Töö eesmärk Kohvi koguse määramine ekstraktiivainete sisalduse põhjal. Seadmed ja töövahendid -pipetid -keeduklaasid -mõõtsilinder 100ml -mõõtkolvid 200 ml või 250ml -lehtrid -kohvifiltrid -elektripliit -spektrofotomeeter Töö käik Mulle oli antud 1 uuritav proov, milles oli minu jaoks tundmatu hulk kohvipulbrit. Lisaks kaalusin 2 kontrollproovi jaoks kohvipulbrit. Nende mass oli mulle juba teada, kuna kaalusin nad ise. Kallasin nii uuritavale proovile kui ka kontrollproovidele peale 100ml keevat destilleeritud vett. Lasin neil seista ning seejärel filtreerisin ära. Sademe võisin ära visata, filtraadi viisin aga mahuliselt 250ml-ni. Jahutasin kõik 3 filtraati ära ning mõõtsin optilised tihedused spektrofotomeetril 490nm lainepikkusega destilleeritud vee vastu. Katsetulemused: Katse 1 m(kohvipulbri kaalutis)= 2,09 g
Katsekaas nr 4, 5 ja 6 pipeteerida igaühte 1 ml erineva kontsentratsiooniga glükoosilahust Igasse pipeteerida 3 ml tööreaktiivi, loksutada, fikseerida aeg ning oodata 20 minutit. Seejärel mõõta lahuste optilise tiheduse väärtused lainepikkusel 410 nm, võrdluslahusena kasutatakse destilleeritud vett. NB! Ka kontrollproov võib anda madala optilise tiheduse näidu ja seega tuleb kõikidest glükoosis sisaldavate lahuste optilise tiheduse väärtustest lahutada kontrollproovi optilise tiheduse väärtus, nende põhjal koostataksegi kaliibrimisgraafik. Katseklaas nr 1 - 0,103 A Katseklaas nr 6 (C=0,062) 0,119 A Katseklaas nr 5 (C=0,125) - 0,135 A Katseklaas nr 4 (C=0,25) - 0,162 A Katseklaas nr 3 0,203 A Katseklaas nr 2 0,205 A Lahutan maha kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse: Katseklaas nr 1 - 0 A Katseklaas nr 6 (C=0,062) 0,016 A Katseklaas nr 5 (C=0,125) - 0,032 A Katseklaas nr 4 (C=0,25) - 0,056 A Katseklaas nr 3 0,100 A
toatemperatuuril. ( mina lisasin tööreaktiivi kell 11.17 ja lasin proovidel toatemperatuuril seista kella 11.37-ni). · Spektromeetril mõõtsin lainepikkusel 410 nm lahuste optilised tihedused, kasutades võrdluslahusena destilleeritud vett. Kuna kontrollproov annab teatava madala optilise tiheduse väärtuse, siis tuleb kõikide glükoosilahuste optilise tiheduse väärtusi korrigeerida, lahutades neist kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse. Optilised tihedused: Optiline tihedus (ABS) Optilisest tihedusest maha lahutatud kontrollproovi värtus (ABS) Veega proov 0,057 Proov 1 0,183 0,126 Proov 2 0,188 0,131
tulemusena glükoosi sisaldavad lahused värvuvad tekkiva kaaliumheksatsüanoferraat(III) toimel kollaseks. Lainepikkusel 410 nm mõõdetakse lahuste optilise tiheduse väärtused. Võrdluslahusena kasutatakse destilleeritud vett. NB! Kuna ka kontrollproov võib anda madala optilise tiheduse näidu, siis tuleb kõikide glükoosi sisaldavate lahuste (katseklaasid 2–6) optilise tiheduse väärtusi korrigeerida, lahutades neist kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse. Korrigeeritud väärtusi kasutatakse ka kaliibrimisgraafiku koostamisel. Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafik koostatakse standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide (katseklaasid 4, 5, 6) absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg/ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A)
Põhilised puudused olid seotud mittenõuetekohase märgistusega ning aegunud taimekaitsevahendite müügiga. Paaril korral oli tegemist Eestis registreerimata taimekaitsevahendi müügiga. 1/4 taimekaitsetunnistuse alusel taimekaitsevahendeid müüval ettevõttel puudus nõuetekohane müügiarvestus. 1/5 hoiuruumidest puudub ohumärgistus ja ligi 1/10 ladudest on probleemiks vanad, utiliseerimist vajavad jäägid. Taimekaitsevahendite jääkide kahtlusel võeti 21 kontrollproovi taimsest toodangust, millest kahes proovis (porgand ja söögikaalikas) leiti lubatust suuremas koguses herbitsiidi trifluraliin (Treflan) jääke ning ühes kapsaproovis ületas lubatud piirnormi insektitsiidi formotioon (Anthio 25 EC) sisaldus. Milliseid seaduse punkte rikuti? · Taimekaitsevahendi pakendi märgistus peab andma taimekaitsevahendi ostjale piisavalt teavet taimekaitsevahendi ohtlikkuse ja muude omaduste, vahendi säilivusaja ja -nõuete ning kasutamisviiside kohta.
Biokeeemia laboratoorne töö No 2 Glükoosisisalduse määramine ensümaatilisel meetodil. Õpperühm: YAGB21 Töö teostaja: Alexander Kirichuk Õppejõud: Tiina Randla Õppejõude märkused: Glükoosi sisalduse määrmine. Kas kasutasite korrigeeritud optilise tiheduse väärtusi, millest on kontrollproovi OD maha arvatud? Sellisel juhul peaks graafikul olema koordinaatide alguspunkti läbiv sirge. St et taas tuleb kasutada matemaatilisi manipulatsioone ning punktiparvest too sirge läbi tõmmata. Edasi tuleb uuritava materjali glükoosisisaldus tõepoolest välja arvutada (kus see praegu on?) ja tulemust analüüsida. Sedapuhku saab tulemust võrrelda teooriaga kui palju selline toode tavaliselt glükoosi sisaldab. Teoreetilised alused: Esimene etap:
6. Katseklaasides olevad lahuses värvusid suuremal või vähemal määral kollakaks, see toimus K3[Fe(CN)6] toimel ja näitas glükoosi olemasolu. 7. Mõõtsin spektrofotomeetril (lainepikkus 410 nm) lahuste optilised tihedused destilleeritud vee vastu. 8. Kuna ka kontrollproov andis madala optilise tiheduse väärtuse (tööreaktiivi komponentide tõttu), lahutasin glükoosi sisaldavate lahuste (katseklaasid 2-6) optiliste tiheduste väärtustest kontrollproovi oma). Kaliibrimisgraafiku koostamine: katseklaas Optilised tihedused, Korrigeeritud optilised lainepikkus 410 nm tihedused nr. 1: kontrollproov (dest. vesi) 0,037 - nr. 2: greip I 0,059 0,022 Keskmine nr. 3: greip II 0,062 0,025 0,0235 nr. 4: glükoosilahus (konts
reaktsioonid. 20 minuti pärast mõõdan lainepikkusel 410 nm lahuste optilise tiheduse väärtused. Võrdlahusena kasutan dest. vett. Minu tulemused: Katseklaas nr.1: 0,054 A Katseklaas nr.2: 0,144 A Katseklaas nr.3: 0, 139 A Katseklaas nr.4: 0, 186 A Katseklaas nr.5: 0,117 A Katseklaas nr.6: 0,085 A Kuna kontrollproov andis madala optilise tiheduse näidu, siis kõikidest väärtustest (katseklaasid 2-6) lahutan kontrollproovi optilise tiheduse väärtust. Katseklaas nr.1: 0,054 A Katseklaas nr.2: 0,144 A - 0,054 A = 0,090 A Katseklaas nr.3: 0,139 A 0,054 A = 0,085 A Katseklaas nr.4: 0,186 A 0,054 A = 0,132 A Katseklaas nr.5: 0,117 A 0,054 A = 0,063 A Katseklaas nr.6: 0,085 A 0,054 A = 0,031 A Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Koostan kaliibrimisgraafik katseklaaside nr.4, nr.5 ja nr.6 absorptsiooni väärtuste alusel.
destveega. Uuritava lahusega tehakse 2 paralleelkatset, glükoosi standardlahusest valmistatud lahjendustega igaühega 1 katse. Katseklaasidesse pipeteeritakse 1 ml lahust ning 3 ml tööreaktiivi ning loksutatakse ühtlase kontsentratsiooni saavutamiseks. Fikseeritakse reaktsiooni algusaeg ning hoitakse 20 minutit toatemperatuuril. Lainepikkusel 410 nm määratakse optilised tihedused kõikides katseklaasides. Kontrollproovi väärtus lahutatakse kõikidest teiste lahuste optiliste tiheduste väärtustest. Katseklaa Kontsentratsioon Optiline tihedus Lahus s nr (mg/ml) ( = 410 nm) 1. destilleeritud vesi 0,031 2. uuritav lahus 0,093-0,031 = 0,062 3
6. Katseklaasides olevad lahuses värvusid kollaseks (ka kontrollproov), see toimus K3[Fe(CN)6] toimel ja näitas glükoosi olemasolu. 7. Mõõtsin spektrofotomeetril (lainepikkus 410 nm) lahuste optilised tihedused, võrduslahuseks destilleeritud vesi. 8. Kuna ka kontrollproov andis madala optilise tiheduse väärtuse (tööreaktiivi komponentide tõttu), lahutasin glükoosi sisaldavate lahuste (katseklaasid 2-6) optiliste tiheduste väärtustest kontrollproovi oma). Kaliibrimisgraafiku koostamine: Optilised tihedused (katseklaasid 2-6 korrigeeritud), lainepikkus 410 nm katseklaas nr. 1: kontrollproov (dest. vesi) 0,133 nr. 2: mesi I 0,083 nr. 3: mesi II 0,087 nr. 4: glükoosilahus (konts. 0,25 mg/ml) 0,109 nr. 5: glükoosilahus (konts. 0,125 mg/ml) 0,039 nr
õunamahla lahus) 4., 5. ja 6. katseklaas – pipeteerin igaühte 1 ml erineva kontsentratsiooniga glükoosilahust Pipeteerin igasse katseklaasi 3 ml tööreaktiivi ja loksutan kohe. Fikseerin reaktsiooni alguse aja ja hoian katseklaase 20 minutit toatemperatuuril. Seejärel mõõdan spektrofotomeetrilisel meetodil lainepikkusel 410 nm lahuste optilised tihedused. Kuna kontrollproov andis madala optilise tiheduse näidu, siis lahutan kõikide teiste lahuste optiliste tiheduste väärtustest kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse. Proovi number Optiline tihedus 1.0-proov 0,0611 2.Õunamahl 1 0,0845-0,0611=0,0234 3.Õunamahl 2 0,0840-0,0611=0,0229 4.Glükoosilahus 0,25 0,1205-0,0611=0,0594 mg/ml 5.Glükoosilahus 0,125 0,0748-0,0611=0,0137 mg/ml 6.Glükoosilahuse 0,062 0,0617-0,0611=0,0006 mg/ml Koostan kaliibrimisgraafiku Kuna kaliibrimisgraafik peaks olema linearne ning minu
Gl Katseklaas 4 0,141 0,141-0,065=0,076 0,125 2x lahjendus+ tööreaktiiv Gl Katseklaas 5 0,099 0,099-0,065=0,034 0,062 2x lahjendus+ tööreaktiiv Kuna ka kontrollproov võib anda madala optilise tiheduse näidu, siis korrigeerisin kõikide glükoosi sisaldavate lahuste optilise tiheduse väärtuseid, lahutades neist kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse. Korrigeeritud väärtusi tuleb kasutada kalibreerimisgraafiku koostamisel. KALIBREERIMISGRAAFIKU KOOSTAMINE JA GLÜKOOSI KONTSENTRATSIOONI KINDLAKSTEGEMINE: Kalibreerimisgraafiku koostasin standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide absorptisooni väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (ABS). Excelisse sisestatud tabel: Glükoosi Optiline
Uuritavad tüved on vedelsöötmes ette kasvatatud. 1 ml rakususpensiooni pipeteeritakse 1,5 ml Eppendorfidesse ja seejärel tsentrifuugitakse 10 minutit. Seejärel supernatant eemaldatakse ja biomass suspendeeritakse 500 l puhvris. Loksutatakse ja segatakse Vortexil. Iga kultuuri puhul kasutatakse uut pipetiotsikut. Rep-PCR viiakse läbi eelnevalt valmistatud Mastermixi segu kasutades. Mastermixi segu jaotatakse PCR katsutitesse. Igasse katsutisse lisatakse 1 l kultuurisuspensiooni ja kontrollproovi pipeteeritakse 1 l MilliQ vett. Proovid tsentrifuugitakse ja asetatakse termotsüklerisse PCR reaktsiooni läbiviimiseks. PCR kestab tunde, seepärast jäetakse proovid üleöö reageerima ja järgmisel päeval viiakse läbi agaroos- geelelektroforees. Selleks valmistatakse geel, mille sisse tehakse süvendid proovide ja markerite jaoks. Geeli ühte auku kantakse 5 l proovi. Markerite jaoks mõeldud pesadesse pannakse 3 l markerit. Geeli voolutatakse 60 minutit
Uuritavad tüved on vedelsöötmes ette kasvatatud. 1 ml rakususpensiooni pipeteeritakse 1,5 ml Eppendorfidesse ja seejärel tsentrifuugitakse 10 minutit. Seejärel supernatant eemaldatakse ja biomass suspendeeritakse 500 l puhvris. Loksutatakse ja segatakse Vortexil. Iga kultuuri puhul kasutatakse uut pipetiotsikut. Rep-PCR viiakse läbi eelnevalt valmistatud Mastermixi segu kasutades. Mastermixi segu jaotatakse PCR katsutitesse. Igasse katsutisse lisatakse 1 l kultuurisuspensiooni ja kontrollproovi pipeteeritakse 1 l MilliQ vett. Proovid tsentrifuugitakse ja asetatakse termotsüklerisse PCR reaktsiooni läbiviimiseks. PCR kestab tunde, seepärast jäetakse proovid üleöö reageerima ja järgmisel päeval viiakse läbi agaroos- geelelektroforees. Selleks valmistatakse geel, mille sisse tehakse süvendid proovide ja markerite jaoks. Geeli ühte auku kantakse 5 l proovi. Markerite jaoks mõeldud pesadesse pannakse 3 l markerit. Geeli voolutatakse 60 minutit
kontsentratsiooni. Hoidsin katseklaase 20 minutit toatemperatuuril. Mõõtsin spektrofotomeetriga lainepikkusel 410 nm lahuste optiliste tiheduste väärtused. Võrdluslahusena kasutasin destilleeritud vett. Tulemused Kuna ka kontrollproov võib anda madala optilise tiheduse näidu (tingitud tööreaktiivi komponentidest), siis tuleb kõikide glükoosi sisaldavate lahuste(katseklaasid 2-6) optiliste tiheduse väärtusi korrigeerida, lahutades neist kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse. Korrigeeritud väärtusi kasutan ka kalibreerimisgraafiku loomisel. Proov Optiline tihedus Katseklaas nr 1 (Kontrollproov/0-proov) 0,004 Mis on selle näit peale korrigeerimist Pärast korrigeerimist loeme selle näidu 0-ks. Katseklaas nr 2 (I paralleelproov) 0,121 - 0,004 = 0,117
Metoodika: mdetakse küveti + solvendi signaali, et reguleerida selle järgi aparaadi nulli näit. SpektrofluorimeetridValgusallika intensiivsus sltub lainepikkusest, nagu ka detektori reaktsioon. Mlemad parameetrid varieeruvad ka ajas. Kahe kiire süsteemides saab sltuvusi krvaldada valgusallika moduleerimise ja valguskiire ühe osa suunamisele kontrol-llahusele. Modulaator on ühendatud peegliga nii, et kui modulaator on avatud esimenst korda läheb kiir läbi kontrollproovi. Kui modulaator on avatud teist korda läheb kiir läbi proovi. Kontroll-lahus on tuntud kvantsaagisega aine (quantum counter), mille spekter säilitatakse arvutis ja selle abil saab korrigeerida tundmatuid spektreid. 15 : 2D spektroskoopia emissioonspekreid mdetakse väga paljudel ergastuse lainepikkuse väärtustel.
Olles eelnevalt tutvunud spektrofotomeetria põhimõtetega (vt p 2 B) ja praktikumis kasutatava seadme tööjuhendiga, mõõdetakse lainepikkusel 410 nm lahuste optilise tiheduse väärtused. Võrdluslahusena kasutatakse destilleeritud vett. NB! Kuna ka kontrollproov võib anda madala optilise tiheduse näidu (tingitud tööreaktiivi komponentidest), siis tuleb kõikide glükoosi sisaldavate lahuste (katseklaasid 26) optilise tiheduse väärtusi korrigeerida, lahutades neist kontrollproovi optilise tiheduse väärtuse. Korrigeeritud väärtusi kasutatakse ka kaliibrimisgraafiku koostamisel. Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Kaliibrimisgraafik koostatakse standardlahuse lahjendamisel saadud kindla glükoosi kontsentratsiooniga proovide (katseklaasid 4, 5, 6) absorbtsiooni (optilise tiheduse) väärtuste alusel. Graafiku x-telg näitab glükoosi kontsentratsiooni (C, mg /ml) ja y-telg proovi absorptsiooni väärtust (A)
Keskkonnakaitseinspektoril on õigus kontrollida sõidukit, traktorit, liikurmasinat, eritöömasinat või ujuvvahendit, sõltumata selle paiknemise kohast, kui on alust arvata, et: a) see kahjustas, kahjustab või võib kahjustada keskkonda; b) seda kasutatakse jahipidamisel, kalapüügil või loodussaaduse loodusest muul viisil hankimisel; jne 2) Füüsilise isiku kontrollimine, Objekti kontrollimine, Kontrollproovi võtmine, Keskkonnajärelevalvealased ettekirjutused, Keskkonda kahjustava tegevuse peatamine, Omavolilise ehitise likvideerimine, Ettekirjutuse vaidlustamine, Ettekirjutuse kehtetuks tunnistamine, muutmine ja peatamine. 43. Keskkonnavastased süüteod ja sanktsioonid 2011 jõustus karistusseadustiku muudatus, millega kriminaliseeritakse keskkonnavastaseid tegusid mis seni olid käsitletavad väärtegudena või üldse
annaabi.ee 
