ELISA plaat 1 2 Igasse süvendisse kanname 100µl proovi. A L- L- 1:10 Taimelehest eraldame mahl spetsiaalse B L- L- 1:20 mahlapressi abil ja eppendorfi- tuubis C L- L- 1:50 lahjendame selle vajaliku D L- L- 1:10 kontsentratsioonini PBS-ga. 0 Plaadilt eemaldame mitteseostunud E L+ L+ 1:5 antigeeni ja peseme plaate 4x PBS/ Tw-ga F L+ L+ 1:10 G L+ L+ 1:50 ja 1x PBS- ga. H L+ L+ 1:10 Plaati blokeerime 1% BSA lahusega PBS/ 0 Tw-s 1.5 tundi ruumitemperatuuril, eemaldame blokeeriva lahuse ja peseme 3x PBS/Tw-ga.
E L+ L+ 1:5 F L+ L+ 1:20 G L+ L+ 1:50 H L+ L+ 1:100 · Igasse süvendisse kanname 100µl proovi. · Taimelehest eraldame mahla spetsiaalse mahlapressi abil, tsentrifuugime ja eppendorftuubis lahjendame selle vajaliku kontsentratsioonini PBS-ga. L- terve leht, L+ nakatunud. · Kanname kõik proovid vastavatesse süvenditesse ja jätame seisma üleöö 4 kraadi juurde. · Plaadilt eemaldame mitteseostunud antigeeni ja peseme plaate 4x PBS/ Tw-ga ja 1x PBS- ga shakeril. · Plaadi blokeerime 1% BSA lahusega PBS/ Tw-s 1h toatemperatuuril, eemaldame blokeeriva lahuse ja peseme 3x PBS/Tw-ga. · Plaadile kanname ensüümiga konjugeeritud antikeha, lahjendus 1:500. Inkubeerime 1.5 tundi 37 kraadi juures. Konjugaadi eemaldame ja peseme 4x PBS/Tw-ga ja 1x PBS-ga. · Valmistame peroksüdaasi substraadi lahuse ja ensüümreaktsiooni katalüsaatori kanname süvenditesse
proovid ilma viiruseta. · Lehe proovi viirusega saame õppejõust. · Edasi valmistame mugulamatrejalist mugula proovi viirusega. Selleks võtame umbes 1g mugulat ja pressitakse välja mugula mahl, lahjendame teda PBS-ga vajaliku kontsentratsioonini. · Mugula proovi viiruseta saame õppejõust. · Kanname kõik proovid vastavasse süvenditesse. Süvendisse G kanname PBS ja viiruse (nr.7). · Plaadilt eemaldame mitteseostunud antigeen ja peseme plaate 4x PBS/ Tw-ga ja 1x PBS- ga. · Plaat blokeerime 1% BSA lahusega PBS/ Tw-s 1.5 tundi ruumitemperatuuril, eemaldame blokeeriv lahus ja peseme 3x PBS/Tw-ga. · Plaadile kanname ensüümiga konjugeeritud antikeha, lahjendus 1:500 (PBS+ 4µl lahust nr.1). Inkubeerime 1.5 tundi 37 kraadi juures. Konjugaat eemaldame ja peseme 4x PBS/Tw-ga ja 1x PBS-ga.
- reaktsiooni tiitrina st. suurimat uuritava materjali lahjendust, mis põhjustab reaktsiooni. 37. Mis on aglutinatsiooni reaktsioon?- AK kandvad osakesed moodustavad Ig reageerides komplekse e. aglutinaate, mis pole vesilahustuvad ja sadenevad raskusjõu mõjul, tekib silmale nähtav teralisus 38. Miks on fluorestsentsmikroskoopia preparaadi ja ELISA testide valmistamise puhul loputamine nii tähtis?- Et välja uhada mitteseostunud AK 39. Mis on seotud antikeha külge immunofluorestsents mikroskoopia puhul?-Fluorestseerivad ained e. markeeritud ained 40. Mida kasutatakse antigeeni või antikeha kandjana lateksagglutinatsiooni puhul?- bentoniiti, kolloidi, aktiivsütt, bakterirakke, lateksit. 41. Kirjelda ELISA meetodit.-AG on seostunud mikrotiiter plaadilelisatakse erinevad AK, et teada saada millise AG on täpselt tegemistKinnitumata AK eemaldatakse loputamisegalisatakse
Northern analysis: isoleeritakse vigastamata mRNA; lahutatakse RNA agarosgeelil suuruse järgi, kantakse üle membraani peale, kus RNA fikseerub, toimub hübridisatsioon huvipakkuva lõigu puhul komplimentaarsuse printsiibil; mitteseostunud molekulid eemaldatakse. Detekteeritakse ja analüüsitakse (autoradiogramm). Nõuab suurt RNA kogust, nõuab vigastamat RNA, madal tundlikkus, aga ainuke meetod, mis annab info nii suuruse kui ka koguse kohta (Kasulik: transkripti splaissingu variantide võrdlemisel eri kudedes).
pöördvõrdeline log10–ga tema massist (suurusest). 44. Nukleiinhapete hüdrediseerimine Kindla NA järjestuse tuvastamine NA molekulide segust kasutates komplementaarsusel põhinevat üksikahelate paardumist. - Geelis lahutatud DNA/RNA kantakse üle (nailon)membraanile, nii et nad oleksid üksikahelad - Meid huvitav järjestus märgistatakse radioaktiivselt vm meetodil (proov) - Lastakse üksikahelatel omavahel paarduda. - Mitteseostunud proov pestakse maha ja NA asukoht tuvastatakse märgise järgi. 45. Kromotograafia valkude puhastamisel 3 etappi: 1. Valgu lahusesse viimine ja esmane fraktsioneerimine 2. Kromatograafiline puhastamine 3. Lõplik „poleerimine“ Praktikas kantakse ainete segu läbi sorbendi (liikumatu faas) sobiva vedeliku või gaasi vooluga (liikuv faas). Segu komponentide spetsiifilise sorptsiooni ja desorptsiooni
ahelate sünteesimine 72o 1 min; seda kokku 30-40 korda). 43.Elektroforees. 44.Nukleiinhapete hübridiseerimine. Kindla NA järjestuse tuvastamine NA molekulide segust kasutades komplementaarsusel põhinevat üksikahelate paardumist. 1) geelis lahutatud DNA/RNA kantakse üle (nailon)membraanile, nii et nad oleksid üksikahelad. 2) meid huvitav järjestus märgistatakse radioaktiivselt või muul meetodil. 3) lastakse üksikahelatel omavahel paarduda. 4)mitteseostunud proov pestakse maha ja NA asukoht tuvastatakse märgiste järgi. Kromatograafia. Segu lahustatakse vedelikus - nn ‘’mobiilne faas’’, mis voolutatakse (flow) läbi nn ‘’statsionaarse faasi’’. Segu (mixture) eri koostisosad constituents liiguvad erinevad kiirusega ja nad lahutatakse üksteisest. Eraldus põhineb liikuva faasi erinevate koostisosade erinevas ‘’külgejäämises’’ statsionaarsele faasile. Preparatiivne -uuritava valgu
DNA liigub suunas - + (katoodilt anoodile). 45. Nukleiinhapete hübridiseerimine Kindla NA järjestuse tuvastamine NA molekulide segust kasutates komplementaarsusel põhinevat üksikahelate paardumist. - Geelis lahutatud DNA/RNA kantakse üle (nailon)membraanile, nii et nad oleksid üksikahelad - Meid huvitav järjestus märgistatakse radioaktiivselt vm meetodil (proov) - Lastakse üksikahelatel omavahel paarduda. - Mitteseostunud proov pestakse maha ja NA asukoht tuvastatakse märgise järgi. 46. Kromatograafia valkude puhastamisel Tamme loeng 4, slaid 61 3 etappi: 1. Valgu lahusesse viimine ja esmane fraktsioneerimine 2. Kromatograafiline puhastamine 3. Lõplik „poleerimine“ Kromatograafia on üldmõiste mitmesuguste laboratoorsete füüsikalis-keemiliste meetodite kohta, mida kasutatakse ainete segu komponentide lahutamiseks paljukordse sorptsiooni( gaasi, vedeliku või mõne
DNA liigub suunas - + (katoodilt anoodile). 45. Nukleiinhapete hübridiseerimine Kindla NA järjestuse tuvastamine NA molekulide segust kasutates komplementaarsusel põhinevat üksikahelate paardumist. - Geelis lahutatud DNA/RNA kantakse üle (nailon)membraanile, nii et nad oleksid üksikahelad - Meid huvitav järjestus märgistatakse radioaktiivselt vm meetodil (proov) - Lastakse üksikahelatel omavahel paarduda. - Mitteseostunud proov pestakse maha ja NA asukoht tuvastatakse märgise järgi. 46. Kromatograafia valkude puhastamisel Tamme loeng 4, slaid 61 3 etappi: 1. Valgu lahusesse viimine ja esmane fraktsioneerimine 2. Kromatograafiline puhastamine 3. Lõplik ,,poleerimine" Kromatograafia on üldmõiste mitmesuguste laboratoorsete füüsikalis-keemiliste meetodite kohta, mida kasutatakse ainete segu komponentide lahutamiseks paljukordse sorptsiooni( gaasi, vedeliku või mõne
annaabi.ee 
