Invertaasi aktiivsuse määramine (0)

Tallinna Tehnikaülikool - Keemia - Biokeemia

1 Hindamata

Töö teoreetilised alused
Invertaas on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside ehk glükosidaaside hulka, mis katalüüsivad O-glükosiidsideme hüdrolüüsi vastavalt skeemile:
Invertaas katalüüsib hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades fruktoosi molekule:
Sahharoos on looduses levinuim -D- fruktofuranosiid ja tema hüdrolüüsireaktsiooni produktideks on -D- fruktoos ja -D-glükoos. Invertaasi toodavad pärmid, hallitusseened, taimed ja mesilased . Inimesele on ta oluline seedeensüüm.
Invertaasi aktiivsuse määramisel kasutatakse substraadina tavaliselt sahharoosi. Meetod põhineb sahharoosi kui mittetaandava disahhariidi hüdrolüüsil uuritava invertaasi preparaadi toimel ja vabanenud taandavate suhkrute glükoosi ja fruktoosi summaarse kontsentratsiooni määramisel reaktsoonisegus.
Antud töös kasutatakse glükoosi ja fruktoosi koguse kindlakstegemisel kompleksomeetrilist meetodit, kus põhireaktsiiviks on tugevalt aluselise reaktsiooniga lahus, mis sisaldab vask(II)-triloon B kompleksi.
Kindlal ajahetkel reaktsioonisegust võetud proov , milles on taandavad suhkrud , viiakse komplekslahusesse. Keemisel taandub kompleksis sisalduv Cu(II) Cu(I)-ks ja Cu2O eraldub punaka sademena.
Keetmisel toimuv reaktsioon :
Tiitrimisel määratakse vabanenud triloon B kogus, kasutades 0,02M vasksulfaadi lahust, tekib uuesti kompleks , mida näeb lahusesse lisatud indikaatori mureksiidi värvuse muutumise järgi.
Tiitrimisel toimuv reaktsioon :
Tiitrimiseks kulunud vasksulfaadi koguse järgi leitakse kalibreerimisgraafikult taandavate suhkrute kontsentratsioon reaktsioonisegus. Invertaasi aktiivsus avaldatakse vedela ensüümipreparaadi korral mikrokatalites ensüümilahuse 1 ml kohta (kat/ml).

Töö käik
Ensüümipreparaadist töölahuse valmistamine (vedelast ensüümipreparaadist)
Lahustina kasutatakse atsetaatpuhvrit, mille pH = 4,8. Juhendaja etteantud andmetel tuli töölahust valmistada 5 ml, ehk teha vedelast invertiinist 50-kordne lahjendus. Automaatpipeti abil võtsin 100l invertiini ning lisasin 5-ml kriipsuni atsetaatpuhvrit. Sulgesin katseklaasi korgiga ning loksutasin, et kontsentratsioon ühtlustuks
Ensüümireaktsiooni (sahharoosi hüdrolüüsi) läbiviimine

Võetakse 50 ml mahuga katseklaas , kuhu pipeteeritakse 25 ml substraati (7%-line sahharoosi lahus atsetaatpuhvris), katseklaas suletakse korgiga ja jäetakse vesitermostaati ~30 juurde soojenema.
Võetakse kolm 250 ml mahuga koonilist kolbi, kuhu pipeteeritakse 10 ml komplekslahust. Kolbidesse viiakse reaktsioonisegust erinevatel aegadel proove, et neis määrata taandavate suhkrute sisaldus.
Kui substraat on termostaadis saavutanud ~30, lisatakse sellele 1 ml uuritavat invertaasi töölahust, loksutatakse ja võetakse võimalikult kiiresti 1 ml uuritavat lahust, katseklaas asetatakse võimalikult kiiresti termostaati tagasi. Samal ajal käivitatakse stopper, et fikseerida reaktsiooni algusaeg .
Esimene proov pannakse ühte koonilisse kolbi, milles on juba komplekslahus. Seda nimetatakse 0-prooviks, mis iseloomustab reaktsiooni algushetke.
10 minutit peale ensüümireaktsiooni algust võetakse sama pipetiga 1 ml reaktsioonisegu ja viiakse teise komplekslahust sisaldavasse kolbi.
20 minutit peale ensüümireaktsiooni algust võetakse veel 1 ml reaktsioonisegu ja viiakse kolmandasse kolbi.

Reaktsiooniproduktide sisalduse määramine ja aktiivsuse arvutamine

Kolvid sisaldavad lisaks komplekslahusele ka erinevatel aegadel võetud proove, mis nüüd asetatakse elektripliidile püstjahutite alla 10 minutiks keema.
10 minuti pärast valatakse reaktsioonisegule läbi püstjahuti 150 ml destilleeritud vett, kolb võetakse pliidilt ning jahutatakse kraanivee all toatemperatuurini.
Kõikidesse kolbidesse lisatakse umbes 6 tilka indikaatorit, milleks on mureksiidi vesilahus, mis annab lahusele violetse tooni.
Kolbides olevaid lahuseid tiitritakse 0,02M CuSO4 lahusega kuni violetne värv muutub püsivalt rohekaks. Kolvi sisu loksutatakse pidevalt.

Tiitrimiseks kulunud vasksulfaadi lahuse hulga järgi leitakse kalibreerimisgraafikult taandavate suhkrute sisaldus mg-des 1 ml-s reaktsioonisegus võetud proovis.
Vedela invertaasi preparaadi puhul arvutatakse invertaasi aktiivsus vastavalt valemile:
A = (C2 - C1)*V1*103*L/T*180*V3*V4, kus
C1 - taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis mg/ml
C2 - taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml
V1 - reaktsioonisegu üldmaht, ml
103 - tegur üleminekuks mikrogrammidele
L - lahjendusmäär
T - hüdrolüüsi kestus, s
180 - glükoosi molekulmass
V3 - proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml
V4 - ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml
Katseandmed :
0-proov: V(CuSO4) = 1,9 ml, seega C1 = 1,7 mg/ml
1-proov: V(CuSO4) = 10,1 ml, seega C10 = 8,9 mg/ml
2-proov: V(CuSO4) = 22,5 ml, seega C20 = 20,6 mg/ml
V1 = E + S = 25 + 1 = 26 ml
L = 50
T1 = 10 min = 600 s, T2 = 1200 s
V3 = 1 ml
V4 = 1 ml
A10 = (8,9 - 1,7) * 26 * 103 * 50 / 600 * 180 * 1 * 1 = 86,7 kat/ml
A20 = (20,6 - 1,7) * 26 * 103 * 50 / 1200 *180 * 1 * 1 = 113,8 kat/ml
Aritmeetiline keskmine: (86,7 + 113,75) / 2 = 100,25 kat/ml

Tulemused
Invertaasi aktiivsus kümnendal minutil tuli arvutuslikult 86,7 kat/ml ning kahekümnendal minutil 113,8 kat/ml. Nende aritmeetiline keskmine tuli 100,25 kat/ml. See näitab, et 1 ml invertiinipreparaadi toimel produtseeritakse keskmiselt 100,25 μmol’i taandavat suhkrut sekundis. Erinevatel minutitel saadud tulemused erinevad üksteisest 23,8% võrra. Võimalik, et katseviga tekkis ebatäpsest tiitrimisest, kui lahusesse läks rohkem vasksulfaati, kui tegelikuks ekvivalentpunktiks vaja oli.

.DOCX Laadi alla originaalfail 4 lk · .docx · 11 allalaadimist

10 punkti Autor soovib selle materjali allalaadimise eest saada 10 punkti.

~ 4 lehte Lehekülgede arv dokumendis

2014-05-12 Kuupäev, millal dokument üles laeti

11 laadimist Kokku alla laetud

0 arvamust Teiste kasutajate poolt lisatud kommentaarid

mellu5 Õppematerjali autor

Biokeemia praktikumi protokoll 3.1. Arvestatud esimese korraga.

proov invertaas vask invertaasi aktiivsus suhkrute sisaldus reaktsioonisegus kontsentratsioon

Sarnased õppematerjalid

docx

Invertaasi aktiivsuse määramine

3.1 INVERTAASI AKTIIVSUSE MÄÄRAMINE Invertaas, süstemaatilise nimetusega -D-fruktofuranosiidi fruktohüdrolaas, lihtsamalt - fruktofuranosidaas, on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside e glükosidaaside hulka, mis katalüüsivad O-glükosiidsidemete hüdrolüüsi. Invertaas katalüüsib -D- fruktofuranosiidide hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades neist fruktoosi molekule. Sahharoos on looduses kõige levinum -D-fruktofuranosiid ja tema hüdrolüüsireaktsiooni produktideks on -D-fruktoos ja -D-glükoos. Invertaasi produtseerivad pärmid, hallitusseenes, paljud taimed, mesilased. Inimese jaoks on see oluline seedeensüüm. Sahharoos hüdrolüüsub peensoole limaskesta rakkude poolt toodetava invertaasi toimel. Invertaasi preparaatide

Biokeemia

docx

Biokeemia invertaasiaktiivsus

INVERTAASI AKTIIVSUSE MÄÄRAMINE 1. Töö teoreetilised alused 1.1 Töö eesmärk Töö eesmärk oli määrata invertaasi preparaadi aktiivsus, kasutades substraadina sahharoosi. Kasutasin meetodit, kus toimus tänu invertaasi preparaadile sahharoosi hüdrolüüs. Et teada saada invertaasi aktiivsust, määrasin hüdrolüüsi produktide fruktoosi ja glükoosi kontsentratsioonid reaktsioonisegus. Fruktoosi ja glükoosi kontsentratsioonid määrasin triloon B koguse abil, mille sain teada tiitrimisel. 1.2 Teooria Invertaas ehk D fruktofuranosiidi fruktohüdrolaas ehk - fruktofuranosidaas on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside ehk glükosidaaside hulka, mis katalüüsivad O- glükosiidsidemete hüdrolüüsi vastavalt skeemile:

Biokeemia

pdf

3.1 Invertaas

Tallinna Tehnikaülikool YKL0060 Biokeemia Töö nr 3.1 Invertaasi aktiivsuse määramine Yasb 21 Juhendaja Tiina Randla 09.04.2012 Teooria Invertaas ehk -fruktofuranosidaas on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside ehk glükosidaaside hulka, mis katalüüsivad O-glükosiidsidemete hüdrolüüsi. Invertaas katalüüsib -D-fruktofuranosiidide hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades neist fruktoosi molekule: invertaas -D-fruktofuranosi id +H2O ,D-fruktoos +mono- või oligosahhariid Looduses levinuim -D-fruktofuranosiid on sahharoos, tema hüdrolüüsiproduktideks on -D- fruktoos ja -D-glükoos. Sahharoos hüdrolüüsub invertaasi toimel vastavalt reaktsioonivõrrandile: Invertaasi aktiivsuse määramise meetod põhineb sahharoosi kui mittetaandava disahhariidi

rekursiooni- ja keerukusteooria

docx

INVERATSSI AKTIIVSUSE MÄÄRAMINE

Tallinna Tehnikaülikool Keemiainstituut Bioorgaanilise keemia õppetool 1.1 INVERATSSI AKTIIVSUSE MÄÄRAMINE Laboratoorsed tööd Juhendaja: Tiina Randla Teooria Invertaas ehk -D-fruktofuranosiidi fruktohüdrolaas on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside hulka, mis katalüsivad O-glükosiidsidemete hüdrolüüsi. Invertaas katalüüsib -D-fruktofuranosiidide hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades neist fruktoosi molekule: -D- fruktofuranosiid + H2O ,D-fruktoos + mono- või oligosahhariid

Keemia

docx

3.1 Invertaasi aktiivsuse määramine - Biokeemia labori protokoll

Tallinna Tehnikaülikool 3.1 Invertaasi aktiivsuse määramine Biokeemia labori protokoll 2011 Töö teoreetilised alused Invertaas ehk -D-fruktofuranosiidi fruktohüdrolaas on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside hulka, mis katalüsivad O-glükosiidsidemete hüdrolüüsi. Invertaas katalüüsib -D-fruktofuranosiidide hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades neist fruktoosi molekule: -D- fruktofuranosiid + H2O ,D-fruktoos + mono- või oligosahhariid

Biokeemia

docx

Invertaasi aktiivsuse määramine

3.1. Invertaasi aktiivsuse määramine Invertaas, süstemaatilise nimetusega -D-fruktofuranosiidi fruktohüdrolaas (EC 3.2.1.26) on ensüüm, mis kuulub glükosiidsideme hüdrolaaside hulka, mis katalüüsivad O-glükosiidsidenete hüdrolüüsi. Invertaas katalüüsib -D-fruktofuranosiidide hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades neist fruktoosi molekule: Sahharoos on looduses kõige levinum -D-fruktoduranosiid ja tema hüdrolüüsireaktsiooni produktideks on -D-fruktoos ja -D-glükoos. Invertaasi produtseerivad pärmid,

Keemia

docx

Invertaasi aktiivsuse määramine

Tallinna Tehnikaülikool Keemiainstituut Bioorgaanilise keemia õppetool Töö number 3.1 Invertaasi aktiivsuse määramine Versioon 1 Töö teostaja: Karina Gailit YAGB 134365 Töö juhendaja: Malle Kreen Tallinn 2014 1 Invertaasi aktiivsuse määramine Teooria Invertaas(-D-fruktofuranosiidi fruktohüdrolaas, EC 3.2.1.26) on ensüüm,mis kuulub glükosiidsidemete hüdrolaaside hulka. Sellised ensüümid katalüüsivad O-glükosiidsidemete hüdrolüüsi vastavlt skeemile: Invertaas katalüüsib -D-fruktofuranosiidide hüdrolüüsireaktsiooni, vabastades neist fruktoosi molekule: Sahharoosi hüdrolüüsireaktsiooni produktideks on -D-fruktoos ja -D- glükoos.

Anorgaaniline keemia

docx

Invertaasi aktiivsuse määramine

Vabanevad fruktoosi molekulid: SAHHAROOS looduses levinuim -D- fruktofuranosiid. Hürdolüüsi produktideks on -D-fruktoos ja -D-glükoos. Hüdrolüüsub peensoole limaskesta rakkude pool t (oluline seedeensüüm!!!) toodetava invertaasi toimel vastavalt reaktsioonivõrrandile: Invertaasi preparaatide aktiivsuse määramisel kasutatakse reeglina substraadina sahharoosi. INVERTAASI AKTIIVSUSE MÄÄRAMISE MEETOD: - Põhineb sahharoosi kui mittetaandava disahhariiidi hüdrolüüsil uuritava invertaasi preparaadi toimel - Vabanenud taandavate suhkrute glükoosi ja fruktoosi summaarse kontsentratsiooni määramisel reaktsioonisegus

Keemia

Rohkem sarnaseid