12 0.1 0.08 Absorptsiooni väärtust (A) 0.06 0.04 0.02 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 Glükoosi kontsentratsioon (C, mg/ml) Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide (katseklaasid 2 ja 3) keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Kuna mina lahjendasin sidrunimahla enne värvusreaktsiooni läbiviimist, siis graafikult leitud glükoosi kontsentratsioon lahjendatud sidrunimahlas tuleb korrutada lahjendusteguriga. Paralleelproovide (katseklaasid 2 ja 3) keskmine optiline tihedus (0,1359 + 0,1251) / 2 = 0,1305 Et saada täpne glükoosi kontsentratsioon, leian sirge võrrandi, mis väljendab kaliibrimisgraafikut. Sirge võrrand kahe punkti abil:
Katseklaas nr 4 (C=0,25) - 0,056 A Katseklaas nr 3 0,100 A Katseklaas nr 2 0,102 A Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafik koostatakse kolme lahjendatud ja kindla kontsentratsiooniga proovide optilise tiheduse väärtuste alusel. Kui katse on korrektselt läbi viidud, peaks graafik endast ette kujutama koordinaatide alguspunkti läbivad sirget. Glükoosi kontsentratsioon leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Paralleelproovide keskmine optilise tiheduse väärtus oli 0,101 A, sellele vastav C on 0,42 mg/ml. Glükoosisisalduse leidmiseks kasutame mahla puhul valemit: X= (C * L * 10-3 * 100) / d = (0,42*25*10-3 * 100) / 1 = 1,05 % C= glükoosisisaldus uuritavas lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule (mg/ml) L= lahjendustegur (antud katses minul L=25) d= mahla tihedus (võib lugeda võrdseks 1-ga) Järeldus
Katseklaas nr.5: 0,117 A 0,054 A = 0,063 A Katseklaas nr.6: 0,085 A 0,054 A = 0,031 A Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Koostan kaliibrimisgraafik katseklaaside nr.4, nr.5 ja nr.6 absorptsiooni väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni C (mg/ml) ja y-telg näitab proovi absorptsiooni väärtust (A). Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide (katseklaasid nr.2 ja nr.3) keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Paralleelproovide keskmine väärtus: Vaadates graafikule leian glükoosi kontsentratsiooni minu uuritavas lahuses. Kui absorptsioon võrdub 0,0025 A, siis glükoosi kontsentratsioon C = 0,005 mg/ml. Kuna alguses mina lahjendasin apelsiinimahla, siis oma saadud tulemust pean korrutama lahjendusteguriga. Apelsiinimahla glükoosi kontsentratsioon võrdub 1 mg/ml.
6) Glükoosi lahjendus 3 – 1 ml 0,062 mg/ml glükoosilahust Igasse katseklaasi lisatakse seejärel 3 ml tööreaktiivi ja loksutatakse koheselt. Fikseeritakse reaktsiooni algusaeg. Katseklaase hoitakse toatemperatuuri 20 minutit. Pärast ootamist mõõdetakse lainepikkusel 410 nm lahuste optilise tiheduse väärtused. Katse andmed λ = 410 nm 1) A = 0,055 2) A = 0,094 3) A = 0,093 4) A = 0,198 5) A = 0,127 6) A = 0,088 Paralleelproovide 2 ja 3 keskmine A = (0,094 + 0,093) / 2 = 0,0935 Kaliibrimisgraafik Kasutan graafiku tegemisel mõõdetud suurusi. Sellega seoses muutus kaliibrimissirge võrrand ning järgnevad arvutused saavad muudetud. 0.25 0.2 f(x) = 0.58x + 0.05 0.15 Absoptsioon λ=410 nm 0.1 0.05
· Nr2 viinamarjamahl 0,152 ABS 0,052 ABS = 0,1 ABS · Nr3 viinamarjamahl 0,153 ABS 0,052 ABS = 0,101 ABS · Nr4 esimene lahjendus 0,169 ABS 0,052 ABS = 0,117 ABS · Nr5 teine lahjendus 0,110 ABS 0,052 ABS = 0,058 ABS · Nr6 kolmas lahjendus 0,083 ABS 0,052 ABS = 0,031 ABS Nr4 konsentratsioon on 2,5/10 = 0,25 mg/ml Nr5 konsentartsioon on 1,25/10 = 0,125 mg/ml Nr6 konsentratsioon on 0,625/10 = 0,0625 mg/ml Paralleelproovide keskmine optiline tihedus on (0,1+0,101) / 2 = 0,1005 ABS. Kaliibrimisgraafiku järgi on viinamarjamahla lahuse kontsentratsioon 0,215 mg/ml. Lahjendustegur on (1+249)/1=250. Algmahla kontsentratsiooni on 0,215 mg/ml x 250ml = 53,75 mg/ml. mg glükoos =1,54 ml 53,75 mg ainet sisaldub 1ml mahlas. Kui glükoosi tihedus on 1,54 g/ml, mis teeb 1540 mg/ml, siis sisaldub 53,75 mg :1540 mg/ml = 0,03 ml glükoosi 1ml mahlas. Järelikult on 1 ml mahlas 3% glükoosi.
minutiks seisma. Oli näha väga õrna kollakat värust. Seejärel määrasin spektrofotomeetr abil kõikide lahuste optilised tihedused. OPTILISED TIHEDUSED: KATSEKLAAS nr.1: 0,043 ABS KATSEKLAAS nr.2: 0,081-0,043= 0,038 ABS KATSEKLAAS nr.3: 0,083-0,043=0,04 ABS KATSEKLAAS nr.4: 0,131-0,043=0,088 ABS KATSEKLAAS nr.5: 0,089-0,043=0,046 ABS KATSEKLAAS nr.6: O,O67-0,043=0,024 ABS Kaliibrimisgraafik Paralleelproovide optiliste tiheduste keskmine on 0,038+0,04/2=0,039. Kaliibrimisgraafiku järgi on viinamarjamahla lahuse kontsentratsioon 0,15mg/ml. Lahjendustegur on 400. Algmahla kontsentratsioon on siis 400*0,15= 60 mg/ml Naturaalses mahlas on 60mg/ml glükoosi. 1 ml mahla on 1g mahla, ehk 1000mg mahla. Järelikult: 1000mg 100% = 60*100/1000=6% 60mg x% Kokkuvõte: Tegelikult peaksid viinamarjad sisaldama umbes 7% glükoosi, mis on ligilähedane selle, mis mina sain
optilised tihedused. Võrdluslahuseks on destilleeritud vesi. Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafik koostatakse standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide optilise tiheduse väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg /ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A). Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide (katseklaasid 2 ja 3) keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Lahutasin tulemustest nullproovi optilise tiheduse. Katseklaas Optiline tihedus 1 0 2 0,159 3 0,156 4 0,025
· Katseklaasidesse 2 ja 3 pipeteeritakse 1 ml uuritavat mahlalahust (2 paralleelproovi) · Katseklaasidesse 4, 5 ja 6 pipeteeritakse 1 ml erineva kontsentratsiooniga glükoosilahust · Igasse katseklaasi pipeteeritakse 3 ml tööreaktiivi ja loksutatakse kohe · Katseklaase hoitakse 20 min toatemperatuuril · Lainepikkusel 410 nm mõõdetakse lahuste optilise tiheduse väärtused Koostatakse kaliibrimisgraafik ja tehakse kindlaks glükoosi kontsentratsioon Paralleelproovide optilised tihedused: 0,086 ja 0,087, keskmine on 0,0865. Massiprotsent arvestades 400x lahjendust: Järeldus: Erinevates allikates on apelsini glükoosisisaldus vahemikus 2% - 8%, seega võib eeldada, et katse tulemused on rahuldavad. Kasutatud apelsini glükoosisisaldus on 5,2374 4,75 grammi glükoosi 100 grammi mahla kohta. Allikad: http://thepaleodiet.com/fruits-and-sugars/ http://www.aqua-calc.com/page/density-table/substance/orange-blank-juice-coma-and-blank-
kontrollproov 0,047 0 0 Oma proov 1 0,181 0,134 ? Oma proov 2 0,183 0,136 ? Lahjendus 1 0,156 0,109 0,25 Lahjendus 2 0,098 0,051 0,125 Lahjendus 3 0,071 0,024 0,062 Paralleelproovide keskmine optiline tihedus on (0,134+0,136)/2 = 0,135 ABS. Kaliibrimisgraafiku järgi on melonimahla lahuse kontsentratsioon 0,36 mg/ml Kalibreerimisgraafikult lugesin andmed järgnevalt: kuna tegemist on lineaarse sirgega, võin jagada otsitava suuruse (0,135) kahega, kuna graafik pole piisavalt suur, et otsitavat suurust kohe leida, vastava suuruse, mis sain 0,18, korrutan aga kahega, et saada vajalikku suurust. Selle alusel sain graafikult 0,36 mg/ml
04 0.03 0.02 0.01 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 glükoosi kontsentratsiooni (C, mg /ml) Arvutused 0,0732+ 0,0890 Paralleelproovide keskmine optiline tihedus: =0,0811|¿| 2 Kaliibrimissgraafiku abil leidsin, et sellele optilisele tihedusele vastab glükoosi kontsentratsioon: C = 0,2377 mg/mL (200 korda lahjendatud lahuses) Tundmatu proovi glükoosisisaldus on seega: 0,2377 ×200=47,54 mg/mL Glükoosisisalduse massiprotsentides naturaalse mahla suhtes arvutasin valemiga: -3
Saadud andmete põhjal koostasin graafiku (x-teljel glükoosi kontsentrasioon (C), y-teljel sellele vastav ABS). Graafik peaks olema koordinaatide alguspunkti läbiv sirge (korrektne katse). ABS C Sirge ei läbi lineaarselt kõiki nelja punkti katsevea tõttu. Glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine: Glükoosi kontsentratsiooni uuritavas lahuses leian kaliibrimisgraafikult vastavalt paralleelproovide keskmisele optilise tiheduse väärtusele (0,085). Valem: X= X glükoosisisaldus uuritava proovi kuivaines ? % (kaliibrimissirge järgi) mg/ml C glükoosi konts. uuritavas lahuses 0,21 mg/ml V1 uuritava lahuse üldmaht ml 200 ml L lahjendustegur 1 10-3 tegur üleminekuks grammidele 10-3 V2 värvusreaktsiooni läbiviimiseks võetud 1 ml uuritava lahuse üldmaht ml
0,02 0,01 0 0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12 0,14 0,16 0,18 0,2 0,22 0,24 [Glyc] mg/ml Tegelik Läbi tõmmatud sirge Glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafikult vastavalt paralleelproovide keskmisele optilise tiheduse väärtusele. Proov D Korrigeeritud D 0 0,032 0 Mesi 1 0,110 0,078 Mesi 2 0,112 0,08 Keskmine Korrigeeritud D: 0,079 Glükoosi sisaldus uuritava proovi kuivaines (X, %) arvutatakse vastavalt valemile: C glükoosi konts. mee lahuses (kaliibrimissirge järgi), mg/ml 0,168 V1 mee lahuse üldmaht, ml 251
Katseklaas nr 6 (C6 = 0,062 mg/mL) 0,0226 - 0,0135 = 0,0091 ABS Tabel . Katseandmed Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafiku koostasin standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosikontsentratsiooniga proovide absorptisooni väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust. Kasutasin korrigeeritud absorptsiooni väärtuseid. Joonis . Kaliibrimisgraafik Paralleelproovide keskmine optiline tihedus: Kaliibrimissgraafikult leidsin, et sellele optilisele tihedusele vastab glükoosi kontsentratsioon: Cglükoos/sidrunimahl = 0,2206 mg/mL (25 korda lahjendatud lahuses) Tundmatu proovi glükoosisisaldus on seega: Glükoosisisalduse massiprotsentides naturaalse mahla suhtes arvutasin valemiga: C glükoosisisaldus uuritavas lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule (mg /mL) L mahla lahjendustegur d mahla tihedus (g /cm3) d = 1,031328 g/cm3 Järeldus
Nr 2: 0,370 ABS Nr 3: 0,361 ABS Nr 4: 0,109 ABS Nr 5: 0,068 ABS Nr 6: 0,036 ABS Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafiku koostasin standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovige (katseklaasid 4, 5, 6) absorptsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Glükoosi kontsentratsiooni sidrunimahlas leian kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Glükoosi kontsentratsioon lahjendatud lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule optilise tiheduse 0,365 ABS juures: Glükoosisisaldus massiprotsentides naturaalse mahla suhtes arvutatakse vastavalt valemile: Kus: glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses kaliibrimissirge järgi, . mahla lahjendustegur mahla tihedus, Katseandmed: 1 Järeldused:
kontsentratsiooniga proovide absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentartsiooni (C, mg/ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A). Kui kasutatakse niinimetatud korrigeeritud absorptsiooni väärtusi ja eksperiment on korrektselt läbi viidud, siis on graafikuks sirge, mis läbib koordinaatide alguspunkti. Glükoosi kontsentratsiooni uuritavas lahuses leidsin kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. 0.12 0.1 0.08 0.06 Optiline tihedus D 0.04 0.02 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 Glükoosi sisaldus mg/ml
Excelisse sisestatud tabel: Glükoosi Optiline sisaldus tihedus (mg/ml) (ABS) 0 0 0,062 0,034 0,125 0,076 0,25 0,153 Saadud graafik: Sirge läbib põhimõtteliselt kõiki nelja punkti lineaarselt. GLÜKOOSI KONTSENTRATSIOONI KINDLAKSTEGEMINE: Leian glükoosi kontsentratsiooni uuritavas lahuses kaliibrimisgraafikult vastavalt paralleelproovide keskmisele optilise tiheduse väärtusele : Kaliibrimissgraafikult leidsin, et sellele optilisele tihedusele vastab glükoosi kontsentratsioon: Cglükoos/sidrunimahl = 0,022 mg/mL (100 korda lahjendatud lahuses) Tundmatu proovi glükoosisisaldus on seega: Leian glükoosisisalduse mahlas (kuivainesisaldus
Kaliibrimisgraafik Proovi absorptsiooni väärtus (A) 0.03 0.08 0.13 0.18 0.23 0.28 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 Glükoosi konsentratsioon C mg/mL Miks sirge ei läbi 0-punkti Parandasin graafikut, nüüd läbib 0,117+0,116 Paralleelproovide keskmine optiline tihedus: =0,1165|¿| 2 Kaliibrimissgraafikult leidsin, et sellele optilisele tihedusele vastab glükoosi kontsentratsioon: Cglükoos/apelsinimahl = 0,187 mg/mL (25 korda lahjendatud lahuses) Tundmatu proovi glükoosisisaldus on seega: 0,187 ×25=4,675 mg/mL Glükoosisisalduse massiprotsentides naturaalse mahla suhtes arvutasin valemiga: X =C × L ×10−3 ×d ×100
29 Kaliibrimisgraafik koostatakse standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide (katseklaasid 4, 5, 6) absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg /ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A). Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide (katseklaasid 2 ja 3) keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. 10. Oletagem, et glükoosi kontsentratsioon 200 korda lahjendatud viinamarjamahlas on 0,5 mg/ml. Mitu massi% glükoosi sisaldub selles mahlas? Eeldagem, et mahla tihedus d =1,0 g/cm3? glükoosisisaldus massiprotsentides (X,%) naturaalse mahla suhtes : X = C L 10-3 d 100 , kus C glükoosisisaldus uuritavas lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule (mg /ml), L mahla lahjendustegur d mahla tihedus (g /cm3).
kontsentratsiooniga proovide (katseklaasid 4, 5, 6) absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg /ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A). Kui kasutatakse nn korrigeeritud absorptsiooni väärtusi ja eksperiment on korrektselt läbi viidud (lahjendused täpselt tehtud), siis kujutab graafik endast koordinaatide alguspunkti läbivat sirget. Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide (katseklaasid 2 ja 3) keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Kui tundmatut proovi (naturaalset mahla vm) lahjendati enne värvusreaktsiooni läbiviimist, siis tuleb arvestada, et graafikult leitakse glükoosi kontsentratsioon uuritava proovi lahjendatud lahuses ja see väärtus vajab lahjendus- teguriga korrutamist. Glükoosisisaldus massiprotsentides (X, %) proovi kuivaines (mesi vm materjal, mille niiskusesisaldus on teada) arvutatakse vastavalt valemile:
annaabi.ee 
