Karotenoidide ja klorofülli ekstraheerimine ja eristamine neeldumisspektri järgi. (0)

28.02.2013 M.P.
Füüsikalise ja kolloidkeemia laboriprotokoll
Töö number 2. Karotenoidide ja klorofülli ekstraheerimine ja eristamine neeldumisspektri järgi.
Töö eesmärk: Määrata karotenoidide ja klorofülli neeldumisspektrid.
Töövahendid: Portselankauss, uhmrinui, pipetid, filterpaberid, mensuurid, spektrofotomeeter, küvetid, vetikapulber (Spirulina tabletid), heksaan , atsetoon.
Töö käik: Väikesesse tilaga protselankaussi kaalutakse 20 mg vetikapulbrit. Pipetiga lisatakse 4 ml heksaani ja hõõrutakse uhmrinuiaga 1 minuti jooksul. Seejärel lastakse 2 minutit settida ning filtritakse läbi tihedast filterpaberist kurdfiltri väikesesse mensuuri . Sama tegevust korratakse veel 2 korda à 4 ml helksaaniga. Filtrit pestakse 1-2 ml heksaaniga, et saada 10 ml filtraati (Lahus 1). Seejärel lisatakse samasse portselankaussi 4 ml atsetooni , hõõrutakse uhmrinuiaga 1 minuti jooksul. Lastakse settida ja filtritakse läbi sama paberfiltri teise väikesesse mensuuri. Sama korratakse veel 2 korda à 4 ml atsetooniga ja lõpuks veel 2-3 ml atsetooniga, et saada ca 10 ml filtraati (Lahus 2). Spektrofotomeetril võetakse lainepikkus vahemikus 350-750 nm algul nulljoon heksaaniga ja seejärel Lahus 1 spekter heksaani suhtes. Sama korratakse atsetooniga- nulljoon atsetooniga ja Lahus 2 spekter atsetooni suhtes.
Katse andmed:
Portselankausi kaal 35,843(2) grammi
Vetikapulbri kaal 0,020(5) grammi = 20,5 milligrammi
Filtraadi kogus heksaaniga 9,5 ml
Filtraadi kogus atsetooniga 10,5 ml
Järeldused: Mõlema lahuse puhul nullpunkt suhteliselt kõrgel, sest lahused olid hägused. Lahus 1 spektrilt on näha, et β- karoteeni lainepikkuse maksimum (kõrgeim piik ) on 447 nm. Antud võrdlusmaterjalist nähtub, et β-karoteen absorbeerib valgust lainepikkusel 445 nm. Samuti langeb katsetulemustes nähtav piik 474,50 nm juures küllaltki täpselt kokku võrdlusmaterjalis oleva β- karoteeni (475 nm) ja luteeni (473 nm) lainepikkustega. Kattuv piik on iseloomulik karotenoididele. Sellest järeldub, et kastse käigus saadud tulemused on reaalsed ning katse õnnestus. Lahus 1 spekrtilt on näha ühte piiki ka 668, 50 nm juures, mis tähendab, et lahusesse oli jäänud klorofülle või muid lisandeid.
Lahus 2 spektrilt on selgelt näha, et see väljendab klorofüll a pigmenti. Seda võib järeldada sellest, et katsetulemustes nähtavad piigid langevad küllaltki täpselt kokku võrdlusandmetega. Katse käigus saadi klorofüll a maksimaalseks lainepikkuseks (kõrgeim piik) 430,50 nm. Võrdlusmaterjalist nähtub, et klorofüll a absorbeerib valgust lainepikkusel 662 nm, mis langeb täpselt kokku katsetulemusega 662 nm. Kuna katsetulemuste spektrilt on näha ühte piiki 475 nm juures, siis võib järeldada, et lahusesse oli jäänud karotinoide . Katsetest saadud tulemuste ja võrdlusandmetest lähtuvate tulemuste võrdlus:
Saadud tulemused:
Võrdlusandmete tulemused:
2. 615,50 nm
2. 615 nm
5. 430,5 nm
5. 430 nm
6. 413 nm
6. 410 nm
Siit võib järeldada, et katse õnnestus ja saadud spekter vastab klorofüll a spektrile.