Ensümaatilise meetodiga glükoosisisalduse määramine (0)

3.3. Glükoosisisalduse ensümaatiline määramine
Kaisa Rahuoja
093421 KATB41
Tallinna tehnikaülikool
Matemaatika- loodusteaduskond
Bioorgaanilise keemia õppetool
3.3.Glükoosisisalduse määramine ensümaatilisel meetodil
Kaisa Rahuoja
093421 KATB41
3.3. Glükoosisisalduse määramine ensümaatilisel meetodil
Katse käik:
1. Uuritava lahuse ettevalmistamine : prooviks, milles hakatakse glükoosisisaldust määrama, on sidrunimahl. Proovi saamiseks pressisin kõigepealt sidrunist välja väikese koguse mahla (1-2 ml) ning tegin sellest praktikumi juhendaja soovituste kohaselt 50-kordse lahjenduse. Selleks pipeteerisin 0,5 ml sidrunimahla automaatpipetiga 25ml mõõtkolbi ning täitsin kolvi kriipsuni destilleeritud veega.
2. Glükoosilahuse valmistamine kalibreerimisgraafiku koostamiseks: Glükoosilahused valmistan glükoosi standardlahuse lahjendamise teel proovide järjestikkusel lahjendamisel saades lahused kontsentratsioonidega 0,25 mg/ml, 0,125 mg/ml ja 0,062 mg/ml. Lahjendused tehakse samm-sammulisel lahjendamisel. Selleks valmistatakse esmalt standardlahusest kindla kontsentratsiooniga (0,25mg/ml), saadud lahjendatakse kaks korda ning teist lahust veel omakorda kaks korda. Pärast lahjenduste tegemist loksutatakse lahused korralikult läbi.
3. Värvusreaktsiooni labiviimine: Statiivi asetatakse 6 puhast ja kuiva katseklaasi ning nummerdatakse need. Proovid valmistatakse järgnevalt:
Katseklaas
Katseklaasi sisu
millega on tegu?
optiline tihedus
1
1 ml dest vesi + 3ml tööreaktiiv
kontrollproov
0,0690 D
2
1ml uuritav lahus + 3ml tööreaktiiv
paraleelkatse
0, 1222 D
3
1 ml uuritav lahus+ 3ml tööreaktiiv
paraleelkatse
0, 1156 D
4
1 ml 0,25 mg/ml glükoosilahus+ 3ml tööreaktiiv
standardlahuse lahjendus
0,2828 D
5
1 ml 0,125 mg/ml glükoosilahus+ 3ml tööreaktiiv
standardlahuse lahjendus
0,1870 D
6
1ml 0,062 mg /ml glükoosilahus+ 3ml tööreaktiiv
standardlahuse lahjendus
0,1176 D
Kõiki proove loksutatakse kohe peale tööreaktiivi lisamist ning fikseeritakse reaktsiooni alguse aeg. Reaktsiooni toimumiseks jäetakse katseklaasid 20 minutiks seisma. Reaktsiooni lõppedes peaksid glükoosi sisaldavad lahused muutuma tekkinud K-heksatsüaanoferraat (III) toimel kollaseks. Seejärel mõõdetakse spektrofotomeetriga kõikide lahuste optilised tihedused 410 nm juures.
Saadud glükoosilahuste optilise tiheduse ja teadaolevate kontsentratsioonide põhjal koostatakse kalibreerimisgraafik, mille põhjal määratakse uuritava proovi – sidrunimahla- glükoosisisaldus.
Loen kalibreerimisgraafikult uuritava lahuse optilise tiheduse väärtuste põhjal, et glükoosisisaldus uuritavas lahuses oli vastavalt:

0,07 mg/ml

0,065 mg/ml
Leian vastavalt keskmise glükoosisisalduse lahjendatud sidrunimahla proovis 0,07 + 0,065/2 = 0,0675 mg/ ml.
Arvutan nüüd välja glükoosisisalduse sidrunimahlas arvestades tehtud 50-kordset lahjendust. Glükoosisisaldus arvutatakse massiprotsentides (X%) naturaalse mahla suhtes.
X = C × L × 103 × d× 100 = 0,0675×50×10-3×1.031328×100 = 0,348 %
Seega sajas grammis sidrunimahlas on katseandmete põhjal glükoosi 0,348g
Kirjanduse andmetel sisaldub 100g sidrunimahlas keskmiselt 0,5g glükoosi.
Järeldus: Erinevused katsetulemuste ja teoreetiliste kirjandusest pärinevate tulemuste vahel on mõistetavad, sest iga sidrun on pisut erinev ja katsetulemus saadi vaid ühe üksiku sidruni testimisel, kirjandusest on võetud aga keskmine sidruni glükoosisisaldus, mis ilmselt on saadud mitmete sidrunite testimisel.
Kasutatud kirjandus:
http://www.aqua-calc.com/page/density-table/substance/Lemon-blank-juice-coma-and-blank-raw
http://tka.nutridata.ee/showFood.action?food.id=1924
3