värv asendub selgelt täheldatava, püsiva roheka värvusega. AKTIIVSUSE ARVUTAMINE: Vedela invertaasi preparaadi uurimisel avaldatakse aktiivsus ensüümpreparaadi 1 ml kohta (). Arvutus viiakse läbi vastavalt valemile: kus C1- taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, mg/ml C2- taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml V1- reaktsioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, ml 103- tegur üleminekuks mikrogrammidele L- lahjendusmäär, mida kasutatai vedelast ensüümipreparaadist töölahuse valmistamisel T- hüdrolüüsi kestus s 180- glükoosi molekulmass V3 - proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V4 ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml Tulemused erinevad üksteisest: 62,63 100% 49,11 x%
0-proov 2 ml 1,8 mg/mL I-proov 13,8 ml 12,3 mg/mL II-proov 26,3 ml 26,3 mg/mL Arvutan invertaasi preparaadi aktiivsuse A valemi järgi: - taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, mg/ml taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml reaktsioonisegu üldmaht, ml - tegur üleminekuks mikrogrammidele - lahjendusmäär hüdrolüüsi kestus glükoosi molekulmass ensüümi töölahuse maht, ml ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml Järeldus: Invertaasi preparaadi aktiivsused on peaaegu võrdsed, seega katse õnnestus.
kus: C₁ - taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, mg/ml C₂ - taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml V₁- reaktaioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, ml V₂ - ensüümi töölahuse üldmaht, ml 103 – tegur üleminekuks mikrogrammidele T – hüdrolüüsi kestus, s 180 – glükoosi molekulmass V₃ - proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V₄ - ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml L – lahjendusmäär 10( 10,0−2,0 )∗26 ¿ 103∗5 0 A = =96,3 μkat /ml 600∗180∗1∗1 ( 18,0−2,0 )∗26∗103∗50 A ₂₀= =96,29 μkat / ml 1200∗180∗1∗1 A ₁₀+ A ₂₀ 96,3+96,29 A= = =96,295 μkat /ml 2 2 A₁₀ ja A₂₀ peaksid teineteisest erinema maksimaalselt 20% võrra, minu tulemuste erinevus jääb lubatud piiri
2) C=10,5 mg/ml 3) C=14,6 mg/ml Arvutatud aktiivsused: kus: C - taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, mg/ml C - taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml V- reaktaioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, ml V - ensüümi töölahuse üldmaht, ml 103 tegur üleminekuks mikrogrammidele T hüdrolüüsi kestus, s 180 glükoosi molekulmass V - proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V - ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml L lahjendusmäär A ja A peaksid teineteisest erinema maksimaalselt 20% võrra, kuid minu tulemuste erinevus on suurem. Katseviga võis tekkida invertaasi lahuse valmistamise käigus ning lahuste täpsete koguste pipeteerimisel. Samuti võib põhjus olla tiitrimises - arvatavasti märkasin lahuse roheliseks värvumist liiga hilja, seega olid lahused üle tiitritud.
kus: C1 taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, mg/ml, C2 taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml, V1 reaktsioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, ml, V2 ensüümi töölahuse üldmaht, ml 103 tegur üleminekuks mikrogrammidele, T hüdrolüüsi kestus, s, 180 glükoosi molekulmass, V3 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml, V4 ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml, L - lahjendusmäär Invertaasi preparaadi aktiivsus avaldatakse kahe aktiivsuse aritmeetilise keskmisena, kus ühes on ajaks 10 min = 600 s ja teises 20 min =1200 s. Kui töö on läbi viidud korrektselt, peaksid tulemused kokku langema või erinema teineteisest maksimaalselt 20% võrra. Kui aktiivsuste erinevus on oluliselt suurem, siis tuleb kindlasti analüüsida, kus võis töös viga tekkida. Tulemused Tiitrimiseks kulunud Cu2SO4 Taandavate suhkrute
kalibreerimisgraafikult taandavate suhkrute sisaldus mg-des 1 ml-s reaktsioonisegus võetud proovis. Vedela invertaasi preparaadi puhul arvutatakse invertaasi aktiivsus vastavalt valemile: A = (C2 - C1)*V1*103*L/T*180*V3*V4, kus C1 - taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis mg/ml C2 - taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml V1 - reaktsioonisegu üldmaht, ml 103 - tegur üleminekuks mikrogrammidele L - lahjendusmäär T - hüdrolüüsi kestus, s 180 - glükoosi molekulmass V3 - proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V4 - ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml Katseandmed: 0-proov: V(CuSO4) = 1,9 ml, seega C1 = 1,7 mg/ml 1-proov: V(CuSO4) = 10,1 ml, seega C10 = 8,9 mg/ml 2-proov: V(CuSO4) = 22,5 ml, seega C20 = 20,6 mg/ml V1 = E + S = 25 + 1 = 26 ml L = 50 T1 = 10 min = 600 s, T2 = 1200 s V3 = 1 ml V4 = 1 ml A10 = (8,9 - 1,7) * 26 * 103 * 50 / 600 * 180 * 1 * 1 = 86,7 kat/ml
Inveraati preparaadi aktsiivsus (A) arvutatakse: C1 – taandavate suhkrute sisaldus 0 – proovis C2 – taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis V1 – reaktsioonisegu üldmaht V2 – ensüümi töölahuse üldmaht 103 - tegur üleminekuks mikrogrammidele T – hüdrolüüsi kestus 180 – glükoosi molekulmass V3 – proovi maht taandavate suhkrute määramiseks V4 – ensüümreaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht L – lahjendusmäär Tööks kasutasin vedelat invertiini ja valmistasin 40 kordse lahjeduse. Katse- ja arvutustulemused Tiitrimiseks kulunud Cu2SO4 mahud: 1. 0 – proovis: 3,6 ml 2. 10 min – proovis: 17,8 ml 3. 20 min – proovis: 30,5 ml Taandavate suhkrute sisaldused: 1. 0 – proovis: 3,2 mg/ml 2. 10 min – proovis: 18,5 mg/ml 3. 20 min - proovis: 24,03 mg/ml Aktiivsus A10 : C1 = 3,2 mg/ml C2 = 15,8 mg/ml V1 = 1 + 25 = 26 ml V2 = 10 ml T = 10 min = 600 s V3 = 1 ml
ensüümi töölahuse üldmaht, tegur üleminekuks mikrogrammidele hüdrolüüsi kestvus, glükoosi molekulmass proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ensüümipreparaadi kaalutis, Vedela invertaasi preparaadi uurimisel avaldatakse aktiivsus ensüümipreparaadi 1 ml kohta . Arvutus viiakse läbi vastavalt valemile: Kus: lahjendusmäär, mida kasutati vedelast ensüümipreparaadist töölahuse valmistamisel. Invertaasi preparaadi aktiivsus avaldatakse kahe aktiivsuse aritmeetilise keskmisena. Kahe saadud tulemuse ja erinevus protsentides: Järeldused: Kui töö on läbi viidud korrektselt, peaksin tulemused kokku langema või erinema teineteisest maksimaalselt 20% võrra. Keskmine invertaasi preparaadi invertiini lahuse aktiivsus oli katse tulemusena . See näitab,
(kat/mL). Aktiivsuse arvutus: , kus C1 taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, mg/ml C2 taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/mL V1 reaktsioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, mL V2 ensüümi töölahuse üldmaht, mL 103 tegur üleminekuks mikrogrammidele T hüdrolüüsi kestus, sek 180 glükoosi molekulmass V3 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, mL V4 ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, mL L lahjendusmäär, mida kasutatai vedelast ensüümipreparaadist töölahuse valmistamisel Kahe aktiivsuse aritmeetiline keskmine kui invertaasi preparaadi aktiivsus: Järeldus A10 ja A19 peaksid kokku langema või üksteisest erinema maksimaalselt 20 % võrra. Minu tulemuste erinevus on: A19 A10-st 66,36 68,00-st (66,36/68)*100 % = 97,59 %. Erinevus: 100 %-97,59 % = 2,41 %. Aktiivsuste erinevus minu poolt sooritatud töös ei ole suur, seega võib katse selles mõttes lugeda õnnestunuks
C1-taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis C1=0.8mg C2-taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis. C10min=8.3mg;C20min=15.1mg. V1-reaktsioonisegu üldmaht. V1=25.5ml V2-ensüümi töölahuse üldmaht. V2=10ml 10³-tegur üleminekuks mikrogrammidele. T-hüdrolüüsi kestus. T10=600, T20=1200 180-glükoosi molekulmass. V3-proovi maht taandavate suhkrute määramiseks. V3=1 ml. V4-ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht. V4=0.5ml. L-lahjendusmäär, mida kasutati vedelast ensüümipreparaadist töölahuse valmistamisel. L=40. Invertaasi preparaadi aktiivsus avaldatakse kahe aktiivsuse aritmeetilise keskmisena. Selleks arvutan A10, kus C2 on taandavate suhkrute sisaldus hüdrolüüsi 10 minutil võetud proovis: A10=((8.3-0.8)*25.5*10³*40)/(600*180*1*0.5)=141.7 Ja A20, kus C2 on taandavate suhkrute sisaldus hüdrolüüsi 20 minutil võetud proovis: A20=((15.1-0.8)*25.5*10³*40)/(1200*180*1*0.5)=135.1
Kus : C1 taandavate suhkrute sisaldus 0 proovis, mg/ml C2 taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg/ml V1 reaktsioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, ml V2 ensüümi töölahuse üldmaht, ml T hüdrolüüsi kestus, s 180 glükoosi molekulmass V3 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V4 ensüümreaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml L lahjendusmäär Invertaasi preparaadi aktiivsus avaldatakse kahe aktiivsuse aritmeetilise keskmisena. Selleks arvutatakse katseandmete alusel ensüümi aktiivsus A10, kus C2 taandavate suhkrute sisaldus hüdrolüüsireaktsiooni 10. minutil võetud proovis ja A 20, kus C2 on taandavate suhkrute sisaldus hüdrolüüsireaktsiooni 20. minutil. Kui töö on viidud läbi korrektselt, peaksid tulemused kokku langema või erinema maksimaalselt 20 % võrra. Katseandmed ja arvutused.
(µkat/ml). Arvutus viiakse läbi vastavalt valemile: A = (C2-C1)*V1*L*103/T*180*V3*V4, kus: C1 taandavate suhrute sisaldus 0-proovis, mg/ml, C2 taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T, mg/ml, V1 reaktsioonisegu (hüdrolüüsisegu) üldmaht, ml, 103 tegur üleminekuks mikrogrammidele, T - hüdrolüüsi kestus, s, 180 glükoosi molekulmass, V3 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml, V4 ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml, L lahjendusmäär, mida kasutasin vedelast ensüümpreparaadist töölahuse valmistamisel. (A10 min=(8,2-3,4)*26*(1/50)*103/600*180*1*1=0,023 µkat/ml) (A20 min=(14,5-3,4)*26*(1/50)*103/1200*180*1*1=0,027 µkat/ml Arvutusvead!) A10 min=(8,2-3,4)*26*50*103/600*180*1*1=57,8 µkat/ml A20 min=(14,5-3,4)*26*50*103/1200*180*1*1=66,8 µkat/ml Invertaasi aktiivsuse avaldan kahe aktiivsuse aritmeetilise keskmisena. (A=(0,023+0,027)/2=0,025 µkat/ml) A=(57,8+66,8)/2=62,3 µkat/ml
annaabi.ee 
