Mullas olevate klostriidide ja mikroobide üldarvu leidmine Töö käik: Võeti 1g mulda, milelel lisati destilleeritud vet ning hiljem uhmerdati. Tehakse lahjendused mikroobide üldarvu kohta ja , Klostriidide määramiseks tehakse lahjendused ja . lahjenduse saamiseks võeti steriliseeritud klaaspipetiga 1ml lahust, mis viiakse katsutisse ning siis segatakse Hortex mikstiga 30 sekundit. Teise lahjenduse saamiseks korratakse tegevust, samuti ka teiste lahjendustega kuni lahjenduseni . Klostriidide lahjendused kuumutatakse vesivannil 15 minutit, et vabaneda üleliigsetest bakteritest. Vastavad lahjendused viiakse neljale Petri tassile, mis on eelnevalt märgitud
10x lahus 500ml 50ml analüüsitavat vett, 450ml lahjendusvett 25x lahus 500ml 20ml analüüsitavat vett, 480ml lahjendusvett 50x lahus 1000ml 20ml analüüsitavat vett, 980ml lahjendusvett 100x lahus 1000ml 10ml analüüsitavat vett, 990ml lahjendusvett e) Proovivee ettevalmistus lahjenduste tegemiseks Esiteks kontrollitakse nõude puhtust, et mustad nõud tulemusi ei muudaks. Määratakse proovi pH ning enne lahjenduse tegemist loksutatakse proov korralikult läbi. Lahjendused tehakse vastavalt arvutustele. Analüüsitav proov loksutatakse läbi. Mõõdetakse 10x lahuse jaoks 50ml analüüsitavat vett ning lisatakse 500ml mõõtsilindrisse. Lisatakse 3/4 lahjenduslahust ning lisatakse ATU lahust (0,50ml), mis pärsib nitrifikatsiooni, sest nitrifikatsiooni põhjustavate mikroorganismide juuresoleks võib muuta tulemusi, ja täidetakse nõu lahjenduslahusega. Suletakse korgiga ja loksutatakse. 1. Analüüsi läbiviimine. Katsete tulemused.
Pesemise ja desinfitseerimise planeerimine Ettevõtte nimi Pesemise ja Objekti pesemise ja Pesemis-ja desinfitseerimise desinfitseerimise Jrk.nr. Objekti nimetus desinfitseerimisained Lahjendused lühikirjeldus sagedus Vastutaja Pesemine toimub 3 ml kontsentraati spetsiaalse CHEMIPHARM DES 1
YKA0060 Instrumentaalanalüüs AAS Aatomabsorptsioonspektromeetria Õpperühm: Töö teostaja(d): Õppejõud: Töö teostatud (kuupäev): 1 Töö eesmärk Määrata uuritavas veeproovis magneesiumi sisaldus kasutades kalibratsioonigraafikut ja molaarse neeldumiskoefitsienti. 2 Töö käik Tundmatu lahus: tundmatu kontsentratsiooniga Mg veelahus. Lahjendused: Töölahus: 100 mg/L (Mg; vees) Kasutame nt 100mL mõõtkolbi. Pipeteerime vajalik kogus töölahust ja viime veega kriipsuni. x mg / 0,1 L = 0,5 mg /1L x = 0,05 mg (peab pipeteerima mõõtkolbi) Kui 1000mL-s on 100 mg ainet, siis 1mL on 0,1mg ja 0,1mL on 0,01mg. Seega tuleb võtta 0,5mL töölahust. Vajalikud lahjendused: o 0,5 mg/L (0,5 mL TL-i) o 1 mg/L (1 mL TL-i) o 2 mg/L (2 mL TL-i) o 5 mg/L (5 mL TL-i) o 10 mg/L (10 mL TL-i) o 20 mg/L (20 mL TL-i) Mõõtmine:
© EeeOoo Mikroobide määramine mullast Töö käik Võetakse 1 g mulda, mida uhmerdati destilleeritud veega. Järgnevalt tuleb teha lahjendused mikroobide üldarvu (105, 106) ja klostriidide kohta (104, 105). Esimese lahjenduse saamiseks võeti pipetiga 1 ml lahust ning lisatakse katseklaasi, kus on eelnevalt juba füsioloogiline lahus. Saadud lahus segatakse Vortex mikseriga saadakse lahus lahjendusega 101. Teise lahjenduse saamiseks viidakse 1 ml lahust esimesest katseklaasist teise katseklaasi, millele järgneb lahuse segamine. Tulemuseks saadakse lahjendusega 102 lahus. Järgnevate
Mikroobide määramine jõe- ja kraaniveest Töö käik Nelja Petri tassi lisatakse lahjendused jõeveest. Esimese lahjenduse saamiseks võeti pipetiga 1 ml jõevett ning lisatakse katseklaasi, kus on eelnevalt juba füsioloogiline lahus. Saadud lahus segatakse Vortex mikseriga – saadakse lahus lahjendusega 10 -1. Puhta pipetiga viidakse katseklaasist 1 ml 10-1 lahust Petri tassile. Teise lahjenduse saamiseks viidakse 1 ml lahust esimesest katseklaasist teise katseklaasi, millele järgneb lahuse segamine. Tulemuseks saadakse lahjendusega 10 -2 lahus,
Selle suve üleelamiseks tuli loomi pritsida veega (oli palav). Kasutavad kunstvalgustust päeva pikendamiseks enne paaritust. Tõuseb sperma kvaliteet. 1/3 isaseid on sellise reziimi all. Päev pikendatakse 20 minuti võrra. Nahkade hinnad on sel aastal sinirebastel 30%, hõberebastel 20%, naaritsatel 20% kõremad. Naaritsate nahkade hinnad on enam-vähem stabiilsed. 0000 sinirebane maksab ~100 eurot, samuti 000 hõberebane. Kunstlik seemendusel tehtakse 4-10 sperma lahjendused. Seemendust korratakse üle päeva. Tupeliima järgi määratakse, kas on valmis paarituda või mitte. Hiljem kontrollitakse jälle, kui aparaat näitab alla 200, siis tiinestus. 20% tuleb seemendada kolmandat korda. Hõberebaseid kasutatakse suguloomadena isegi 10 aastat. Keskmine aga 4-5 aastat. Minke 3 aastat. Isaseid peale paaritust nahastatakse. Praegu on rohkem moes pikakarvalised karusnahad, seega rebaseid sugukarja täiendamiseks tuuakse Soomest (soome tüüp).
koguse mahla (1-2 ml) ning tegin sellest praktikumi juhendaja soovituste kohaselt 50-kordse lahjenduse. Selleks pipeteerisin 0,5 ml sidrunimahla automaatpipetiga 25ml mõõtkolbi ning täitsin kolvi kriipsuni destilleeritud veega. 2. Glükoosilahuse valmistamine kalibreerimisgraafiku koostamiseks: Glükoosilahused valmistan glükoosi standardlahuse lahjendamise teel proovide järjestikkusel lahjendamisel saades lahused kontsentratsioonidega 0,25 mg/ml, 0,125 mg/ml ja 0,062 mg/ml. Lahjendused tehakse samm-sammulisel lahjendamisel. Selleks valmistatakse esmalt standardlahusest kindla kontsentratsiooniga (0,25mg/ml), saadud lahjendatakse kaks korda ning teist lahust veel omakorda kaks korda. Pärast lahjenduste tegemist loksutatakse lahused korralikult läbi. 3. Värvusreaktsiooni labiviimine: Statiivi asetatakse 6 puhast ja kuiva katseklaasi ning nummerdatakse need. Proovid valmistatakse järgnevalt: Katseklaa Katseklaasi sisu millega on tegu
10, 5, 2, 1, 0,5, 0,2 ja 0,1 g/ml. 2. Kirjaklambrist lõigata tükk traati (0.2-0,3 g) ja kaaluda analüütilistel kaaludel. 3. Traat panna keeduklaasi, lisada 10 ml kont HNO3 ja panna elektripliidile. 4. Peale traadi lahustumist viia lahus peale jahutamist üle 100 ml kolbi, pestes keeduklaasi väikeste koguste dest. veega. 5. Täita kolb kriipsuni ja loksutada korralikult. 6. Alglahusest teha 50 ja 100-kordsed lahjendused. 7. Määrata Fe, Cu ja Zn sisaldused. Tulemused 4 Fe sisalduse määramine kraanivees aatomabsorbtsioonspektraalanalüüs- grafiitmeetodil Töö käik: 1. Valmistada Fe töölahus 25 ng/ml. 2. Kalibreerida aparaat töölahusega. 3. Määrata kraanivees Fe sisaldus. 4
ARVUTUSKÄIK (tabeli esimese rea alusel) 1) Lahuse erijuhtivus S/m 2) Lahuse ekvivalentjuhtivus 3) Dissotsiatsiooniaste (nõrkade elektrolüütide korral f=1) 4) Näiline dissotsiatsioonikonstant Näiliste dissotsiatsioonikonstantide keskmine Käsiraamatus on metaanhappe dissotsiatsiooni konstant K=1,772 · 10-4 Suhteline viga KOKKUVÕTE Katseviga tuli päris väike, mis tähendab, et lahjendused olid õigesti tehtud ja antud meetodit saab kasutada aine dissotsiatsioonikonstandi määramiseks.
5. Saadud lahjendusi loksutasin hoolikalt läbi. Reaktsiooni tööreaktiiviga viisin läbi katseklaasides toatemperatuuril. 1. Selleks asetasin statiivile 6 puhast kuiva katseklaasi ja märkisin need numbritega. 2. Katseklaasi nr. 1 pipeteerisin 1 ml destilleeritud vett (kontrollproov) 3. Katseklaasidesse 2 ja 3 pipeteerisin 1ml melonimahla lahust (paralleelproovid) 4. Katseklaasidesse 4, 5, 6 pipeteerisin igaühte 1 ml erineva kontsentratsiooniga glükoosilahust ( lahjendused) 5. Igasse klaasi pipeteerisin veel 3 ml tööreaktiivi ja loksutasin hoolikalt. 6. Hoidsin katseklaase 20 minutit toatemperatuuril. Glükoosi sisaldavad lahused värvusid nõrgalt helekollaseks. 7. Mõõdsin spektrofotomeetril lahuste optilised tihedused lainepikkusel 410 nm, kasutades võrdluslahusena destilleeritud vett. Katse tulemused Nr4 konsentratsioon on 2,5/10 = 0,25 mg/ml Nr5 konsentartsioon on 1,25/10 = 0,125 mg/ml
- nahaprobleemid - unehäired jne - suitsetamine ja teised sõltuvused Homöopaatilised preparaadid stimuleerivad inimese enda immuunsüsteemi, aidates kehal jälle tasakaalu saavutada. Ravi edu ja kiirus sõltub haiguse raskusest ja haigusperioodi pikkusest. Homöopaatiat kasutatakse üsna laialdaselt ka veterinaarias. [2] 5 HOMOÖPAATIA NEGATIIVSED KÜLJED Homoöpaatia vastased väidavad, et tegu on pettusega. Nimelt on ravimite lahjendused nii suured, et neist pole mingitki kasu. Teaduslikult on samuti tõestatud, et inimesi ravib pigem nende enda uskumus ravimisse, kui ravimi koostis. Suurbritannias on olnud suurel hulgal juhtumeid, kus malaaria leviku piirkondadesse reisivad inimesed eelistavad üldtuntud meditsiinilistele ravimitele homoöpaatilisi vahendeid. Tagasi on aga ikkagi tuldud koos haigusega. Seda saaks vältida, kui homoöpaadid soovitaksid ennekõike
Mahl või mõni muu vedelik Kuna tundmatuks lahuseks osutus mahl , siis 1 ml viinamarjamahlast pidin ma tegema 300 kordse lahjenduse ning sellega viisin läbi värvusreaktsiooni. 300 kordset lahjendust tegin 20 ml. Glükoosilahuste valmistamine kaliibrimisgraafiku koostamiseks Kindla glükoosi kontsentratsiooniga lahuste valmistamisel lähtutakse glükoosi standardlahusest, milles glükoosi kontsentratsioon on täpselt 1,0 mg/ml. Sellest valmistatakse lahjemad glükoosilahused ehk lahjendused. Lahjendusi tuleb teha standardlahusest kolm lahjendust, milles glükoosi kontsentratsioon on siis 0,25 mg/ml (4 kordne lahjendust), 0,125 mg/ml (8 kordne lahjendust) ja 0,062 mg/ml (16 kordne lahjendus). 4 Lahjendamise põhimõte: lahjendamiseks võetud lahuse(standardlahuse) mahus ja lahjendatud lahuse lõppmahus sisaldub üks ja sama aine hulk, see tähendab, et kehtib võrrand:
(manustamine punkt 15). Noradrenaliin: Kiirendab südamerütmi ja löögi mahtu, ahendab arterioole nahas ja maos, suurendades neid lihastes. i/v infusioon. Fenüülefriin: vererõhu tõstmine hüpotensiooni, šoki korral (i/v infusioon). Pole enamasti esmavalik (noradrenaliin). Anesteesia ajal hüpetensiooni teke (i/v boolus või infusioon). „Gripiteede“ komponent (Coldrex) – dekongestant. 15. Adrenaliini manustamine elustamisel ja anafülaksia korral- boolus/infusioon, lahjendused. Igasuguse etioloogiaga südameseiskus: i/v boolus 1mg 3-5 min. järel. Anafülaktiline reaktsioon: i/m 0,3-0,5 mg (ilma lahjendamata) või i/v boolus (lahjendatult 0,9% NaCl). Tehakse 1:10 lahjendus ja manustatakse 1ml bloouste kaupa või epipen i/m (1 annus 0,3mg reielihasesse) – patsient ise manustab. 16. Milliseid muutusi võib näha dopamiini, dobutamiini ja isoprenaliini manustamisel organismis (ehk millist toimet avaldavad)? Kuidas neid manustatakse –boolus, infusioon?
temperatuuril 600°C kuumutatud KCl-st ning juhtivusveest. Nõu täidetakse pipetiga ja mõõdetakse takistus. Katset korratakse uue KCl lahusega. Edasi mõõdetakse analoogiliselt kõigi uuritavate lahuste takistus. Lahuste kontsentratsiooni määrab praktikumi juhendaja. Lahused valmistatakse 500-ml mõõtekolbidesse laboratooriumis olevast kindla kontsentratsiooniga lahusest (tavaliselt etaanhape või metaanhape) selle kvantitatiivsel ja järkjärgulisel lahjendamisel juhtivusveega. Lahjendused küsida praktikumi juhendajalt. Teoreetilised põhjendused, valemid. Elektrolüüdilahused käituvad vastavalt Ohmi seadusele, mille järgi elektrivoolu tugevus I (A) on võrdeline rakendatud pingega U (V) ja pöördvõrdeline takistusega R (). Takistuse pöördväärtust nimetatakse elektrijuhtivuseks L (S). I = U / R = LU Takistus R on võrdeline elektroodidevahelise kaugusega l ja pöördvõrdeline elektroodi pindalaga S R = l / S
Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafik koostatakse standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide (katseklaasid 4, 5, 6) absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg/ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A). Korrigeeritud absorptsiooni väärtusi kasutamisel ja eksperimendi korrektsel läbiviimisel (täpselt tehtud lahjendused) kujutab graafik endast koordinaatide alguspunkti läbivat sirget. Optiline tihedus – Optiline tihedus Katseklaas kontrollproovi optiline (lainepikkus λ=410 nm) tihedus 1. dest. vesi
MilliQ vesi Etanool - - Töökäik: - Lülitada sisse arvuti, spektrofluorimeeter ja termostaat (tehti eelnevalt) - Käivitada proprgamm FL Solutions 2.1 for F-7000 arvutis (tehti eelnevalt) - Valida FL meetodis vastavad parameetrid (eelnevalt tehtud) - (General: Measurement: 3D Scan, Instrument: Data mode Fluoresence, Ex,Em 200-700 nm, Sampling intrerval 10 nm, Slit 5 nm, Scan speed 12 000 nm/min, PMT Voltage 700 V, Response 0.5 s) - Teha 100x proovide lahjendused (eelnevalt tehtud) - Kasutada 1 ml kvartsküvetti (pipett seatud 800 μl juurde) ning proovi süstimisel jälgida, et küvett oleks ilma õhumullideta 2/3 täis. - Mõõda esmalt MilliQ EEM - Mõõda teisalt etanooli (lahusti) EEM - Skanneerida proov (Bed Raccoon) - Lahutada proovi EEM-ist etanooli EEM - Hinnata, mitu ained on EEM-is (excitation-emission matrix) - Kopeerida andmed Excelisse edasiseks analüüsiks - 4 -
kontsentratsiooniga lahusest. NB! peale KCl lahust loputada elektroodid eriti hoolikalt nii juhtivusveega kui lahusega, millega hakatakse tegema järgmist mõõtmist. Lahused valmistatakse 50-ml mõõtekolbidesse laboratooriumis olevast kindla kontsentratsiooniga lahusest (tavaliselt etaanhape või metaanhape, mille kogus mõõdetakse büreti abil) selle lahjendamisel juhtivusveega. Lahuste kontsentratsioonid/lahjendused küsida praktikumi juhendajalt. Pärast gaasimullide eraldumist asetatakse juhtivusnõu mõõdetava lahusega vesitermostaati, mille temperatuuri hoitakse püsivana 25,0±0,1 °C juures, erijuhtudel ka mõnel teisel juhendaja poolt määratud temperatuuril. Kui lahus juhtivusnõus on saavutanud termostaadi temperatuuri (mitte varem kui 5...7 minuti pärast), ühendatakse elektroodid vahelduvvoolusillaga ja mõõdetakse lahusekihi takistus
kontsentratsiooniga lahusest. NB! peale KCl lahust loputada elektroodid eriti hoolikalt nii juhtivusveega kui lahusega, millega hakatakse tegema järgmist mõõtmist. Lahused valmistatakse 50ml mõõtekolbidesse laboratooriumis olevast kindla kontsentratsiooniga lahusest (tavaliselt etaanhape või metaanhape, mille kogus mõõdetakse büreti abil) selle lahjendamisel juhtivusveega. Lahuste kontsentratsioonid/lahjendused küsida praktikumi juhendajalt. Pärast gaasimullide eraldumist asetatakse juhtivusnõu mõõdetava lahusega vesitermostaati, mille temperatuuri hoitakse püsivana 25,0±0,1 °C juures, erijuhtudel ka mõnel teisel juhendaja poolt määratud temperatuuril. Kui lahus juhtivusnõus on saavutanud termostaadi temperatuuri (mitte varem kui 5...7 minuti pärast), ühendatakse elektroodid vahelduvvoolusillaga ja mõõdetakse lahusekihi takistus. Lahusekihi takistuse mõõtmine
3. Katseloom – tekivad immunoglobuliinid – uuritakse seroloogiliselt ehk määratakse antikehad ja tiiter. 18. Seroloogilised meetodid viirushaiguste diagnoosimiseks neutralisatsioonireaktsioon – NR – tehakse elusrakus (rakukultuur, embrüo, katseloom), et määrata antikehade olemasolu, tiiter (antikehad seerumis) või viiruse tiiter. Võetakse haiguse alguses proov ja 2n pärast uus proov. 1. meil on seerum – tahame teada, kas on antikeha?Antikehi tiitrime 2x. 2. teeme 2x lahjendused: 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 – mida suurem tiiter, seda vähem antikehi. Nt veiste viirusdiarröa – lisame antigeeni igale seerumi lahjendusele. nt 100 ühikut viirust. 3. Selle seerum-viirus suspensiooni lisame nüüd rakkudele: 1:2 – antikeha neutraliseerib, TPE 0 1:4 – 0 1:8 – TPE 20% 1:16 – TPE 50% 1:32 – TPE 90% Seerumi lahjendus – tsütopaatiline efekt 50% - 1:16. Viiruseid tiitrime 10x – tahame teada, mis viirus on. Kasutame tööstuslikke antikehi.Mida kõrgem
Pipeti sisu täielikuks eemaldamiseks imesin sülje koos veega pipeti sisse ning puhusin mitu korda välja. Järgnevalt võtsin 10 kuiva katseklaasi, nummerdasin ning pipeteerisin igasse 1 ml destilleeritud vett. Esimesse katseklaasi viisin 1 ml lahjendatud sülge, imesin ja puhusin mitu korda välja ning seejärel loksutasin katseklaasi sisu hoolikalt. Esimesest katseklaasist võtsin 1 ml ning pipeteerisin teise katseklaasi, korrates eelmist protseduuri. Nii tegin kõik edaspidised sülje lahjendused kuni kümnenda katseklaasini. Seejärel lisasin igasse katseklaasi 2 ml 0,1%-list tärkliselahust, segasin hoolikalt ning asetasin vesivanni 38°C juurde, fikseerides aja. 30 minuti möödudes jahutasin katseklaasid kraanivee all toatemperatuurini, igasse klaasi lisasin 1 tilk joodilahust ja määrasin tekkinud värvuse. Katse andmed ja arvutused Katseklaasi number Sülje lahjendus Värvus
3. Pesta rakke 3 korda 5 minutit á 1 ml 1x PBSiga. II Neutraliseerimine ja permeabiliseerimine 1. Lisada rakkudele á 0,5 ml 50mM NH4Cl + 0,5% Triton X-100 PBSis, inkubeerida 15 minutit toatemperatuuril. 2. Pesta rakke 2 korda 5 minutit á 1 ml 1x PBSiga. III Blokeerimine Lisada rakkudele á 0,5 ml 2% BSA PBSis, millele on lisatud 0,1% NaN3, jätta seisma üleöö (üle nädalavahetuse) +4°C juurde. IV Inkubatsioon primaarse antikehaga 1. Valmistada primaarse antikeha lahjendused (kulub 200 µl ühe klaasi kohta) 0,2% BSA- PBS lahuses a. 40 µl 2% BSA lahust b. 360 µl 1x PBSi c. Mouse anti tubuliin 1:500 0,8 µl, segada. 2. Lisada rakkudele ja inkubeerida 60-90 minutit toatemperatuuril. 3. Pesta 3 korda 5 minutit á 1 ml PBS-Tweeniga. V Inkubatsioon sekundaarse antikehaga. 1. Valmistada sekundaarse antikeha lahjendused 0,2% BSA-PBS lahuses (vaja on kahe klaasi jagu, seega kokku 2x200=400µl). a. 40 µl 2% BSA lahust b. 360 µl 1x PBSi c
lahjendus. Järgnevalt võetakse 10 kuiva katseklaasi, nummerdatakse ning pipeteeritakse igasse 1 ml destilleeritud vett. Esimesse katseklaasi viiakse 1 ml lahjendatud sülge, imetakse ja puhutakse mitu korda välja ning seejärel loksutatakse katseklaasi sisu hoolikalt. Esimesest katseklaasist võetakse 1 ml ning pipeteeritakse teise katseklaasi, korrates eelmist protseduuri. Nii tehakse edaspidised sülje lahjendused kuni kümnenda katseklaasini. Seejärel lisatakse igasse katseklaasi 2 ml 0,1%-list tärkliselahust, segatakse hoolikalt ning asetatakse vesivanni 38°C juurde, fikseerides aja. 30 minuti möödudes jahutatakse katseklaasid kraanivee all toatemperatuurini, igasse klaasi lisatakse 1 tilk joodilahust ja määratakse tekkinud värvus, mis võib olla sinine , violetne, roosa, kollane. Katseklaasi number Sülje lahjendus 1 1:20
korda välja. 4. Järgnevalt võtsin 10 kuiva katseklaasi, nummerdasin ning pipeteerisin igasse 1 ml destilleeritud vett. Esimesse katseklaasi viisin 1 ml lahjendatud sülge, imesin ja puhusin mitu korda välja ning seejärel loksutasin katseklaasi sisu hoolikalt. 5. Esimesest katseklaasist võtsin 1 ml ning pipeteerisin teise katseklaasi, korrates eelmist protseduuri. Nii tegin kõik edaspidised sülje lahjendused kuni kümnenda katseklaasini. 6. Seejärel lisasin igasse katseklaasi 2 ml 0,1%-list tärkliselahust, segasin hoolikalt ning asetasin vesivanni 38°C juurde, fikseerides aja. 30 minuti möödudes jahutasin katseklaasid kraanivee all toatemperatuurini, igasse klaasi lisasin 1 tilk joodilahust ja määrasin tekkinud värvuse. Katse andmed ja arvutused Katseklaasi number Sülje lahjendus Värvus
steriilse pipetiga kindla koguse (enamasti 0.1 kuni 0.5 ml suurem vedelikukogus ei imendu geeli) lahust agari pinnale ning ajades selle steriilse drigalski spaatli abil ühtlaselt mööda söötme pinda laiali. Sügavkülv võimaldab hinnata (aeroobsete) mikroorganismide arvukust ning uurida nii pindmiste kui ka söötmesiseste kolooniate kuju ja suurust. Uuritavast proovist valmistatakse vajalikud lahjendused analoogiliselt eelmises punktis kirjeldatule. Sügavkülvi tegemisel on mugav kasutada 15 20 ml portsionite kaupa katse-klaasidesse villitud steriilset tardsöödet. Teatud kogus (külviaasatäis või kvantitatiivsel määramisel 0,1-1 ml) sobiva konsentratsiooniga mikroorganismide suspensiooni (lahjendust) kantakse kas otse Petri tassi või sulatatud ja 45 - 50 °C-ni jahutatud tardsöötmega katseklaasi. Sisu valatakse Petri tassi, paotades selle kaant minimaalselt.
Tõmmasin sööde vaakumpunbaga nii, et rakud jäid põhja Tassilt tuubile rakkudega lisasin 0,5 ml söödet, suspendeerisin ning panin tagasi tuubist tassile, ühtustasin rake ja panin tass CO2 inkubaatorisse, kus tingimused – temperatuur, rõhk ja CO2 % onn sarnased tingimustega organiismi sees, eh 37 °C ja CO2 5% - stabiliseerib pH. 2. Praktikum – rakkude paljundamine Selleks, et arvutada lahjendused ja veenduda et rakud ei ole surnud, on vaja hinnata nende tihedust ja paiknemist. Selleks kasutataske mikroskoobi: Rakud ei ole saastanud ega surnud (üksikud mittekleepunud ujuvad rakud on, kuid enamus on kinnitunud), kleepinud tassile ja paiknevad ühtlaselt, kuid nende tihedus on umbes 20%. NIH3T3 rakud on fibroplastid, seega nende kuju on omapärane, näha mitut adhesiooni kohta. Figure 1NIH3T3 mouse fibroblasts,
mikroobide puhul pigem populatsiooni kasvu, so mikroobirakkude arvukuse tõusu järgi ruumalaühikus. Et jälgida mikroobide arvukuse suurenemist (kasvu) vedelkultuuris, selleks tuleb kasvu vältel kas: 1. loendada rakke (r/ml), (Loenduskamber rakkude arvu loendamiseks mikroskoobi all. Ei saa eristada elus- ja surnud rakke.) 2. määrata elusrakkude arvu (viable cell count) näiteks väljakülvidega tardsöötmetele. Tehakse bakterikultuurist steriilselt lahjendused ja kindel kogus materjali külvatakse välja steriilsele tardsöötmele. Kasvatatakse, loendatakse kolooniad ja tehakse arvutused eeldusel, et ühest elusrakust moodustub üks koloonia. Arvukust määratletakse kui CFU/ml. CFU (kolooniat moodustav ühik, colony forming unit). Meetod ei sobi, kui rakud kleepuvad kokku. Ei sobi ka mütseeliga organismide puhul. 3. mõõta kultuuri optilist tihedust (valguse neeldumist) kasvu vältel välja võetud
!!) *anesteesia korral hüpotensiooni teke *,,gripiteede" komponent, nt. Coldrex · Märkused: · infusioonilahus kas glükoosilahuses (5%) või füsioloogilises lahuses. Mitte segada teiste ravimitega! · i/v boolus 100 to 500 mcg vajadusel 10-15 minuti järel. · manustada suurde veeni - vältimaks infiltratsiooni ümbritsevatesse kudedesse Adrenaliini manustamine elustamisel ja anafülaksia korral boolus/ infusioon, lahjendused? *igasugu etioloogiaga südameseiskus: -i/v boolus 1mg iga 3-5 min järel *anafülaktiline reaktsioon: -i/m 0,3-0,5mg LAHJENDAMATA!!! -i/v boolus LAHJENDATULT 0,9% NaCl ; TEHAKSE 1:10 LAHJENDUS JA MANUSTATALSE 1ML *Epipen i/m 1 annus 0,3mg reielihasesse- pt. saab ise seda manustada Milliseid muutusi võib näha dopamiini, dobutamiini ja isoprenaliini manustamisel organismis(millist toimet raviained organismis avaldavad?) Kuidas antud raviaineid manustatakse boolus, infusioon?
Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafik koostatakse standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide (katseklaasid 4, 5, 6) absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg /ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A). Kui kasutatakse nn korrigeeritud absorptsiooni väärtusi ja eksperiment on korrektselt läbi viidud (lahjendused täpselt tehtud), siis kujutab graafik endast koordinaatide alguspunkti läbivat sirget. Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide (katseklaasid 2 ja 3) keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Kui tundmatut proovi (naturaalset mahla vm) lahjendati enne värvusreaktsiooni läbiviimist, siis tuleb arvestada, et graafikult leitakse glükoosi kontsentratsioon uuritava proovi lahjendatud lahuses ja see väärtus vajab lahjendus-
annaabi.ee 
