivad iseloomulikud otsad . Äratundmiskohad on
sageli 4-8 pikkusega.
Restriktaasid
lõikavad DNA ahele läbi kindlas piirkonnas, see sõltub DNA
nukleeinhappelisest järjestusest. Kusjuures igal ensüümil on oma
„äratundmiskoht“.
Restriktaaside
abiga võime saada erinevaid DNA lõike – siduvate ja tömpide
otsadega. Siduvate otstega fragmendid on ühekordsete ahelatega ning
neid saab taas omavahel liita.
Restriktaase
toodavad bakterid enesekaitseks, purustades erinevaid DNA ahelaid,
jättes sellele „kleepuvad otsad“. Need jupid liidetakse uuesti
komplementaarsuseprintsiibi kohaselt. Erinevate DNA lõikude
liitmisel saame rekombinantse DNA.
Plasmiidid
Plasmiidid
– bakteris
asuvad DNA väikesed rõngasmolekulid, millel on põhiliselt
ainevahetuslik tähtsus.
Plasmiidid
sisaldavad geene, mis on vajalikud bakteri kasvukeskkonna eripärast
tulenevate ensüümide
sünteesiks.
Need aitavad lagundada ümbritsevas keskkonnas leiduvaid orgaanilisi
aineid. See on vajalik toitumiseks, aga ka elutegevuseks kahjulike
ainete lagundamiseks või nende toime vältimiseks
Plasmiidid
sisaldavad geene, mille põhjal sünteesitud valgud aitavad
bakteritel antibiootikumi
keskkonnas ellu jääda.
Rekombinantse
DNA puhul peab plasmiidil olema replikatsiooni origin,
resistentsusmarkergeen (et oleks antibiootikumi suhtes resistentne)
ja kloneerimise võimaldamiseks restiktaasi lõikamiskoht (et saaks
plasmiidi lahti lõigata)
DNA kloneerimine
DNA
kloneerimine- ühesuguste plasmiidide koopiate tegemine bakteri paljunemise
tulemusena.
Geeni
paljundamise põhietapid plasmiide abiga on järgmised:
1)
plasmiidi isoleerimine bakterirakust (tavaliselt kasutatakse E. coli
plasmiide);
2)
plasmiidi "lõikamine" spetsiifilise restriktaasiga;
3)
paljundatava geeni vôi DNA-lôigu "väljalõikamine"
kromosoomist sama restriktaasiga- s.o. geeni
isoleerimine;
4)
isoleeritud geeni " istutamine " plasmiidi
5)
plasmiidi viimine bakterirakku ja bakteri kasvatamine , mille käigus
paljuneb ka vastav plasmiid.
6)
paljundatud geeni isoleerimine plasmiididest
DNA sekventeerimine
DNA sekveneerimine -
DNA nukleotiidse järjestuse kindlaks tegemine.
Ensümaatilise
meetodi puhul kasutatakse DNA-polümeraasi abil toimuva topeltahela
sünteesi blokeerimist kindla nukleotiidi kohal. Tulemuseks on
erineva pikkusega fragmendid, mille elektroforeesil joonistub välja
DNA molekuli NH järjestus, need saab siis tuvastada.
Polümeraasi ahelreaktsioon
PCR
viiakse
läbi biokeemilise reaktsioonina ja selle puhul ei vajata
elusorganisme DNA kopeerimiseks. Reaktsioon pôhineb ensüümi-
DNA-polümeraas kasutamisel ,
mis katalüüsib DNA komplementaarse ahela sünteesi. PCR on
DNA-molekuli paljundamine kunstlikes tingimustes.
Reaktsiooni
läbiviimiseks on vajalik teada uuritava DNA lõigu otste
nukleotiidset järjestust.
Reaktsiooni
käivitamiseks kasutatakse kahte oligonukleotiidset (väiksest arvust
nukleotiididest koosnevat (8..30) praimerit (ingl. k.
primer),
mis kumbki vastavad ühe komplementaarse DNA ahela alguse
nukleotiidsele järjestusele ja talitlevad kui ensüümi substraat ,
kuna neil on vabad otsad uute nukleotiidide sidumiseks.
PCR
pôhietapid on
järgmised:
topeltahelalise DNA denaturatsioon kaheks üksikahelaks kôrge temperatuuriga (90-95 °C; 40-60 sek);
praimerite hübridiseerimine e. "istutatamine" kummalegi üksikahelale, milleks temperatuur viiakse alla ca 50 °C juurde 30 sekundiks ehk praimerite paardumine.
komplementaarse DNA ahela süntees DNA-polümeraasi toimel (72 °C juures aeg sôltub lôigu pikkusest, kuid ca 1-3 min). Ensüüm on termostabiilne ja on isoleeritud kuumavee allikates elavatest bakteritest (näit. Thermus aquaticus ja temalt saadud ensüümi nimetatakse TaqI).
Kuna
ahelreaktsiooni etapid toimuvad erineva temperatuuri juures, siis on
kogu protsess juhitav temperatuuri abil ja vastavaid tsükleid vôib korrata kümneid kordi . Igas tsüklis DNA hulk teoreetiliselt
kahekordistub. Praktiliselt hilisemates tsüklites on reaktsiooni
efektiivsus väiksem, kuna ensüümi aktiivsus langeb, samuti lôpevad
otsa vabad nukleotiidid. Neid juurde pole aga vôimalik lisada.
PCR-i
saab kasutada ka diagnostilisel eesmärgil: teatud DNA vôi RNA
järjestuse (viiruste vôi bakterite) avastamiseks uuritavas
materjalis vôi näiteks geenidefektide avastamiseks genoomis. Tema
tundlikkus on teoreetiliselt selline, et kui uuritavas materjalis on
üks DNA- molekul , mille järjestus ühtub materjalile lisatava
praimeriga, siis me selle ka avastame. PCR- on kôrvaletôrjumas DNA
sondide meetodit geneetiliste haiguste uurimisel,
viirusinfektsioonide tuvastamisel ja mikroobide tüpiseerimisel.
Elektrofrees
Elektroforees
on elektriliselt laetud osakeste liikumine vedelikus
elektrivälja
mõjul: positiivsed osakesed katoodile
ja negatiivsed osakesed anoodile.
Elektroforees
on meetod, kus laetud osakesed liiguvad elektrijuhtivust omavas
vedelas keskkonnas elektrivälja mõjul.
Geel-elektroforees
- DNA kaksikahel liigub geelis elektriväljas kiirusega, mis on
pöördvõrdeline log10–ga
tema massist ( suurusest ).
Nukleiinhapete hüdrediseerimine
Kindla
NA järjestuse tuvastamine NA molekulide segust kasutates komplementaarsusel põhinevat üksikahelate paardumist.
- Geelis lahutatud DNA/RNA kantakse üle ( nailon )membraanile, nii et nad oleksid üksikahelad
- Meid huvitav järjestus märgistatakse radioaktiivselt vm meetodil ( proov )
- Lastakse üksikahelatel omavahel paarduda.
- Mitteseostunud proov pestakse maha ja NA asukoht tuvastatakse märgise järgi.
Kromotograafia valkude puhastamisel
3 etappi :
Valgu lahusesse viimine ja esmane fraktsioneerimine
Kromatograafiline puhastamine
Lõplik „poleerimine“
Praktikas
kantakse ainete segu läbi sorbendi (liikumatu faas) sobiva vedeliku
või gaasi vooluga (liikuv faas). Segu komponentide spetsiifilise
sorptsiooni ja desorptsiooni tulemusena toimub nende jaotumine
liikumatu ja liikuva faasi vahel vastavalt jaotuskoefitsientidele
ning nende aktide paljude korduste tagajärjel komponendid liiguvad
edasi erinevate kiirustega. See viib ainete lahutumisele ning
moodustuvad kiiremini ja aeglasemalt liikunud komponentide tsoonid.
Protsess teostatakse kas kolonnis , kapillaaris, paberil või plaadil.
Lahutunud komponendid detekteeritakse füüsikaliste või keemiliste
meetoditega.
Valkude strukutuuri ja fukntsiooni (valk-valk) interaktsiooni meetodid
Valgu
molekulaarse struktuuri võib
määrata tuumamagnetresonantsi
abil
Valgu
funktsioonide üle võib otsustada tema järjestuse võrdlemisel mõne
tuntud funktsiooniga valgu järjestusega
Affiinsuskromatograafia
ja immunosadestamine võimaldavad
leida seostunud valke
Valgu
funktsiooni uurimisel võib kasutada liitvalke (fusion proteins),
samuti võib nende abil valku rakus lokaliseerida.
47.Antikehad
ja liitvalgud
Antikehade
kasutamine molekulaarbioloogias Flourentsmikroskoopia: Väga laialt
on levinud rakubioloogias nn. immuunfluorestsentsi meetod, mis
põhineb fluorestseeruvat värvainetega konjugeeritud antikehade
kasutamisele. Enamlevinud fluorokroomidena antikehade märgistamiseks
kasutatakse FITC (fluorestsiin-isotiotsüanaat), TRITC
(tetrametüül-rodamiin- isotiotsüanaat ) PE (fükoerütriin) jt.
Fluorestsentsmikros-koobis on valgusallikaks elavhõbedalamp, mis
annab lühilainelist kiirgust (paljudel
lainepikkustel).
Immuunfluorestsents: Elavhõbedalambiga
valgustatakse helendavate värvainetega märgistatud antikehasid.
GMO
Organism(id),
mille DNA on muudutud/modifiteseeritud insenergeneetiliste
meetoditega selleks, et saada soovitud omadusetga (nt
putukatest-kahjurloomade suhtes resitentseid – Immuunseid) nt
põllumajandusele kasulikke taimi.
Transgeensed
organismid
on need, kelle genoomi on siirdatud mõne võõrliigi geene, mis neis
avalduvad ja järglastele päranduvad.
On
olemas ka geeninokaut, mis tähendab seda, et mingi geen on
vaigistatud (huvipakkuv geen), tegelikult siis 2 sarnast ala vahetatakse ära)
Viiruste peamised klassid
Viirus – eluta
ja elusa looduse vahepealsel tasemel levad rakulise ehituseta
organismid. Viirus on aktiivne vaid peremeesrakus, paljuneb vaid
elusates rakkudes. Viirus tungib peremeesrakku, korraldab ümber raku
ainevahetuse oma genoomi ja viiruvalkude paljundamiseks.
Viirustegasaab
ka ülekanda soovituid geene
Vastavalt
nukleiinhappele genoomis eristatakse DNA ( herpes , tuulerõuged ) ja
RNA viirusi (puukeentsefaliit) Mõlemad (B hepatiit , nakatumine HI
viirusesse ehk HIV).
HIV molekulaarbioloogia
HIV
on retroviirus , mis tähendab seda, et DNA asemel sünteesib viirus
hoopis RNA. Retroviiruste puhul on unikaalne see, et pole DNA
replikatsiooni, on ainult RNA pöördreaktsioon.
HIV epdemiloogia ja mehhanismid
Hiv
levib seksuaalkontakti teel ( kehavedelikud ), verer kontaktiga, emal
lapsele (rinna piima kaudu).
Haiguse
kulg:
Inimene nakatub haigusega ning HIV hakkab organismi kaitsevõimet nõrgestama
Esimese kahe nädala jooksul hakkab inimene end nõrgestatuna tundma (sarnaneb külmetusele).
Organism hakkab haiguse vastu tootma antikehasid, mis vähendavad veidi viiruse hulka kehas. Selle tagajärejel võib inimene end tunda täiesti tervena , kuid HIV jätkab organismi hävimist.
Järgmises etapis, milleni võib kuluda nädalaid /aastaid, olenevalt organismis, on väljakujunenud AIDS(omandatud imuunpuudulikuse sündroom ), mille tagajärel on immuunsüsteem niivõrd nõrgenenud, et organism nakatub kergesti erinevatesse haigustesse .
Nakatada
saab ainult HIV, AIDS on nö haiguse lõppfaas, mis kulmineerub
kõigil erinevalt.
HIV vastase ravi võimalusi
Pidev
antiretroviirusravi pidurdab viiruste paljunemist, kaks inimest
maailmas on HIV infektsioonist vabanenud, kuid siinkohal tuleb
tähelepanu pöörata sellele, et HIV reservuaarid jäävad alles ja
viirus võib tagasi tulla, seetõttu tuleb ravimeid elu lõpuni
võtta.
1. Bioteaduse metoodika
Loodusseadused on teaduslike faktide üldistused, mis võimaldavad samaaegselt selgitada mitmeid loodusnähtusi. (Teaduslik teadmine tekib siis, kui mitu uurijat jõuab ühesugusekatsejärel sama tulemuseni).
Ühe teadusharu piires kogutud teadmised ja avastatud loodusseadused moodustavad teadusliku teooria. Pädeva teadusliku teooria alusel on võimalik ennustada nähtusi/fakte, mida hiljem saab tõestada eksperimentaalselt.
Hüpotees peab olema faltsifitseeritav (tõetatakse/lükatakse ümber)
Bioteaduste uurimisobjektid pärinevad loodusest : biomolekulid, rakud, organismid, populatsioonid, liigid, ökosüsteemid. Kasutatavad meetodid jaotatakse : vaatlus, võrdlus (võrdlev anatoomi, geenijärjestuse võrdlus), katse (kui muudetakse üht tingimust ja võrreldakse tulemusi nii muudetud kui muutmata tingimustega katse puhul)
1)Probleemi püstitamine
2)Taustinfo kogunemine
3)Hüpoteesi sõnastamine
4)Hüpoteesi kontrollimine
5)Tulemuste analüüs ja järelduste tegemine
2. Eluslooduse organiseerituse tasemed
1) MOLEKULAARNE tase – molekulaarbioloogia, geenitehnoloogia, süsteemibioloogia . Esmane organiseerituse tase. Kõikjal, kus on elu, esinevad biomolekulid: sahhariidid, lipiidid, valgud, nukleiinhapped.
2) ORGANELLI tase – (molekulaarne) rakubioloogia. Uuritakse raku organelle: tuum, ribosoomid, mitokondrid, lüsoosoomid jne. Kui need rakkudest eraldada, ei kanna nad enam elu tunnuseid. Organellide koostööst tulenevad rakkude omadused.
3) 3)RAKU tase – rakubioloogia, tsütoloogia. Uuritakse nii eukarüootseid kui ka prokarüootseid rakke. Rakk on elu esmane organiseerituse tase, kus ilmnevad kõik elu omadused.
4) KOE tase - histoloogia, arengubioloogia/embrüoloogia. Inimesel põhikoed: epiteel-, lihas-, närvi- ja sidekude. Taimede koed: tugi-, juht- katte, põhikude). Rakkude ehitus ja talitlus on kooskõlas vastavate kudede ja organite talitlusega. Sarnase ehituse ja talitlusega rakud moodustavadki koe.
5) ELUNDI tase – ERI KOED moodustavad ELUNDID e. ORGANEID (anatoomia, füsioloogia). Organitest moodustuvad ELUNDKONNAD e. ORGANSÜSTEEMID (füsioloogia) . Elundkond on samuti elu organiseerituse üks tase.
6) ORGANISMI tase – organism talitlus sõltub tema elundite(kondanse) koostööst, regulatsiooniga tagatakse sisekeskkonna stabiilsus, neuraalne regulatsioon, humoraalne regulatsioon. Organismid koos omakorda moodustavad
7) POPULATSIOONIDES taseme – ühel asustusalal elavad sama liiki organismid. (Kadrioru oravad, Peipsi kilud)
8) LIIGI tase – üks peamisi. Uurib, mis on ühe konkreetse liigi eripära (pruunkaru, valgejänes)
9) ÖKÖSÜSTEEMI TASE – organismid keskkond (st ümbritsev elus- ja eluta lodus – ökoloogia). Nt taimekooslus, loomakooslus, muldkeskkond.
10) Ühisel territooriumil omavahel toitumissuhetes olevad organismid – Kogu ELU KÕRGEIM TASE – BIOSFÄÄR, hõlmab kogu Maad ümbritsevat elu sisaldavat kihti. (atmosfäär, litosfäär, hüdrosfäär)
Sarnased õppematerjalid
52
docx
Geenitehnoloogia I konspekt
UUED TEADUSLIKUD FAKTID
HÜPOTEES TÕESTATAKSE või LÜKATAKSE ÜMBER (e HÜPOTEES PEAB OLEMA
FALTSIFITEERITAV)
∨
PÄDEVA TEADUSLIKU TEOORIA ALUSEL ON VÕIMALIK
ENNUSTADA NÄHTUSI/FAKTE, MILLE OLEMASOLU HILJEM
EKSPERIMENTAALSELT TÕESTATAKSE
2. Elu organiseerituse tasemed
- MOLEKULAARNE tase – molekulaarbioloogia, geenitehnoloogia, süsteemibioloogia
(BIOMOLEKULID ainult ELUSlooduses). Esmane organiseerituse tase. Kõikjal, kus on elu,
esinevad biomolekulid: sahhariidid, lipiidid, valgud, nukleiinhapped.
- ORGANELLI tase – (molekulaarne) rakubioloogia. Uuritakse raku organelle: tuum,
ribosoomid, mitokondrid jne. Kui need rakkudest eraldada, ei kanna nad enam elu tunnuseid.
Organellide koostööst tulenevad rakkude omadused.
- RAKU tase – rakubioloogia
26
docx
Geenitehnoloogia I konspekt
UUED TEADUSLIKUD FAKTID
HÜPOTEES TÕESTATAKSE või LÜKATAKSE ÜMBER (e HÜPOTEES PEAB OLEMA
FALTSIFITEERITAV)
PÄDEVA TEADUSLIKU TEOORIA ALUSEL ON VÕIMALIK
ENNUSTADA NÄHTUSI/FAKTE, MILLE OLEMASOLU HILJEM
EKSPERIMENTAALSELT TÕESTATAKSE
2. Elu organiseerituse tasemed
- MOLEKULAARNE tase molekulaarbioloogia, geenitehnoloogia, süsteemibioloogia
(BIOMOLEKULID ainult ELUSlooduses). Esmane organiseerituse tase. Kõikjal, kus on elu,
esinevad biomolekulid: sahhariidid, lipiidid, valgud, nukleiinhapped.
- ORGANELLI tase (molekulaarne) rakubioloogia. Uuritakse raku organelle: tuum,
ribosoomid, mitokondrid jne. Kui need rakkudest eraldada, ei kanna nad enam elu tunnuseid.
Organellide koostööst tulenevad rakkude omadused.
- RAKU tase rakubioloogia
42
docx
Geenitehnoloogia I käsitletavad teemad – 2013 sügsissemester.
tulemusi nii muudetud kui muutmata (st kontroll) tingimustega katse puhul
Biokeemilised meetodid
Biofüüsikalised meetodid (nt valkude struktuuri analüüs)
Mikroskoopia (valgus- ja elektronmikroskoopia)
Geneetilised meetodid (mutatsioonanalüüs koos molekulaargeneetikaga)
Eluslooduse organiseerituse tasemed
MOLEKULAARNE tase – molekulaarbioloogia, geenitehnoloogia,
süsteemibioloogia (BIOMOLEKULID ainult ELUSlooduses)
ORGANELLI tase – (molekulaarne) rakubioloogia
RAKU tase - rakubioloogia
KOE tase - histoloogia, arengubioloogia/embrüoloogia. Inimesel põhikoed: epiteel-,
lihas-, närvi- ja sidekude
ELUNDI tase – ERI KOED (Tissues) moodustavad ELUNDID e. ORGANEID
(anatoomia, füsioloogia). Organitest moodustuvad ELUNDKONNAD e.
ORGANSÜSTEEMID (füsioloogia)
27
docx
Geenitehnoloogia vastused
toimu. Nõgus- ja kumerplasmolüüs erinevad plasmolüüsunud osa kuju poolest.
Rakke liidab rakuvaheaine (vahelamell), vanemate rakkude nurkade vahel võib olla ka rakuvaheruume
ehk intertsellulaare.
Raku ehitusest paremaks arusaamiseks pidage silmas, et see pole mitte jäik, staatiline moodustis, vaid
raku ehitus ja koostis muutuvad pidevalt ja küllaltki kiiresti: organellid jagunevad või kujunevad
ümber, keemiline koostis muutub jne.
19. Geenitehnoloogia mudelorganismid
*soolekepike
*pärm
*poolduv pärm
*ümaruss
*äädikakärbes
*sebrakala
*koduhiir
*rändrott
*müürlook
*riis
täpsemalt on powerpointis igast liigist juttu
Selle leiate loengud 2011 alt ja see on pealkirjaga Geenitehnoloogia I 2011 Rakk rakutüübidkoedECM ja
MUDELORGANISMID
20. DNA pakkimine, kromosoomide ehitus
Sarapuu õpik Rakuehitus ja talitus
lk 8-9(54-55)
21. Replikatsioon
40
docx
Geenitehnoloogia eksam
Geenitehnoloogia eksam
1. Suhkrute lühiiseloomustus. Süsivesikud=sahhariidid. On orgaanilised
ühendid, mille koostises esinevad süsinik, vesinik ja hapnik. Süsivesikud säilitavad
rakusiseselt keemilist energiat. Rakk saab energiat suhkrumolekulide lagunemisel
lihtsateks ühenditeks, aeroobidel veeks ja süsihappegaasiks. I Monosahhariidid ehk
lihtsuhkrud on madalamolekulaarsed ühendid, milles süsinike arv on enamasti kolmest
kuueni- riboos ja desoküriboos (5 süsinikulised). Glükoos ehk viinamarjasuhkur- kiire
energiaallikas, näitab veresuhkrutaset. Funktsioon- energeetiline, DNAs ja RNAs
ehituslik (6 süsinikuline). Rohelistes taimedes moodustub glükoos fotosünteesi
tulemusena, loomorganismid saavad seda toidust. Fruktoos ehk puuviljasuhkur. II
Polüsahhariidid on kõrgmolekulaarsed orgaanilised ühendid (polümeerid), mille
ehituslikeks lülideks (monomeerideks) on monosahhariidid. Neil on energee
22
docx
Geenitehnoloogia vastused
1) Tuum
2) Tuumake
3) Ribosoomid
4) Mitokoondrid
5) Lüsosoomid
6) Golgi kompleks
7) Tsütoplasmavõrgustik (kareda- ja siledapinnalist (kareda-pinnaline ER))
8) Tsütoplaasm
9) Tsütoskeleet
10) Rakukest (tselluloosist, ligniinist, pektiinist.)
11) Vakuool
12) Platiidid (Leukoplastod, hloroplastis ja hromoplastid)
13) Rakumembraan
18. Rakukesta ehitus ja funktsioon
Sarapuu õpik Rakuehitus ja talitus
lk 18-20(64-66)
19. Geenitehnoloogia mudelorganismid
*soolekepike
*pärm
*poolduv pärm
*ümaruss
*äädikakärbes
*sebrakala
*koduhiir
*rändrott
*müürlook
*riis
täpsemalt on powerpointis igast liigist juttu
Selle leiate loengud 2011 alt ja see on pealkirjaga Geenitehnoloogia I 2011 -Rakk - rakutüübid-koed-ECM ja
MUDELORGANISMID
20. DNA pakkimine, kromosoomide ehitus
Sarapuu õpik Rakuehitus ja talitus
lk 8-9(54-55)
21. Replikatsioon
32
doc
Geenitehnoloogia kordamisküsimuste vastused
Kordamisküsimused Geenitehnoloogia I
1. Millised molekulid on polümeerid?
Polümeerid ehk kõrgmolekulaarsed ühendid on ained,
mille molekulid koosnevad kovalentsete sidemetega seotud korduvatest
struktuuriühikutest elementaarlülidest. Looduslikud polümeerid: polüsahhariidid
(tselluloos, kitiin, tärklis), valgud, nukleiinhapped (DNA, RNA).
Polümeerid on väga suured molekulid, moodustunud kui sajad monomeerid liituvad
pikkadeks ahelateks.
2. Nukleotiidide lühiiseloomustus.
Nukleotiidid on orgaanilised molekulid, mis moodustavad suuri biopolümeere-
nukleiinhappeid, näiteks DNA ja RNA. Nukleotiidid on DNA ja RNA molekuli
alaüksused, mis koosnevad lämmastikalusest (N-alus), suhkrust
(riboos või desoksüriboos) ja fosfaatrühmast. Lämmastikalused on kas puriini või
pürimidiini derivaadid. Puriinid: kahte lämmatikku sisaldava tsükliga ühendid,
aden
194
docx
Molekulaarbioloogia
Molekulaarbioloogia
Molekulaarbioloogia – tegeleb päriliku info kodeerimise, säilitamise ja ülekande
mehhanismi uurimisega, samuti päriliku info realiseerumise molekulaarsete
mehhanismidega (kuidas info geenides määrab elusorganismi ehituse ja tema
funktsioneerimise. Uurib füüsikalis-keemiliste struktuuride ja biokeemilis-füsioloogiliste
funktsioonide vastavust. Teadussuund hakkas arenema pärast makromolekulide
ruumilise struktuuri kindlakstegemist (DNA 3-ruumiline struktuur).
Molekulaarbioloogia dimensioon – 1 A – 300 A (üle 500 – rakubioloogia, alla 1 -
biofüüsika)
1 A (ongström) = 10 -10 m
1nm = 10 A
2-ahelalise DNA läbimõõt – 20 A
kovalentne side – 1,5 A
globulaarse valgu d – 50 A
dsDNA (double stranded) d – 50 A
ribosoomide, valgumolekulide d – 200-300 A
DNA aluspaaride vahe – 3,4 A
vesiniksideme pikkus – 3 A
nukleosoom – 60x110x110 A
bakteri ribosoom – 200x200x230 A
tuumapoorid – 120x120x75 A
bakteriaalne RNA polümeraas – 90x90x60
Meedia
Kommentaarid (0)
Kõik kommentaarid