PEROKSÜSOOMID JA MITOKONDRID Carol Tamm Integreeritud loodusteadused Peroksüsoomid Nendeks on D-aminohapete oksüdaas, Peroksüsoomid on väikesed (ca 0.2-1 uraatoksüdaas ja lutsiferaas. Erinevates µm läbimõõdus), ühekordse kudedes võib peroksüsoomide membraaniga ümbritsetud organellid, ensüümkomplekt erineda, kuid kindlasti mis esinevad kõikides loomsetes sisaldavad peroksüsoomid katalaasi, rakkudes (v.a. erütrotsüüdid) ja paljudes mis lagundab tekkivat taimerakkudes. vesinikperoksiidi. Pikka aega peeti neid lüsosoomideks
Katoodluminents tekib elektronide pommitamise (katoodkiirega kiiritamine) tulemusel. 7. Kuidas jaanimardikad helendavad? - Jaanimardikad on tuntud sellepärast, et neil (emastel isenditel) on tagakeha tipus helenduselundid, mis kiirgavad mittesoojusikku rohekat valgust. Seda protsessi nimetatakse bioluminestsentsi nähtuseks. Jaanimardika rakud sisaldavad kemikaali nimega lutsiferiin ning toodavad veel ensüümi nimega lutsiferaas. Mardika tagakeha hakkabki helendama siis, kui need ained oksüdeeruvad ja reageerivad omavahel. Seejärel tekib passiivne molekul nimega oksülutsiferiin. Lutsi-feraas seejärel reageerib ATP-ga, mis leidub kõikides rakkudes, ning moodustub lutsiferiil adenülaat ja pürofosfaat. Lutsiferiin + ATP -> lutsiferiil adenülaat + pürofosfaat Selle reaktsiooni põhiselt helendavad jaanimardikad. 8. Kuidas tekib vabakiirgus ehk spontaanne kiirgus
3. Millised elemendid peavad olema eukarüootses ekspressioonivektoris? Loomarakkudele mõeldud ekspressioonivektor (plasmiid) sisaldab: 1.komponente, mis võimaldavad plasmiidi bakteris paljundada (prokarüootset replikatsiooni alguspunkti, antibiootikumi resistentsusgeeni); 2.kloneerimisala (MCS) erinevate restriktaaside lõikekohad; 3.uuritavat järjestust (valkude korral tavaliselt cDNA kujul); 4.reportergeeni (GFP, lutsiferaas, lacZ jt.) või märgise (tag; FLAG, myc, V5, GFP) järjestust. 5.eukarüootset promootorit (CMV, SV40) ja polüadenüleerimisjärjestust (SV40); 6.selektsioonimarkeri ekspressioonikassetti. Praktiline töö III Immuunotsütokeemia 1. Mille poolest on erinevad monoklonaalsed ja polüklonaalsed antikehad? Mka reageerivad vaid ühe epitoobiga antigeeni molekulis, on väga spetsiifilised 2. Mis on epitoop? Too välja kaks erinevat tüüpi epitoopide rühma ja kirjelda
makromolekule ja rakustruktuure. loomarakkudes Peroksüsoomid- ühekordse membraaniga ümbritsetud organellid, mis esinevad kõikides loomsetes rakkudes (v.a. erütrotsüüdid) ja paljudes taimerakkudes. Pikka aega peeti neid lüsosoomideks. Kuid peroksüsoomid sisaldavad ensüüme, mis erinevad lüsosomalsest ensüümkomplektist, nimelt leidub seal mitmeid oksüdatiivseid ensüüme: D-aminohapete oksüdaas, uraatoksüdaas, lutsiferaas (viimane esineb jaanimardika vastsetel e. 'jaaniussidel' ning põhjustab helendumist). Erinevates kudedes võib peroksüsoomide ensüümkomplekt erineda, kuid kindlasti sisaldavad peroksüsoomid katalaasi, mis lagundab tekkivat vesinikperoksiidi. Vakuoolid- kujutab endast membraaniga ümbritsetud põiekest, mis perioodiliselt ilmub tsütoplasmasse ja täitub vedelikuga. Tekkimise ajal haaratakse väliskeskkonnast toitaineid, mis vakuooli rändamise ajal raku sees imenduvad läbi membraani
kasutusel. Uus suund: taime ainevahetuse markergeenide suunas (phosphomannose isomerase, xylose isomerase etc) (loeng 7) Reporter geen - Paigutatakse huvi all oleva geeni lähedale Et oleks lihtne identifitseerida transformeerunud rakke Et saaks hinnata ekspressiooni Näiteks: beta glucuronidase gene (gusA gene) toodab sinist molekuli (transformeerunud rakud on sinised) Roheline fluorestseeruv valk (green fluorecent protein - gfp) rakud helendavad rohelise valguse käes Lutsiferaas (luciferase) jaanimardikast rakud helenduvad pimedas Transformatsioon - Geneetilise materjali taime viimine Biolistiline meetod (gene gun) Agrobacteriumi abil (loeng 7) Biolistika - Mehhaaniline meetod Nö. Geeni püss ja kullast kuulid Kulla osakesed kaetakse DNAga ja tulistatakse taime kudedesse DNA satuvad raku sisse ja 12 tunniga siseneb DNA tuuma ja integreerub taime genoomi. Kuld kogutakse vakuoolidesse ja saadetakse taimest välja Agrobacteriumi abil - Bakter
mis on saadud valgusreaktsioonist). See reaktsioon jätkub tsütoplasmas. Valkude importi kloroplasti vahendab transiit-peptiid. 12. Peroksüsoomid, nende ülesanne ja nende ensüümid. Peroksüsoomid on väikesed (ca 0.2-1 µm läbimõõdus), ühekordse membraaniga ümbritsetud organellid, mis esinevad kõikides loomsetes rakkudes (v.a. erütrotsüüdid) ja paljudes taimerakkudes. Peroksüsoomides esineb mitmeid oksüdatiivseid ensüüme: D- aminohapete oksüdaas, uraatoksüdaas, lutsiferaas (viimane esineb jaanimardika vastsetel e. 'jaaniussidel' ning põhjustab helendumist). Erinevates kudedes võib peroksüsoomide ensüümkomplekt erineda, kuid kindlasti sisaldavad peroksüsoomid katalaasi, mis lagundab tekkivat vesinikperoksiidi. Ensüümide import peroksüsoomi. Peroksüsoomides vajaminevad ensüümid korjatakse kokku tsütoplasmast. Äratundmissignaaliks on tripeptiid Ser- Lys-Leu. Peroksüsoomide funktsioneerimise häiretest tingitud haigus (Zellwegeri sündroom)
saadud valgusreaktsioonist). See reaktsioon jätkub tsütoplasmas. Valkude importi kloroplasti vahendab transiit-peptiid. 12. Peroksüsoomid, nende ülesanne ja nende ensüümid. Peroksüsoomid on väikesed (ca 0.2-1 µm läbimõõdus), ühekordse membraaniga ümbritsetud organellid, mis esinevad kõikides loomsetes rakkudes (v.a. erütrotsüüdid) ja paljudes taimerakkudes. Peroksüsoomides esineb mitmeid oksüdatiivseid ensüüme: D-aminohapete oksüdaas, uraatoksüdaas, lutsiferaas (viimane esineb jaanimardika vastsetel e. 'jaaniussidel' ning põhjustab helendumist). Erinevates kudedes võib peroksüsoomide ensüümkomplekt erineda, kuid kindlasti sisaldavad peroksüsoomid katalaasi, mis lagundab tekkivat vesinikperoksiidi. Ensüümide import peroksüsoomi. Peroksüsoomides vajaminevad ensüümid korjatakse kokku tsütoplasmast. Äratundmissignaaliks on tripeptiid Ser- Lys-Leu. Peroksüsoomide funktsioneerimise häiretest tingitud haigus (Zellwegeri sündroom)
Lagundamata ained kogunevad rakkudes lüsosoomidesse inklusioonidena 168. Peroksüsoomide struktuur, suurus, ehitus. Need on väikesed ühekordse membraaniga organellid (0,2 1 µm diameeter). Peroksüsoomid sisaldavad mitmesuguseid flavoproteiinseid oksüdaase (ensüüme, mille kofaktoriteks on FAD või FMN), mis oksüdeerivad orgaanilisi ühendeid hapniku kasutamisega. Sellisteks ensüümideks on näiteks D- aminohapete oksüdaas, rasvhapete oksüdeerumises osalevad ensüümid, lutsiferaas jt. Peroksüsoomides DNA ja ribosoomid puuduvad, seega kõik peroksüsoomide valgud peavad saama imporditud tsütoplasmast 169. Loetlege, millised biokeemilised protsessid toimuvad peroksüsoomides? 1)Rasvhapete lagunemine toimub nii mitokondrites kui ka peroksüsoomides. 2)Eriti pikaahelalised rasvhapped (süsiniku aatomeid> 20) lagundatakse ainult peroksüsoomides. 3)Maksa ja neerude rakkude peroksüsoomides lagundatakse mitmesugused
Peroksüsoomid on väikesed (ca 0.2-1 µm läbimõõdus), ühekordse membraaniga ümbritsetud organellid, mis esinevad kõikides loomsetes rakkudes (v.a. erütrotsüüdid) ja paljudes taimerakkudes, peeti pikalt lüsosoomideks. Uued peroksüsoomid tekivad vanadest lihtsa jagunemise teel. Nad on ise- replitseeruvad organellid. Sisaldavad ensüüme, mis erinevad lüsosomalsest ensüümkomplektist, ka leidub seal mitmeid oksüdatiivseid ensüüme: D- aminohapete oksüdaas, uraatoksüdaas, lutsiferaas. Sisaldavad peroksüsoomid katalaasi, mis lagundab tekkivat vesinikperoksiidi. Peroksüsoomides olevad ensüümid võivad olla nii kõrges kontsentratsioonis, et osa neist esineb isegi kristallidena, mis on elektronmikroskoobis nähtavad elektrontiheda südamikuna. Peroksüsoomides toimuvad oksüdatiivsed reaktsioonid. Nimelt peroksüsoomid on põhilised organellid, kus toimub teatud tüüpi rasvahapete oksüdeerimine.
Lagundamata ained kogunevad rakkudes lüsosoomidesse inklusioonidena. 4.)Peroksüsoomide struktuur, suurus, ehitus. Need on väikesed ühekordse membraaniga organellid (0,2 1 µm diameeter). Peroksüsoomid sisaldavad mitmesuguseid flavoproteiinseid oksüdaase (ensüüme, mille kofaktoriteks on FAD või FMN), mis oksüdeerivad orgaanilisi ühendeid hapniku kasutamisega. Sellisteks ensüümideks on näiteks D-aminohapete oksüdaas, rasvhapete oksüdeerumises osalevad ensüümid, lutsiferaas jt. Peroksüsoomides DNA ja ribosoomid puuduvad, seega kõik peroksüsoomide valgud peavad saama imporditud tsütoplasmast 5.)Loetlege, millised biokeemilised protsessid toimuvad peroksüsoomides? 1)Rasvhapete lagunemine toimub nii mitokondrites kui ka peroksüsoomides. 2)Eriti pikaahelalised rasvhapped (süsiniku aatomeid> 20) lagundatakse ainult peroksüsoomides. 3)Maksa ja neerude rakkude peroksüsoomides lagundatakse mitmesugused vereringes
annaabi.ee 
