Monoklonaalne antikeha - üheainsa lümfotsüüdi toodetud Valmistamine: Loomale süstitakse puhast antigeeni, antigeeni tootev loom peab erinema võimalikult palju antikeha tootvast loomast. Loom hakkab tootma polüklonaalseid antikehi ning monoklonaalne antikeha saadakse, kui katselooma põrnast võetakse üks lümfotsüüt ja seda paljundatakse. Koduse rasedusetesti tööpõhimõte Rasedate uriinis sisaldub hCG hormoon, ning analüüs baseerub sandwich tüüpi analüüsil, (seotud antikehale seondub antigeen, mis omakorda seob ensüümiga seotud antikeha, tuleb substraat ning tekib värvusreaktsioon. Uriin hCG hormooniga liitub sidumata tracer Ab1 (värvainega märgitud), kompleks liigub edasi seotud Ab2-te, kus tekib sandwich kompleks, riba värvub. Reageerimata Ab1 liigub kolmandale (kontrollribale) ja reageerib Ab3-ga, käivitades värvusreaktsiooni. Kui toimub vaid viimane, ei ole rase. Mehel kas sisaldub seda hormooni veres või mõni muu hormoon, mis võib antikehaga seonduda
võõrrakk hävitatakse. Antigeenid on kui molekulaarne allkiri, mille abil omi rakke võõrastest eristatakse. Väga efektiivne autoimmuunsete haiguste ravis nagu nt reumatoid-artriit. NSAID- id, kortikosteroidid võitlevad vaid tagajärgedega, mitte põhjustajate ning kõrvaltoimetega. Probleem on luua antikehi inimrakkudele olukorras, kus inimorganismis nad ei teki. Need genereeritakse mõne looma organismis ja eraldatakse, ravim seotakse antikehale ning antikeha kasutatakse ravimi transpordiks sihtmärkrakuni või manustatakse infusioonina. 4 Esimesena: lümfotsüütide antigeeni vastu loodud antikeha. Seostub lümfotsüütidega, mis olid muutunud kasvajarakkudeks ning mobiliseeris organismi immuunsüsteemi neid hävitama. Ensüümkatalüüsi olemus Aktsivatsioonienergia vähenemise saavutab katalüsaator siirdeoleku
antigeeni Neutraliseerimine antikeha seondumisel viiruste, bakterite ja toksiinide külge Fab osa kaudu takistatakse nende seondumist oma retseptoritega ja kahjustava toime avaldamist. (IgG, IgM, IgA) Opsoniseerimine ja selle kaudu fagotsütoosi võimendamine makrofaagide ja neutrofiilide poolt. Antikehad nn märgistavad antigeene, rakke, kudesid seondudes neile. Fagotsüütidel on antikeha (IgG) spetsiigilised Fc retseptorid, millega nad antikehale seonduvad. Järgnevalt initsieeritakse signaalülekanne, ja märklaud antigeeni, raku, koe fagotsütoos. (IgM, IgG, IgA) Komplemendi aktivatsioon: Peamiselt IgM ja kordi kehvemini IgG aktiveerivad komplementi. Antikeha, mis on seondunud oma antigeenile aktiveerib komplementi klassikalisel teel: komplemendi esimene komponent C1q aktiveeritakse, kui läheduses on piisavalt palju Ab Fc piirkondi ja seda on IgM puhul, mis on pentameer. (IgM, IgG)
On viite tüüpi raskeid ahelaid , , , ja , mis määravad klassi. Antikehad on jaotatud viide klassi, IgM, IgG ja IgA ja IgD. Nende rasked ahelad erinevad nii kuju kui ka kompositsiooni poolest. Minoorsed erinevused ja H ahelas määravad AK alamklassi. Igal raskel ahelal on kaks regiooni: · Variaabel regioon - aminohappeline järjestus, mis antikeha struktuuri tipus, erineb erinevatel antikehadel, kuskil 110-130 aminohapet pikk ja annab antikehale antigeeniga seondumise spetsiifilisuse · Kosntantne regioon - identne kõikides sama isotüübi antikehades, aga erineb erinevate isotüüpide antikehades. Konstantne regioon determineerib mehhanismi, mis on vajalik antigeeni hävitamiseks. On kahte tüüpi kergeid ahelaid lamda ja kappa. Ka kergel ahelal on konstantne ja variaabel domään. Keskmine kerge ahela pikkus on 211- 217 aminohapet. Iga antikeha sisaldab kahte kerget ahelat mis on alati identsed, ainult
Neil peavad olema ühesugused MHC molekulid, need saadakse puhaste katseloomade liinide kasutamisel. Selleks, et B-lümfotsüüte oleks piisavalt, immuniseeritakse katseloomi. B-lümfotsüüte mõjutatakse mitmete antigeenidega ja siis tekib plasma rakk. Mikrotiiterplaadile külvatakse üks rakk (ideaalis) ning siis sünteesib ja sekreteerib ta lahusesse antikehi. Kõige rohkem sünteesitakse beeta-gonadotropiini vastast antikeha, seda kasutatakse raseduse tuvastamisel. Antikehale seontakse külge paramagnetilise osakese abil mingi toksiini ahel. See süstitakse organismi, anikeha liigub kindla märklauani, mis asub näiteks vähkkasvajas. Seejärel kui antikeha on seodnunud, rakendatakse tugevat magnetvälja ning seejärel see rakk sureb. Paramagnetiline osake-magnetilised omadused on tal ainult siis, kui on magnetväli. Hästi väikesed. 5. loeng KOMPLEMENT Charles Bordet –avastaja ,Nobeli preemia 1919. Täheldati, et bakterite ja rakkude lüüsiks on
seostuda spetsiifilisele antigeenile, kuid nende põhimõtteline struktuur on sama ning seetõttu nimetatakse neid kõiki koos immunoglobuliinideks. Antigeenid - molekulid, mis kutsuvad esile antikehade teket ja seostuvad nendega. Mitte kõik antigeenid ei kutsu iseenesest esile antikehade teket, mistõttu ainult neid antigeene nimetatakse immunogeenideks, mis on võimelised ise antikehade teket esile kutsuma. Antigeenne determinant - see osa antigeeni molekulist, mis seostub konkreetsele antikehale; seda piirkonda kutsutakse ka epitoobiks. Hapteenid on madalmolekulaarsed ained, millel küll on epitoop, kuid mis ei kutsu esile immuunvastust. Kui nad on aga seotud kõrgmolekulaarsele kandjale, siis nad kutsuvad esile antikeha tekke. Tolerants - võime mitte vastata antigeeni toimele. Organismil on tolerants enda antigeenide suhtes. Selle puudumisel võib immuunsüsteem hävitada organismi enda kudesid (autoimmuunhaigused). Immuunsüsteemi rakulised komponendid. Lümfotsüüdid:
määravad klassi. Struktuuri. Antikehad on jaotatud viide klassi, IgM, IgG ja IgA ja IgD. Need rasked ahelad erinevad nii kuju kui ka kompositsiooni poolest. Minoorsed erinevused ja H ahelas (subisotypes) määravad AK alamklassi (subclass). Igal raskel ahelal on kaks regiooni, aminohappeline järjestus, mis antkeha struktuuri tipus, erineb erinevatel antikehadel ja kannab nimetust variaabel regioon, kuskil 110-130 aminohapet pikk ja annab antikehale antigeeniga seondumise spetsiifilisuse. Variaabel regioon erineb erinevate B rakkude poolt produtseeritud antikehade vahel, aga sama raku poolt produtseeritud antikehades on samasugune. Konstante regioon on identne kõikides sama isotüübi antikehades, aga erineb erinevate isotüüpide antikehades. . Konstantne regioon determineerib mehhanismi, mis on vajalik antigeeni hävitamiseks. On kahte tüüpi kergeid ahelaid lamda ja kappa. Ka kergel ahelal on konstantne ja variaabel domään
fluoressentsi, mida need eritavad, kui nad läbivad laseri kiirt. Sellega saab sorteerida rakke välja kindlast segu tüübist. FACS - Fluorescence activated cell sorting= rakkude sorteerimine; Seade, mis põhineb läbivoolu tsütomeetrial ja suudab leida ühe raku tuhandete teiste seast. Näiteks kui antikeha spetsiifilisele kindlale rakupinna molekulile ühendatakse fluorestsents värv, siis iga rakk, mis seda molekuli kannab, seondub antikehale ja eraldatakse teistest rakkudest, kui see fluorestseerub. Peale sorteerimist saab eraldatud rakku kasvatada kultuuris. FACS-i kasutatakse tavaliselt, et puhastada erinevat tüüpi valgeid vererakke, millest igaüks kannab oma pinnal üht või enamat eristuvad valku ja seetõttu seob monoklonaalseid antikehasid, mis on sellele spetsiifiliselt. Ainult T rakud immuunnsüsteemis omavad nii CD3 kui ka Thyl2 valke. Nende olemasolu muudab T-rakud teistest vererakkudest või
alusele fikseeritud ja seda ei saa mehhaaniliselt (loputamisega) eemaldada. 78 Kompleksi olemasolu määratakse kindlaks teise spetsiifilise antikehaga, mis on märgistatud • kas isotoobiga – radioimmunoloogiline meetod (RIA) või • ensüümiga – ensüümimmunoloogiline meetod (EIA). Fikseeritakse Ag-AK kompleks spetsiifilise antikehaga ja seejärel lisatakse eelmisele antikehale spetsiifiline antikeha, mis on vastavalt märgistatud. Kompleksis fikseerunud radioaktiivsus määratakse loendajates, ensümaatiline aktiivsus ensüüm-substraadile omases värvusreaktsioonis (spektrofotomeetriga). Lateksaglutinatsioon. On vähem tundlikum kui RIA ja EIA. Väikestele latekspartiklitele on kantud viirusspetsiifilised antikehad, antigeeni lisamisel tekivad nähtavad aglutinaadid. Saab määrata rota- ja adenoviirusi roojas.
konstentratsiooni ja antigeen-antikeha-antikeha seostumine on võrdelises seoses. Konkurentsiprintsiip: tahkele kandjale on seostatud antikeha, millega seondumise pärast konkureerivad omavahel analüüt ja analüüdiga identne, kuid märgistusega molekul (tracer). Antud printsiibi puhul on teada tahkele faasile seotud antikeha kontsentratsioon ja traceri konstentratsioon. Kuna traceri ja analüüdi afiinsus antikehale on sama, siis sõltub seondumine konstentratsioonide suhtest. Signaali tugevuse (sõltub traceri seostumisest antikehaga) ja analüüdi kontsentratsiooni vahel valitseb pöördvõrdeline seos. Meditsiinis kasutatakse immuunmeetodeid nakkushaiguste, autoimmuunhaiguste, atoopilise allergia diagnostikas. Väga mitmeid biomolekule määratakse antigeen-antikeha reaktsioonil põhinevate meetoditega. Samuti kasutatakse immuunmeetodeid mitmete patoloogiate kindlakstegemisel ja diagnostikas.
annaabi.ee 
