eelnevalt valmistati. Igasse klaasi pipeteeriti 3 ml tööreaktiivi ja loksutati kohe, et saavutada ühtlast kontsentratsiooni. Fikseeriti aeg ja katseklaase hoiti 20 min toatemperatuuril. Eelpool kirjeldatud reaktsioonide tulemusel värvuvad glükoosi sisaldavad lahused kollaseks. Spektrofotomeetril mõõdetakse lainepikkusel 410 nm lahuste ptilise tiheduse väärtused, kasutades võrdluslahusena destilleeritud vett. Tulemused Klaliibrimisgraafiku koostamine [Glyc] mg/ml D Korrigeeritud D 0 0,032 0 0,25 0,150 0,118 0,125 0,075 0,043 0,062 0,057 0,025 0,12 0,11 0,1 0,09 0,08 korrigeeritud D 0,07 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02
Reaktsioonil vabanenud triloon B kogus määrati 0,02 M CuSO4 lahusega tiitrimisel. Enne tiitrimisele asumist lisati igasse kolbi indikaatorin umbes 7 tilka mureksiidi lahust, mille toimel kolvi sisu värvu violetseks. Tiitritakse seni, kuni violetne värvu asendub samblarohelisega. Tiitrimisele kulunud 0,02 M CuSO4 lahuse hulga järgi leiti kaliibrimiskõveralt taandavate suhkrute sisaldus proovis. TULEMUSED PROOV (#) 0,02 M CuSO4 (ml) Glyc (mg/ml) 0 1,4 1,3 1 9,7 8,6 2 18,1 16 16 15 14 13 12 Glükoos (mg/ml) 11 10 9 8 7 6 5
5 0,1628 0,1211 6 0,1033 0,0616 * Need optilise tiheduse väärtused on saadud lahuse veel 2x lahjendamisel (kokku 500x lahjendus) 2 0,25 0,2 0,15 D 0,1 0,05 0 0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 [Glyc] mg/ml Katseklaaside 2 ja 3 keskmine optiline tihedus Glükoosisisaldus massiprotsentides (X, %) naturaalse mahla suhtes leitakse valemiga: C glükoosisisaldus uuritavas lahuses vastavalt kaliibrimisgraafikule ~0,195 mg/ml L mahla lahjendustegur 500x d mahla tihedus (g/cm3) 1 g/cm3 Kirjanduse andmetel on viinamarjamahla glükoosisisaldus ~7%. Katse tulemus ei erine sellest väga palju, seega pean katset õnnestunuks.
V1-reaktsioonisegu üldmaht (ml) V2-ensüümi töölahuse üldmaht (ml) T -hüdrolüüsi ketus (s) 180-glükoosi molekullmass V3 -proovi maht taandavate suhkrute määramiseks (ml) V4-ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahusemaht (ml) g -ensüümiprepraati kaalutis (g) Töö tulemused! :D Proovi number Kuulunud CuSO4 Glyc mg/ml ml 0 (0 minutil võtnud) 2,3 2 1 (10 minutil) 12,6 11,1 2 (20 minutil) 23,3 18 Leiame invertaasi aktiivsuse(A): A=(C2-C1)* V1* V2 *103/T * 180 *V3 *V4*g A1=(11,1-2) * 26*5*103 /600 *180 * 1*1*0,015 =5323,5 µkat/ml A2=(18-2) * 26* 5*103 /1200 *180 * 1*1*0,015 =4680 µkat/ml
Reaktsioonil vabanenud triloon B kogus määran 0,02 M CuSO4 lahusega tiitrimisel. Enne tiitrimisele asumist lisan igasse kolbi indikaatorin umbes 5 tilka mureksiidi lahust, mille toimel kolvi sisu värvub violetseks. Tiitrin seni, kuni violetne värvu asendub samblarohelisega. Tiitrimisele kulunud 0,02 M CuSO4 lahuse hulga järgi leian kaliibrimiskõveralt taandavate suhkrute sisaldus proovis. Töö tulemused Proov nr. 0,02M CuSO4 (ml) Glyc (mg/ml) 0 8 ml 7,1 mg/ml 1 - - 2 19,5 ml 17,2 mg/ml *** Esimeses proovis ei ole tulemusi,sest kogu kolvi sisu oli juhuslikult välja valatud kraanikausi. Seetõttu katse tulemus põhineb 0 ja 2 proovidel. Invertaasi aktiivsus arvutatakse valemi järgi: C1 taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T võetud proovis, mg. 17,2
värvusega. Loksutasin tiitrimise käigus kolvi sisu pidevalt. Fikseerisin neid väärtusi, millised kutsusid välja esimest värvuse muutust. Panin kirja titrandi maht, mis kulus rohelise värvuse saavutamiseks. Leidsin tiitrimiseks kulunud 0,02 M CuSO4 lahuse hulga järgi kaliibrimisgraafiku taandavate suhkrute sisaldus mg-des 1 mL-s reaktsiooni võetud proovis. Tiitrimise tulemused: proov kulunud CuSO4 maht, ml Glyc mg/ml 0 2,2 2,0 1 6,7 6,0 2 12,5 11,0 Invertaasi preparaadi aktiivsus(A) kat/g arvutatakse valemi järgi: Kus: C1-taandavate suhkrute sisaldus 0-proovis, 2,0 mg/mL C2-taandavate suhkrute sisaldus ajahetkel T(10 min või 20 min pärast ensüümreaktsiooni algust) võetud proovis, 6,0 mg/mL ja 11,0 mg/mL
1; U.S. Department of Agriculture proteins (regulatory proteins). There are also 2008). In living tissue, the average water many soluble proteins (sarcoplasmic pro- 5 6 Chapter 1 Table 1.1. Composition of Mammalian Muscle complex lipid found in muscle. In this class Component % of Muscle Weight of lipids, one of the hydroxyl groups of glyc- Water 75% (65–80%) erol is esterified to a phosphate group, while Protein 18.5% (16–22%) the other constituents are fatty acids. The Lipid 3% (1–13%) fatty acids associated with phospholipids are Carbohydrate 1% (0.5–1.5%) Non-Protein Nitrogenous 1.7% (1–2%) typically unsaturated. Phospholipids in skel-
annaabi.ee 
