Paralleelproovide keskmine optilise tiheduse väärtus oli 0,101 A, sellele vastav C on 0,42 mg/ml. Glükoosisisalduse leidmiseks kasutame mahla puhul valemit: X= (C * L * 10-3 * 100) / d = (0,42*25*10-3 * 100) / 1 = 1,05 % C= glükoosisisaldus uuritavas lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule (mg/ml) L= lahjendustegur (antud katses minul L=25) d= mahla tihedus (võib lugeda võrdseks 1-ga) Järeldus Kuna kaliibrimissirge osutuski sirgeks, nagu ideaalis vaja oli, siis loen katse õnnestunuks. Tean, et katse tegemisel tulid ette mõned ebatäpsused koguste mõõtmisel ja paralleelkatsete optilise tiheduse väärtus kõikus samuti, kuna jätsin lahuse filtreerimata. Samas ei oska ma aga vea suurust hinnata, kuna ma ei leidnud Internetist sidrunimahla glükoosisisalduse kohta informatsiooni.
lahusesse vabad aminohapped ja peptiidid. Nende kontsentratsiooni iseloomustatakse kaudselt aromaatset tuuma sisaldavate aminohapete sisalduse alusel: fenüülalaniin (Phe), türosiin (Tyr) ja trüptofaan (Trp). Nad omavad neeldumismaksimume lainepikkustel 270-280 nm ja on tänu sellele spektrofotomeetriliselt kenasti dekteeritavad. Kaseiini hüdrolüüsi produktide sisaldust väljendatakse aga siiski vaid türosiini kontsentratsioonina mg/mL olemasoleva kaliibrimissirge alusel. Töö käik Valmistan juhendaja näpunäidete järgi sobiva pH-ga esperaasi lahuse, kasutades lahustiks atsetaatpuhvrit. Optimaalne kontsentratsioon esperaasi jaok on 4 mg 1 ml puhvri kohta, seega pean 5 ml lahuse jaoks kaaluma 20 mg ehk 0,0200 g esperaasi analüütilisel kaalul. Seejärel lisan väikese koguse puhverlahust ja segan klaaspulgaga, kuni ensüüm on lahustunud (kuna preparaat sisaldab ka täietainet, mis ei lahustu, siis selget lahust ei teki). Viin mahu 5 ml-ni
Kaliibrimisgraafiku koostamine ja glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Minu uuritava meelahuse kahe paralleelkatse optilised tihedused tulid 0,062 ja 0,064, seega keskmine optiline tihedus on 0,063. Kaliibrimisgraafikul vastab sellisele optilisele tihedusele kontsentratsioon C = 0,1675 mg/ml. Glükoosisisaldus massiprotsentides (X,%) proovi kuivaines arvutatakse vastavalt valemile: C - glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses kaliibrimissirge järgi (mg/ml) V1 - uuritava lahuse üldmaht (ml) L - lahjendustegur 10-3 - tegur üleminekuks grammidele V2 - värvusreaktsiooni läbiviimiseks võetud uuritava lahuse maht (ml) G - uuritava materjali kaalutis (g) W - uuritava materjali niiskusesisaldus massiosana Minu andmed: C = 0,1675 V1 = 200 ml L=1 V2 = 1 ml G = 0,1033 W = 17,5% = 0,175 (keskmine väärtus) 3. Tulemused Glükoosisisaldus tuli antud katsega 39,3%.
Arvutan keskmise optilise tiheduse mee tõmmises: =0,088 2 Loen graafikult glükoosi kontsentratsiooni mee tõmmises: ~0,15 mg/ml. ( C∗V 1∗L∗10−3∗100 ) Glükoosi sisaldus massiprotsentides: X= V 2∗G∗(1−W ) C – glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses kaliibrimissirge järgi (mg/ml) V1 – uuritava lahuse üldmaht (ml) L – lahjendustegur 10-3 – tegur üleminekuks grammidele V2 – värvusreaktsiooni võetud uuritava lahuse maht (ml) G – uuritava materjali (mesi) kaalutis (g) W – uuritava materjali niiskusesisaldus massiosana (leitakse teatmekirjandusest) Keskmine niiskusesisaldus Eesti mees on ~17,0% (http://2013- 2016.mesindusprogramm.eu/sites/default/files/3_meekvaliteedi_aruanne_01.03.14- 31.08.14.pdf)
ABS C Sirge ei läbi lineaarselt kõiki nelja punkti katsevea tõttu. Glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine: Glükoosi kontsentratsiooni uuritavas lahuses leian kaliibrimisgraafikult vastavalt paralleelproovide keskmisele optilise tiheduse väärtusele (0,085). Valem: X= X glükoosisisaldus uuritava proovi kuivaines ? % (kaliibrimissirge järgi) mg/ml C glükoosi konts. uuritavas lahuses 0,21 mg/ml V1 uuritava lahuse üldmaht ml 200 ml L lahjendustegur 1 10-3 tegur üleminekuks grammidele 10-3 V2 värvusreaktsiooni läbiviimiseks võetud 1 ml uuritava lahuse üldmaht ml G uuritava materjali (mesi) kaalutis 0,11 g W uuritava materjali niiskusesisaldus (mees 17 % tavaliselt 17%) %
Glükoosi kontsentratsiooni kindlakstegemine Glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses leitakse kaliibrimisgraafikult vastavalt paralleelproovide keskmisele optilise tiheduse väärtusele. Proov D Korrigeeritud D 0 0,032 0 Mesi 1 0,110 0,078 Mesi 2 0,112 0,08 Keskmine Korrigeeritud D: 0,079 Glükoosi sisaldus uuritava proovi kuivaines (X, %) arvutatakse vastavalt valemile: C glükoosi konts. mee lahuses (kaliibrimissirge järgi), mg/ml 0,168 V1 mee lahuse üldmaht, ml 251 L lahjendustegur 1 10-3 tegur üleminekuks grammidele V2 värvusreaktsiooni läbiviimiseks võetud uuritava lahuse maht, ml 4 G mee kaalutis, g 0,15
alusel. Glükoosi kontsentratsiooni sidrunimahlas leian kaliibrimisgraafiku abil paralleelproovide keskmise optilise tiheduse väärtuse järgi. Glükoosi kontsentratsioon lahjendatud lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule optilise tiheduse 0,365 ABS juures: Glükoosisisaldus massiprotsentides naturaalse mahla suhtes arvutatakse vastavalt valemile: Kus: glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses kaliibrimissirge järgi, . mahla lahjendustegur mahla tihedus, Katseandmed: 1 Järeldused: Antud katses määrasin glükoosisisaldust värskest sidrunist pressitud sidrunimahlas. Katse tulemusena sain, et antud katses kasutatud sidrun sisaldas 0,9 % glükoosi. Toidu koostise andmebaasi andmetel sisaldab 100 g sidrunimahla 0,5 g glükoosi ehk 0,5 %.2 Antud katse võib lugeda üsna õnnestunuks. Minu tulemus siiski erineb veidi kirjanduse andmetest
Arvutan siinkohal ära ka uuritava proovi keskmise optilise tiheduse = 0,0234+0,0229 2 = 0,02315 Loen graafiku pealt glükoosi umbkaudse kontsentratsiooni C ≈ 0,146 mg/ml Siit saan arvutada glükoosisisalduse uuritavas lahuses massiprotsentides. 100 100 X = C × L × 10-3 × d = 0,146 × 100 × 10-3 × 1 = 1,46 % C – glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses kaliibrimissirge järgi (mg/ml) L – lahjendustegur 10-3 – tegur üleminekuks grammidele d – mahla tihedus (g/cm3) Järeldus Kaliibrimisgraafik peaks olema antud töös lineaarne, mis minu katseandmete järgi selline ei tulnud. Uurisin paarilt kursusekaaslastelt nende katsetulemusi ja võrdlesin neid enda omaga ning leidsin, et glükoosilahuste lahjenduste optilised tihedused erinesid oluliselt minu omadest. Teen väikese tabeli, võrdlemaks enda optilisi tihedusi kursusekaaslaste omadega.
Fikseeritakse reaktsiooni algusaeg. Katseklaase hoitakse toatemperatuuri 20 minutit. Pärast ootamist mõõdetakse lainepikkusel 410 nm lahuste optilise tiheduse väärtused. Katse andmed λ = 410 nm 1) A = 0,055 2) A = 0,094 3) A = 0,093 4) A = 0,198 5) A = 0,127 6) A = 0,088 Paralleelproovide 2 ja 3 keskmine A = (0,094 + 0,093) / 2 = 0,0935 Kaliibrimisgraafik Kasutan graafiku tegemisel mõõdetud suurusi. Sellega seoses muutus kaliibrimissirge võrrand ning järgnevad arvutused saavad muudetud. 0.25 0.2 f(x) = 0.58x + 0.05 0.15 Absoptsioon λ=410 nm 0.1 0.05 0 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
ml 2 (t = 600 s) 10,1 ml 10,1 1,8 0,025 = 7,30 mg/ml = 8,275 ml 3 (t = 1200 s) 25,9 ml 25,9 10,1 0,05 = 13,89 mg/ml = 15,75 ml Kuna tilga mahu vale suuruse tõttu muutuvad kõik tiitrimismahud, koostan varem vaadatud tulemuste põhjal kaliibrimissirge, millelt saan vaadata õiged kontsentratsioonid. Aktiivsuse arvutamine Invertaasi aktiivsus arvutatakse järgmise valemi järgi: (C - C1 ) V1 V2 103 A= 2 T 180 V3 V4 G C1 taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis (1,55 mg/ml) C2 taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis (7,1 mg/ml või 13,5 mg/ml) V1 reaktsioonisegu üldmaht (25 + 1 = 26 ml) V2 ensüümi töölahuse üldmaht (5 ml) 103 tegur üleminekuks mikrogrammidele
UV-piirkonnas asuvad lainepikkustel 270-280 nm, mistõttu on nad spektrofotomeetriliselt hõlpsasti detekteeritavad. Reaktsionisegu proovides mõõdetakse kindla lainepikkusega valguskiirguse neelduvust ehk optilist tihedust (D)/absorptsiooni (A). Kaseiini hüdrolüüsi produktide sisaldus väljendatakse türosiini kontsentratsioonina mg/ml või mikromooli/ml (1 mikromool = 181 mikrogrammmi = 0,181 mg), kuigi lahuses võib olla ka teisi aromaatse tuumaga aminohappeid. Antud kaliibrimissirge abil leitakse A väärtuste järgi türosiini kontsentratsioon kindlatel aegadel reaktsioonisegust võetud proovides. Töö käik Töölahuse valmistamine: Valmistada uuritavast proteaasi preparaadist ensüümile sobiva pH-ga puhvris lahus, milles ensüümi kontsentratsioon on vahemikus 1-5 mg/ml. Arvutada välja ensüümipreparaadi kaalutise suurus. Vajalik kogus ensüümpreparaati viia kadudeta lahuse valmistamiseks
UV-piirkonnas asuvad lainepikkustel 270-280 nm, mistõttu on nad spektrofotomeetriliselt hõlpsasti detekteeritavad. Reaktsionisegu proovides mõõdetakse kindla lainepikkusega valguskiirguse neelduvust ehk optilist tihedust (D)/absorptsiooni (A). Kaseiini hüdrolüüsi produktide sisaldus väljendatakse türosiini kontsentratsioonina mg/ml või mikromooli/ml (1 mikromool = 181 mikrogrammmi = 0,181 mg), kuigi lahuses võib olla ka teisi aromaatse tuumaga aminohappeid. Antud kaliibrimissirge abil leitakse A väärtuste järgi türosiini kontsentratsioon kindlatel aegadel reaktsioonisegust võetud proovides. Töö käik Töölahuse valmistamine: Valmistada uuritavast proteaasi preparaadist ensüümile sobiva pH-ga puhvris lahus, milles ensüümi kontsentratsioon on vahemikus 1-5 mg/ml. Arvutada välja ensüümipreparaadi kaalutise suurus. Vajalik kogus ensüümpreparaati viia kadudeta lahuse valmistamiseks
Atundm / Ast = ctundm / cst, siis saab aine kontsentratsiooni uuritavas lahuses arvutada sõltuvusest ctundm = (Atundm / Ast ) · cst Täpsemate tulemuste saamiseks ei piirduta sageli ühe standardi absorptsiooni mtmisega, vaid valmistatakse tuntud kontsentratsioonidega standardlahuste seeria (34 lahust) ja mõõdetakse nende absorptsiooni väärtused. Mõõtmistulemuste alusel ehitatakse kaliibrimissirge A = f(cst), mis vimaldab ühtlasi kontrollida, kas Beer'i seadus on uuritava süsteemi jaoks rakendatav (kas A ja c vahel valitseb lineaarne sõltuvus). Kui sõltuvus on lineaarne, siis võimaldab kaliibrimissirge uuritava lahuse absorbtsiooni väärtuse Atundm järgi teada saada sellele vastava aine kontsentratsiooni ctundm (joonisel näidatud punaste nooltega). 44 NB
mg/ml. Mitu massi% glükoosi sisaldub selles mahlas? Eeldagem, et mahla tihedus d =1,0 g/cm3? glükoosisisaldus massiprotsentides (X,%) naturaalse mahla suhtes : X = C L 10-3 d 100 , kus C glükoosisisaldus uuritavas lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule (mg /ml), L mahla lahjendustegur d mahla tihedus (g /cm3). ------- X = C V1 L 10-3 100/ V2 G (1 W) , kus C glükoosi kontsentratsioon uuritavas lahuses kaliibrimissirge järgi (mg /ml), V1 uuritava lahuse üldmaht (ml) L lahjendustegur, 10-3 tegur üleminekuks grammidele, V2 värvusreaktsiooni läbiviimiseks võetud uuritava lahuse maht (ml), G uuritava materjali (mesi vm) kaalutis (g), W uuritava materjali niiskusesisaldus massiosana (leitakse teatmekirjandusest). 30
annaabi.ee 
