Õhumikroobide määramine koridoris Töö käik: Võeti Petri tass. Laminaarboksis steriliseeriti söötmekolbisuue ning siis valati Petri tassi põhjale kasvusöödet nii, et põhi oleks ühtlaselt kaetud. Siis hajutati ringikujuliste liigutustega sööde Petri tassis ühtlaselt laiali. Söötmel lasti paar minutit tarduda. Võeti välisõhuproov koridorist. Petri tassilt võeti kaas pealt ja lasti seista 5 minutit, siis pandi Petri tassile uuesti kaas peale. Petri tass paigutati termostaati ehk inkubaatorisse. Petri tassil lasti seal seista kaks nädalat. 2 nädala pärast loeti Petri tassilt kokku 11 mikroobipesa. 5 minuti jooksul sadeneb 100 cm 2 suursele söötme pinnale ligikaudu samapalju mikroobe, kui neid on 10 l õhus. Leida 1 m3 õhus olevate mikroobide arv, kui Petri tassi diameeter on 10 cm. ARVUTUSED:
Õhumikroobide määramine Töö käik 1. Võeti Petri tass. 2. Laminaarboksis steriliseeriti söötmekolbisuue ning siis valati Petri tassi põhjale kasvusöödet nii, et põhi oleks ühtlaselt kaetud. 3. Siis hajutati ringikujuliste liigutustega sööde Petri tassis ühtlaselt laiali. 4. Söötmel lasti paar minutit tarduda. 5. Võeti välisõhuproov koridorist. 6. Petri tassilt võeti kaas pealt ja lasti seista 5 minutit. 7. Siis pandi Petri tassile uuesti kaas peale. 8. Petri tass paigutati termostaati ehk inkubaatorisse (30°C). 9. Petri tassil lasti seal seista kaks nädalat. 10. 2 nädala pärast loeti Petri tassilt kokku 11 mikroobipesa. 11. Katses on selgeks tehtud õhumikroobide arvutamise seos. 5 minuti jooksul sadeneb 100 cm2 söötme pinnale ligikaudu samapalju mikroobe, kui neid on 10 l õhus. Leida 1
LISA3 SIILIMÄNG KUULA, KUIDAS LÕÕTSUTAB (käed kõrvade juures, kuulatame) TUUL, TUUL, TUUL (puhuda tuule moodi) OKSKESI ÕÕTSUTAB:PUUL, PUUL, PUUL (sõrmed harali, õõtsutades käsi) VIHMAPIISKU RABISTABSEAL JA SIIN (koputada sõrmedega laual lähemale ja kaugemale) SOOJAS PESAS NAHISTAB (teeme kätega pesemisliigutusi) VÄIKE SIIL (ristame sõrmed püsti, mis on nagu siilil okkad.) LISA4 SIILIPOISS Liigun metsas, põllul, aias, olen usse sööma maias. Vahel koduõue astun, tassilt piima maitsen, ennast iga hirmu vastu okastega kaitsen. LISA5 KONN JA SEEN 1.Sajab vihma ladinal.(Näpud siplevad vastu põrandat) Keegi istub seene all. (Käed pea kohal nagu seenekübar) Arva, arva, kes see on? - sääl ju pisikene konn. 2.Tuul viib pilved taevast ära, (suuga teed tuule häält) kallab hiilgust, sära. Hüpleb konn ja kepsleb konn, (hüpleb) tal nii rõõmus tuju on. 3.Üleannetuses ta tõukab seeni jalaga, (tõukad jalga enda ette) ütleb: "Mis teist kasu on,
Elumuse % = elumus *100% 11. Töö rakkudega: kultuuride harvendamine (suspensioonis kasvav vs kinnituvad rakud) Suspensioonis kasvavad rakud: suspensioon tsentrifuugitakse, sööde pealt, lisada uus sööde ja jagada Substraadile kinnituvad rakud: saab jagada 2 viisil: 1)ensümaatiliselt (trüpsiin, kollagenaas või pronaas - rakud tulevad selle mõjul tassi küljest lahti) - sööde maha, +enz, oodata, +uus sööde, jagada 2)mehhaaniliselt - sööde maha, +natuke uut söödet, rakud tassilt 'maha pipeteerida'/scraperiga maha kraapida, jagada
Pipeteerisin 15 ml tuubi 5 ml söödet ja 6 cm tassile 4 ml söödet. Võtsin külmast krüoviaaliga NIH3T4 rakud ja sulatasin käes kiirelt (DMSO!) Lisasin viaali 0,5 ml sooja söödet ja tõstsin rakud 15 ml tuubi ringi. Fuugisin rakud põhja 5 min 1000 rpm toatemperatuuril (tegemis on õrna rakkudega, seega fuugimine peab olema madala kiirusega) Tõmmasin sööde vaakumpunbaga nii, et rakud jäid põhja Tassilt tuubile rakkudega lisasin 0,5 ml söödet, suspendeerisin ning panin tagasi tuubist tassile, ühtustasin rake ja panin tass CO2 inkubaatorisse, kus tingimused – temperatuur, rõhk ja CO2 % onn sarnased tingimustega organiismi sees, eh 37 °C ja CO2 5% - stabiliseerib pH. 2. Praktikum – rakkude paljundamine Selleks, et arvutada lahjendused ja veenduda et rakud ei ole surnud, on vaja hinnata nende tihedust ja paiknemist. Selleks kasutataske mikroskoobi:
toksiline. 4. Järgmisena võtta 15 ml tuubist automaatpipetiga 0,5 ml sooja söödet ja lisada viaali, tõsta rakud 15 ml tuubi ringi. Fuugida rakud põhja 5 min 1000 rpm toatemperatuuril (kuna rakud on õrnad, kiirus ei tohi olla üle 1000 rpmi). 5. Pärast fuugimist tuleb tõmmata vaakumpumbaga sööde rakkudelt, kasutades Pasteuri pipeti ning steriilset otsikut. 6. Tuubile rakkudega lisada 0,5 ml söödet (6 cm tassilt), suspendeerida ning panna tagasi tuubist tassile. Teha tassiga 8-kujulisi liigutusi, et rakud tassil ühtlaselt jaotuksid ning asetada oma tass CO2 inkubaatorisse. 90. Enamus rakuliine vajab kasvamiseks temparatuuri 37 °C ja pH-d vahemikus 7,2 – 7,4. Selliste tingimuste tagamiseks kasutatakse spetsiaalseid inkubaatorkappe, kus lisaks vajalikule temp. on ka kõrgem CO2 sisaldus (5%), mis võimaldab stabiilse pH säilitamise. 91. 92. Teine päev – rakkude paljundamine 93
rahva seas, näiteks edasiarendatuna: Nina kirsis, karvad kärsis, jalad all kui murakalehed? 7. Mis saab olla hirmsam,kui elevant portselanipoes? Vastus: siil kondoomitehases! 8. Okkapall, jalad all, jookseb vutt-vutt, vudinal? 9. Kes kannab nõelakoormat turjal? 12 10. Liigun metsas, põllul, aias,olen usse sööma maias. Vahel koduõue astun,tassilt piima maitsen, ennast iga hirmu vastu okastega kaitsen. /Erika Esop/ 11. Mis on okastraat? Siili ja vihmaussi ristand. 12. Mis vahe on siilil ja jalgrattal? Istu peale, siis tunned. 13. Mis vahe on ema- ja isasiilil? Isasiilil on üks okas rohkem. 14. Kuidas isasiil ja emasiil armastavad? Ettevaatlikult. 15. Kas võib palja tagumikuga siilile istuda? Vastusevariante on kolm: 1. jah, võib, kui siil on pöetud; 2
hakkas nende vahelist juttu tõlkima. Nende vahel tekkis nii sur tüli, et Vürst hakkas nõusid lõhkuma. Lõpetas ta selle siis, kui Ramilda tuppa jõudis ja naerunäol vürsti vaatas. Vürst vabandas ja lahkus. Vürsti kulul toodi kooli uued nõud. Need olid uued ja ilusad ja tädi valvas neid, et neid ära ei lõhutaks, eriti tassi kõrvasid. Pärast mitmendat päeva hakkas tema paranoilisus teisi häirima ja Ramilda murdis Indreku tassilt kõrva ära ja käskis Indrekul see ära peita. Kui Ramilda läks katkist tassi tädile näitama, siis kukkus see maha kildudeks. Ramilda ja tädi läksid poodi uut tassi ostma ja ennem kui nad läksid, siis käskis Ramilda Indrekul veel ühe tassi kõrv ära lõhkuda, mida Indrek ka tegigi. Selle tagajärjel tädi loobus tasside valvamisest. XIII See andis uuesti võimaluse Ramildal söögitoas rääkida. Kuid saksa keelt ei õpetanud
PCR reaktsiooniks on vaja DNA vabastada bakerirakust. See kehtib nii puhaskultuuri kui vahetult kliinilise materjali korral. Üks lihtsamaid DNA vabastamise meetodeid on bakterite termiline töötlemine. Kuumuse mõjul bakteri sein puruneb ja DNA vabaneb ümbritsevasse keskkonda. 1) Valmistada kuumutamiseks bakterite suspensioon 1,5 ml Eppendorfi katsutis. Selleks pipeteerida automaatpipetiga Eppendorfi katsutisse 10 µl steriilset destilleeritud vett. Lisada steriilse pulgaga Petri tassilt 1 koloonia, segada vorteksil kuni kaovad kõik nähtavad tükid. 2) Mikroobisuspensiooni kuumutamine DNA vabastamiseks. Asetada valmistatud bakterite suspensioon PCR masinasse, kuumutada suspensioone 950 C juures 10 min jooksul (spetsiaalne programm). II RAPD-PCR REAKTSIOONI ETAPP – VAHETU PCR REAKTSIOONI TEOSTAMINE 3) PCR segu valmistamine. PCR reaktsiooni toimumiseks on vajalikud järgmised
annaabi.ee 
