(seda pole vaja kodutöös saata sest detailne tuletuskäik on konspektis juba ära toodud; aga see võib tulla kontrolltöös) 4.3 Valguse hajumine. 27 28 4.4 Põhjus miks pole laserikiirt võimalik teha lõpmata peenikeseks (Difraktsioon) 29 4.5 Virtuaalne meetod valguskiire diameetri väiksemaks muutmiseks. Konfokaalse mikroskoopia põhimõtte töötas 50ndate keskel välja (patenteeris 1957), tollel ajal Harvardi Ülikooli järeldoktorantuuris õppiv Marvin Minsky. Idee on lihtne: väikse ava abil eraldada koonduvast valgusest väike osa, mis moodustab detekteeritava ruumala.Juhuslikult peale Minsky patendi aegumist valmistas esimese töötava konfokaalse mikroskoobi taani füüsik G. Fred Brakenhoff. Konfokaalse mikroskoopia suur eelis tavapärase optilise mikroskoopia ees on detektorisse
mis mõõdab ära ja ütleb, et miuke nukleotiid lisati. 2. Uuritav PCR produkt koos praimeriga, mis enne uuritavat nukleotiidi lõpeb, viiakse kandjale, tekib kiip. Praimer peab PCRi produktile kinnituma. Lisatakse DNA Pol ja didesoksünukleotiid, mis blokeerib Pol-reaktsiooni. See nukleotiid on florokroomiga märgistatud, ekstensioon 1 nukleotiidi võrra ja pärast konfokaalse skänneriga loetakse kiipi ja saadakse teada, kus tuleb värv esile. 2. DNA-Pol põhised pürosekveneerimistehnikad: väga kiire ja võimas. 1. Klassikaline oligonukleotiidide kiip, millel on erinevad oligonukleotiidi, millel 1 positsioonis on erinev nukleotiid. Ja meid huvitav produkt hübridiseerub ainult ühele neist ja annab fluorestseeruva signaali. Sekveneeritakse väga lühikesi DNA ahelaid,
See ühend seetõttu takistab tsütokineesi toimumist mitoosiprotsessis. Meetodid rakubioloogias 160. Milliseid geenitehnoloogilisi meetodeid kasutatakse valgu lokalisatsiooni muutuse jälgimiseks elusas rakus? Bioluminestseeruvad/fluorentsed lisandused rakku vastavale valgule. 161. Kuidas toimite, kui tahate näha ühe spetsiifilise valgu lokalisatsiooni rakus? 162. Mille poolest erineb uuritavast objektist tavalise fluorestsentsmikroskoobi abil saadav kujutis konfokaalse fluorestsentsmikroskoobi abil saadavast kujutisest? 163. Kuidas tuleb uuritavat preparaati töödelda, et see oleks vaadeldav skanneeriva elektronmikroskoobiga? 164. Milliste meetoditega on võimalik apoptoosi näidata. Peroksüsoomid, lüsosoomid, proteasoomid 165. Lüsosoomide struktuur, suurus, ehitus, toimuvad protsessid Lüsosoomid on loomarakkudes üheks piirkonnaks, kus toimub kõige erinevamate ühendite lagundamine. Lüsosoomidesse liiguvad ja lagundatakse
Propiidiumjodiid ja etiidiumbromiid-positiivselt laetud fluorestseeruvad ained, mis läbivad surnud rakkude kahjustatud plasmamembraani ning värvivad nukleiinhappeid (DNA, RNA). Seostuvad aluspaaride vahele, mille järel nende fluorestsents tõuseb ligi 30 korda. Neeldumis maksimum 535 nm ja kiirgamise maksimum 617 nm. Märgistatud antikehade kasutamise põhimõte kaudse immuunotsütokeemia meetodi puhul. Antigeenile seondubantikeha, millele omakorda seondub märgistatud antikeha Konfokaalse skanneeriva fluorestsentsmikroskoopia põhimõte. Fluorestseeruvate hübriidvalkude saamine ja kasutamine elusate rakkude uurimiseks. GFP märgistatud valgu liikumist saab jälgida Läbiva kiirega ja skanneeriva elektronmikroskoobi tööpõhimõte. Läbivat kiire puhul on näidis keskel ning pilt tuleb floursent ekraanile. Näeb raku sisse Skaneeriva puhul on näidis all ja pilt tuleb ekraanile, näeb raku pealmist poolt
Meetodid rakubioloogias Milliseid geenitehnoloogilisi meetodeid kasutatakse valgu lokalisatsiooni muutuse jälgimiseks elusas rakus? Valk märgistatakse fluorestseeruva aminohappe järjestusega, mida valk endaga kaasas veab ja mida on fluorestsentsmikroskoobis näha. Kuidas toimite, kui tahate näha ühe spetsiifilise valgu lokalisatsiooni rakus? Monoklonaalsete antikehade kasutamine. Mille poolest erineb uuritavast objektist tavalise fluorestsentsmikroskoobi abil saadav kujutis konfokaalse fluorestsentsmikroskoobi abil saadavast kujutisest? Võimaldab kõrgkvaliteedilist kujutist ka suhteliselt paksust koematerjalist, ei ole vaja teha üliõhukesi lõike. Kujutis tekib ainult sellest tasapinnast, mis on fookuses. Fookusest väljas olevad piirkonnad jäävad mustaks, neid ei näe. Kui teha uuritavast objektit suur hulk opitilisi lõike, saab arvuti abil need sünteesida kolmemõõtmeliseks kujutiseks.
Meetodid rakubioloogias Milliseid geenitehnoloogilisi meetodeid kasutatakse valgu lokalisatsiooni muutuse jälgimiseks elusas rakus? Valk märgistatakse fluorestseeruva aminohappe järjestusega, mida valk endaga kaasas veab ja mida on fluorestsentsmikroskoobis näha. Kuidas toimite, kui tahate näha ühe spetsiifilise valgu lokalisatsiooni rakus? Monoklonaalsete antikehade kasutamine. Mille poolest erineb uuritavast objektist tavalise fluorestsentsmikroskoobi abil saadav kujutis konfokaalse fluorestsentsmikroskoobi abil saadavast kujutisest? Võimaldab kõrgkvaliteedilist kujutist ka suhteliselt paksust koematerjalist, ei ole vaja teha üliõhukesi lõike. Kujutis tekib ainult sellest tasapinnast, mis on fookuses. Fookusest väljas olevad piirkonnad jäävad mustaks, neid ei näe. Kui teha uuritavast objektit suur hulk opitilisi lõike, saab arvuti abil need sünteesida kolmemõõtmeliseks kujutiseks.
Faaskontrastmikroskoobi tähtsus on selles, et ka värvimata (elusad) rakud on hästi nähtavad. Kasutatakse rakukultuuride uurimiseks. Väga lähedane faaskontrastmikroskoobile on Nomarski interferentsmikroskoop. Kasutatakse samuti elusate rakkude uurimiseks. 2.)Kuidas toimite, kui tahate näha ühe spetsiifilise valgu lokalisatsiooni rakus? Jätkuvalt monokloonsed antikehad? 3.)Mille poolest erineb uuritavast objektist tavalise fluorestsentsmikroskoobi abil saadav kujutis konfokaalse fluorestsentsmikroskoobi abil saadavast kujutisest? Vimaldab krgekvaliteedilist optilist kujutist ka suhteliselt paksust koematerjalist, ei ole vaja teha ülihukesi like. Töötab nagu fluorestsentsmikroskoop, ta on varustatud vastava optikaga. Valgusallikaks on aga laserikiir. Phimte: Kujutis tekib ainult sellest tasapinnast, mis on fookuses. Fookusest väljas olevad piirkonnad (mis tavalises mikroskoobis paistaksid
annaabi.ee 
