keskkonda) ja lõpetab reaktsiooni. Pärast hüdrolüüsireaktsiooni võetakse taandavaid suhkruid ja keedetakse segu komplekslahusega, mille tulemusena moodustub punane sade Cu2O ja ekvivalentses koguses vaba triloon. Triloon B tiitritakse 0,02M vasksulfaadi lahusega (indikaatorina mureksiidi vesilahus). Invertaasi aktiivsus määratakse mikrokatalites 1 ml ensüümilahuse kohta. Tiitrimiseks kulunud 0,02M CuSO4 lahuse hulga järgileitakse taandavate suhkrutesisaldus proovis Invertaasi aktivsuse leitakse kasutades valemi: kus: C1 taandavate suhkrute sisaldus aja hetkel T võetud proovis, mg C2 taandavate suhkrute sialduse 0 proovis, mg V1 hüdrolüüsisegu üldmaht, ml 1000 tegur üleminekuks mikrogrammidele T hüdrolüüsi kestus, s 180 glükoosi moolmass V2 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V3 uurimiseks võetud invertaais lahuse maht, ml. Töö käik. 1
lahust, mille toimel kolvi sisu värvus sinakas-violetseks. Tiitrisin seni, kuni violetne värv asendus samblarohelisega. Tiitrimisele kulunud 0,02 M CuSO4 lahuse hulga järgi leidsin kaliibrimiskõveralt taandavate suhkrute sisalduse. V(CuSO4), ml C (mg/ml) 0-proov 1,8 1,60 10 minuti-proov 6,8 6,00 20 minuti-proov 11,5 10,15 Invertaasi aktivsuse leitakse kasutades valemi: Kus: C1 taandavate suhkrute sisaldus aja hetkel T võetud proovis, mg 6,0|10,15 C2 taandavate suhkrute sialduse 0 proovis, mg 1,60 V1 hüdrolüüsisegu üldmaht, ml 25,5 ml 1000 tegur üleminekuks mikrogrammidele T hüdrolüüsi kestus, s 600 | 1200 180 glükoosi moolmass V2 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml - 1ml V3 uurimiseks võetud invertaasi lahuse maht, ml 0,5 ml
TALLINNA TEHNIKAÜLIKOOL Õppeaine YKL0063 Biokeemia PRAKTIKUM: Proteolüütilise ensüümi aktiivsuse määramine Üliõpilane: Juhendaja: Kood: Esitatud: Sooritatud: 3.2 PROTEOLÜÜTILISE ENSÜÜMI AKTIVSUSE MÄÄRAMINE Teooria Proteolüütilised ensüümid e. proteaasid on ensüümid, mis katalüüsivad peptiidsidemete hüdrolüüsi reaktsiooni valkudes ja peptiidides Proteaase leidub kõikides organismides, kuna nad osalevad väga paljude füsioloogiliste funktsioonide täitmises, alustades toiduvalkude seedimisest ja lõpetades väga kõrgreguleeritud ensüümireaktsioonide kaskaadidega
Enne tiitrimise alustamist lisatakse igasse kolbi 0,3 ml(umbes 6 tilka) mureksiidi vesilahust, mille toimel värvus kolvi sisu violetseks. Tiitritakse seni, kuni kolvi sisu muutub intensiivselt roheliseks. 8. Tiitrimisele kulunud 0,02 M CuSO4 lahuse hulga järgi leitakse kaliibrimiskõveralt taandavate suhkrute sisaldus proovis. Tulemuste analüüs Tiitrimiseks kulunud 0,02M CuSO4 lahuse hulga järgileitakse taandavate suhkrutesisaldus proovis Invertaasi aktivsuse leitakse kasutades valemi: A= ( C2 C1) × V1 × V2 × 103 / T ×180 × V3 × V4 × g kus: C2 taandavate suhkrute sisaldus aja hetkel T võetud proovis, mg/ml C1 taandavate suhkrute sialduse 0 proovis, mg(ml V1 hüdrolüüsisegu üldmaht, ml 1000 tegur üleminekuks mikrogrammidele T hüdrolüüsi kestus, s 180 glükoosi molekulmass V3 proovi maht taandavate suhkrute määramiseks, ml V4 ensüümireaktsiooni viidud invertaasi töölahuse maht, ml.
enesetunde kohta -Dokumenteeri 20.4.11 Potentsiaalne Tromboosi ei -Suurenda patsiendi kehalist 22.04.11 troboosi oht, mis on teki aktiivsust järk.järgult vastavalt Tromboosi ei tingitud füüsilise patsiendi võimetele tekinud aktivsuse langusest -Jälgi et aktiivne peroiood (voodireziimist) vahelduks puhkusega -Jälgi patsiendi hingamissagedust Mannusta verdvedeldavaid ravimeid vastavalt arsti korraldusele 20.4
ensüümi kontsentratsioon on 4,0 mg/ml? 10. Kasutasite töös 7%-list sahharoosi lahust. Milline on sellise sahharoosi lahuse molaarne kontsentratsioon (Mr = 342)? Millises suhtes (suurem/ väiksem/võrdne)on see invertaasi Km väärtusega, kui on teada, et sahharoosi hüdrolüüsil Km =26 mM? 23 3.2 PROTEOLÜÜTILISE ENSÜÜMI AKTIVSUSE MÄÄRAMINE 1. Kirjutage lõik valgu polüpeptiidahelast ja näidake, millistele sidemetele toimivad proteaasid. Vt.lk80 2. Mida mõistetakse ensüümide spetsiifilisuse all ja milliseid proteaaside spetsiifilisuse aspekte eristatakse? Proteolüütiliste ensüümide arvukad esindajad omavad erinevat toimespetsiifikat. Mõned lõhustavad eelistatult spetsiifilisi, vaid teatud aminohapetega külgnevaid peptiidsidemeid
....................................................... 74 Teooria ................................................................................................................ 74 Töö käik .............................................................................................................. 76 Kontrollküsimused ............................................................................................... 79 3.2 PROTEOLÜÜTILISE ENSÜÜMI AKTIVSUSE MÄÄRAMINE ........................... 80 Teooria ................................................................................................................ 80 Aromaatset tuuma sisaldavate aminohapete neeldumisspektrid. ....................... 82 Töö käik .............................................................................................................. 82 Kontrollküsimused ........................................................................
annaabi.ee 
