Töö käik: 1. Geeli valmistamine: Lahutav geel (alumine Kontsentreeriv geel geel), (Ülemine geel) , 4% 10% Vesi 4,5 ml 3 ml 4x separating( stacking) 2,5 ml 1,25 ml buffer 40% 2,5 ml 0,5 ml acrylamide(AA)/bisacryl amide 37,5:1 (Bio-Rad) APS 100 µl 100 µl TEMED 10 µl 10 µl Lõpp-maht 10ml 5 ml Eeskirja järgi segame kõik komponendid kahte tuubi. APS ja TEMED on katalüsaatorid, kiirendades geeli tardumist. Geeli valmistamisel paneme APS-i mõlemasse tuubi korraga, aga TEMED-i algul ainult alumise geeli tuubisse, sest lahused polümeriseeruvad väga kiiresti.
kummikinnastega. Elektroforeesi aparaadi kokku panemine Geelikihtide valmistamine: 1. Valmistada lahutav geel (resolving gel) (10%), mis koosneb järgmistest komponentidest: Akrüülamiid 30%/ bisakrüülamiid 0,8% 3,3 ml 4x lahutava geeli puhver (1,5M Tris-Cl, pH 8,8) 2,5 ml 10% SDS 0,1 ml mQ 4,0 ml APS 70 µl TEMED 7 µl Segasime omavahel antud järjekorras kokku: vesi 4x lahutava geeli puhver SDS-i 10% lahus akrüülamiid/bisakrüülamiidi lahus Viimastena lisasime TEMED tõmbe all (ebameeldiva kalmaitselise lõhna pärast) ja seejärel APSi, mis katalüüsivad polümerisatsioonireaktsiooni. 2. Valasime alumist – lahutavat geeli – kahe klaasplaadi vahele. Geeli lahust plaadidevahelise ruumi
10% geel) , 4% Vesi 4,5 ml 3 ml 4x separating( stacking) buffer 2,5 ml 1,25 ml 40% 2,5 ml 0,5 ml acrylamide(AA)/bisacrylamid e 37,5:1 (Bio-Rad) APS 100 µl 100 µl TEMED 10 µl 10 µl Lõpp-maht 10ml 5 ml · Eeskirja järgi segame kõik komponendid kahe tuubi. · APS ja TEMED on katalüsaatorid, mis kiirendavad valgu tardumist. · Geeli valmistamisel paneme APS-i mõlemasse tuubi korraga, aga TEMED-i esialgu ainult alumise geeli tuubi (mille valmistame esimesena), sest lahused polümeriseeruvad väga kiiresti ja tarduvad.
10% geel) , 4% Vesi 4,5 ml 3 ml 4x separating( stacking) buffer 2,5 ml 1,25 ml 40% 2,5 ml 0,5 ml acrylamide(AA)/bisacrylamid e 37,5:1 (Bio-Rad) APS 100 µl 100 µl TEMED 10 µl 10 µl Lõpp-maht 10ml 5 ml · Eeskija järgi segame kõik komponendid kahe tuubisse. · APS ja TEMED on katalüsaatorid. Nad kiirendavad valgu tardumist. · Geeli valmistamisel paneme APS-i mõlemasse tuubisse korraga, aga TEMED-i esi algul ainult alumise geeli tuubisse, sest lahused polümeriseeruvad väga kiiresti.
geelist, kuid värvuvad siiski ainult valgud. Figure 1 Foreesiaparaat Praktiline osa. Geelikihtide valmistamine: 1. Valmistasime lahutava geeli (resolving gel) (10%). Selleks segasime omavahel antud järjekorras kokku: mQ – 4,0 ml 4x lahutava geeli puhver (1,5M Tris-Cl, pH 8,8) – 2,5 ml SDS-i 10% lahus – 0,1 ml Akrüülamiid 30%/ bisakrüülamiid 0,8% lahus – 3,3 ml Polümerisatsioonireaktsiooni katalüseerimiseks: TEMED – 7 µl tõbmekapi all APS – 70 µl 2. Valasime alumise – lahutava geeli – kahe klaasplaadi vahele nii, et ülemise ääreni jäi ~2 cm ruumi. Kontrollisime, et õhumulle ei tekkinud. Kandsime geelile 1 ml EtOH ning ootasime kuni geel tardus (8-15 min) jälgides polümeriseerumist külili asetatud falkonis. 3. Valmistasime kontsentreeriva geeli (stacking gel) lahus, selleks segasime omavahel antud järjekorras kokku: mQ – 3 ml
mõni allpool esitatud küsimustest. Kui loengumaterjalis sa ei leia vastust mõnele allpool esitatud küsimusele, siis proovi leida see vastus Google jne abil. 1. Milliste kartsinogeensete ja mutageensete kemikaalidega võite te geenitehnoloogia laboris kokku puutuda ning milliseid ettevaatusabinõusid tuleb sel puhul kasutada? (too näited). Formaldehüüd, Kloroform, Akrüülamiid, Tetrametüületüüleendiamiin (TEMED) * Kasuta alati kindaid. Suhtu sellisel juhul kinnastesse kui saastunutesse. * Kaalu tõmbe all. * Töötades pead tähistama ala, kus sa nendega töötad, ja selle katma lauakattega. * Kui soovid seda ainet labori piires ühest kohast teise viia, pead alati kasutama õhukindlalt suletavat konteinerit. * Kokku puutunud prahti käideldakse ohtlike jäätmetena. Akrüülamiid, teised kahe komponendiga polümeerid ja naatrium dodetsüülsulfaat (SDS) * Ära kunagi puutu neid ühendeid otseselt
3) koht jäätmete ladustamiseks enne nende kõrvaldamist juhul, kui kõrvaldamine toimub aasta jooksul pärast ladustamist Jagunevad 1)ohtlike 2)tava 3)püsijäätmete- ca 300. 222 Milliste kartsinogeensete kemikaalidega võite te geenitehnoloogia laboris kokku puutuda ning milliseid ettevaatusabinõusid tuleb sel puhul kasutada? Formaldehüüd, Kloroform, Akrüülamiid, Tetrametüületüüleendiamiin (TEMED) * Kasuta alati kindaid. Suhtu sellisel juhul kinnastesse kui saastunutesse. * Kaalu tõmbe all. * Töötades pead tähistama ala, kus sa nendega töötad, ja selle katma lauakattega. * Kui soovid seda ainet labori piires ühest kohast teise viia, pead alati kasutama õhukindlalt suletavat konteinerit. * Kokku puutunud prahti käideldakse ohtlike jäätmetena. Akrüülamiid, teised kahe komponendiga polümeerid ja naatrium dodetsüülsulfaat (SDS) * Ära kunagi puutu neid ühendeid otseselt
küsimustest. Kui loengumaterjalis sa ei leia vastust mõnele allpool esitatud küsimusele, siis proovi leida see vastus Google jne abil. 1. Milliste kartsinogeensete ja mutageensete kemikaalidega võite te geenitehnoloogia laboris kokku puutuda ning milliseid ettevaatusabinõusid tuleb sel puhul kasutada? (too näited). Formaldehüüd, Kloroform, Akrüülamiid, Tetrametüületüüleendiamiin (TEMED) * Kasuta alati kindaid. Suhtu sellisel juhul kinnastesse kui saastunutesse. * Kaalu tõmbe all. * Töötades pead tähistama ala, kus sa nendega töötad, ja selle katma lauakattega. * Kui soovid seda ainet labori piires ühest kohast teise viia, pead alati kasutama õhukindlalt suletavat konteinerit. * Kokku puutunud prahti käideldakse ohtlike jäätmetena. Akrüülamiid, teised kahe komponendiga polümeerid ja naatrium dodetsüülsulfaat (SDS) * Ära kunagi puutu neid ühendeid otseselt
kogupikkusega ja võimaldab selle suunatud liikumist elektriväljas. Vee elektrolüüsil genereeritakse anoodil H+ ja katoodil OH-. Et keskkonna pH ei muutuks, peab see olema puhverdatud. Geeli põhikomponentideks on akrüülamiidi ja bis-akrüülamiidi segu, mis polümeriseerudes määravad poori suuruse. Lisaks sisaldab geel foreesi jooksupuhvrit, ning polümeriseerumise katalüsaatoreid APS ja TEMED. Geel koosneb kahest osast: kontsentreeriv geel, milles toimub valkude kontsentreerumine üheks kitsaks bändiks ja separeeriv geel ehk lahutav geel, kus valgud lahutatakse molekulmassi järgi. ANTIKEHADE STRUKTUUR (IgG) Antikehad on seotud B-raku membraanile või sekreeteritud vormis koevedelikes. Membraan-seotud AK + AG interaktsioon käivitab antud antigeeni suhtes spetsiifilise B-raku klooni paljunemise. Sekreteeritud antikehad
elektriväljas. Vee elektrolüüsil genereeritakse anoodil H+ ja katoodil OH-. Et keskkonna pH ei muutuks, peab see olema puhverdatud. Geeli põhikomponentideks on akrüülamiidi ja bis-akrüülamiidi segu (valgugeelide puhul 36,5:1, DNA ja RNA geelide puhul 19:1 enamasti), mis polümeriseerudes määravad poori suuruse. Lisaks sisaldab geel foreesi jooksupuhvrit, ning polümeriseerumise katalüsaatoreid APS (ammooniumpersulfaat) ja TEMED (tetrametüüö-etüül-diamiin). Geel koosneb kahest osast: kontsentreeriv geel, milles toimub valkude kontsentreerumine üheks kitsaks bändiks ja separeeriv geel ehk lahutav geel, kus valgud lahutatakse molekulmassi järgi. (Need osad erinevad teineteisest akrüülamiidi protsendi, puhvri kontsentratsiooni ja pH poolest.)
annaabi.ee 
