1. Ensüümi kontsentratsiooni (E) mõju reaktsiooni kiirusele (v) Varieerub fosfataasi kontsentratsioon, teised parameetrid on konstantsed. Töö käik: Eppendorf tuubi segasin puhverlahuse(pH=9,5), MilliQ vee ja pNPP. Inkubeerisin 2 minutit ning seejärel lisasin ensüümi (120 000x lahjendus) ning inkubeerisin 15 minutit. Reaktsiooni lõpetasin 0,1 M NaOH lisamisega. Seejärel määrasime optilise tiheduse 410 nm juures. Andmed: A=0,059 Ao=1 Co=1mg/ml Küveti laius: l=0,5 cm Ekstinktsioonikoefitsent: ε410 nm=18400 M-1cm-1 Reaktsiooniaeg: t=15 min Arvutused: Produkti kontsentratsiooni arvutan optilise tiheduse järgi (Lambert-Beeri A seadus A=C produkt ∗ε∗l ) = > C produkt = , ε = 18400 M-1/cm-1) ja ε∗l reaktsiooni kiiruse ( v =C produkt /t )
ksantofüll ekstraktis domineerib. Viga tuleneb suure tõenäosusega sellest, et kasutasin liiga palju ekstrahenti ja minu apelsinikoore ekstrakt oli selle tulemusena äärmiselt hele, võib öelda, et praktiliselt värvitu. Oleksin pidanud saama tulemused, mis oleksid sobitunud lainepikkustega 416 nm, 440 nm ja 468 nm. Sellises suurusjärgus neeldumismaksimumid oleksid vastanud ksantofüllile neoksantiin, mille ekstinktsioonikoefitsent E1cm1%=2270. (Minu katse põhjal võib öelda, et neeldumismaksimumide vahemikud 453,5 nm ja 426,0 nm on õiges suurusjärgus ja vahemikus, kuid edasine tulemus ei klapi.) Karotenoidi sisalduse arvutamine (kvantitatiivne analüüs) Karotenoidi sisalduse arvutamiseks kasutatakse neeldumisspektri analüüsimisel saadud andmeid ehk neeldumismaksimumidele max vastavaid absorptisooni (A) väärtusi. Reeglina
andmeid neeldumismaksimumine vastavaid absorptsiooni väärtusi. Reeglina võetakse aluseks selline absorptsiooni väärtus, mis vastab neeldumisspektril kõige kõrgemale tipule. Arvutus põhineb nimetatud lainepikkusele vastava A väärtuse ja samal lainepikkusel mõõdetud ekstinktsioonikoefitsendi (karotenoidi 1%-liste lahuste absorptsiooni väärtus) väärtuse suhtele. · A neeldumisgraafikul kõrgeimale tipule vastav A väärtus · E1cm1% - vaadeldava karotenoidi ekstinktsioonikoefitsent (1% karotenoidi lahuse absorptsioon) · V ekstrakti kogumaht ml · d kasutatud ekstrahendi tihedus g/ml · g uurimiseks võetud taimse materjali mass g Järeldus: Uuritud tomat sisaldas karotenoidina põhiliselt lükopeeni, mille sisaldus oli 1,7137 mg%, mis tähendab, et 100 grammis tomatis on 1,7137 milligrammi lükopeeni. Töö oli edukas ja saadud tulemus mahtus internetist leitud vahemikku.
Tulemused: Neeldumisspektri maksimumid: 447,5 nm D=0,6426 473,0 nm D=0,8838 505,0 nm D=0,7256 E1cm1%=3450 V = 8,2 ml Kirjanduse alusel domineerib tomatites lükopeen maksimumidega 446, 474, 506 d = 0,704 g/cm3 Karotenoidi sisalduse arvutamine (kvantitatiivne analüüs) Kus A absorbtsiooni väärtus, mis vastab arvutuse aluseks valitud neeldumismaksimumile max (kõrgeimale ,,tipule"vastav A väärtus) E1cm1% - vaadeldava karotenoidi ekstinktsioonikoefitsent (1%-lise karotenoidi lahuse absorbtsioon) sama max juures V ekstrakti kogumaht, ml d kasutatud ekstrahendi tihedus, g/cm3 g uurimiseks võetud taimse materjali mass, g 103 tegur milligrammidele üleminekuks Tomatis sisaldub 1,422 mg lükopeeni 100 g tomati kohta. Kirjanduse alusel sisaldab värske tomat 2,573-3,025 mg lükopeeni. Tomati muudab tervislikuks just lükopeenide kõrge tase, mis lisaks tervislikkusele annab tomatile ka väga ilusa ja punase värvi
Heptaanis: Karotenoid max E%1cm -karoteen 450 2380 KAROTENOIDIDE SISALDUSE ARVUTAMINE (KVANTITATIIVNE ANALÜÜS): kus A - absorptsiooni väärtus, mis vastab arvutuse aluseks valitud neeldumismaksimumile max (kõrgeimale ,,tipule" vastav A väärtus) - vaadeldava karotenoidi ekstinktsioonikoefitsent (1%-lise karotenoidi lahuse absorptisoon) sama max juures V ekstrakti kogumaht, ml d kasutataud ekstrahendi tihedus, g/cm3 g uurimiseks võetud taimse materjali mass, g 103- tegur milligrammidele üleminekuks Kokkuvõte Erinevate internetiallikate põhjal selgub, et männiokastes võib sõltuvalt männi asukohast, liigist, reostatuse astmest, okaste vanusest ning loomulikult aastaajast olla luteiini, - karoteeni, neoksantiin ja violaksantiini. Seejuures täpsustatakse, et:
neeldumismaksimumid. 5. Millises lainepikkuste vahemikus paiknevad karotenoidide neeldumismaksimumid ja millest on see tingitud? Neeldumismaksimumid paiknevad nähtava valguse sinises ja rohelises piirkonnas, mis tuleneb sellest, et enamus karoteene on punakad-oranzikad. 6. Mis on molaarne ekstinktsioonikoefitsient e -tegur ja millist ekstinktsioonikoefitsienti kasutasite teie antud töös? Näitab 1%-lise lahuse absorptsiooni, antud töös kasutatud ekstinktsioonikoefitsent iseloomustab absorptsiooni kõige kõrgema A väärtusega lainepikkusel. 7. Mida tähendab termin ,,ekstraktsioon" ja millega põhjendate antud töös kasutatud ekstrahendi valikut? Tähendab, et ainest lahustatakse mingi aine välja. Antud töös oli selleks lahustiks petrooleeter, sest see on apolaarne orgaaniline solvent ja karotenoidid lahustuvad ainult sellistes solventides. 8. Millega põhjendate veevaba soola kasutamise vajadust uuritava materjali ekstraktsiooniks ettevalmistamisel?
Valguse neeldumist kirjeldab Lambert-Beeri seadus: Fluorestsents-spektroskoopia: Fluorestsentsi võib kirjeldada järgmise skeemi abil: Fluorestsents-spektroskoopia on umbes 100 korda tundlikum kui spektrofotomeetria. Looduses on väga vähe piisavalt tugeva fluorestsentsiga ühendeid. Seetõttu kasutatakse sünteetilisi substraate, mille koostisesse on viidud fluorogeenseid rühmi. F fluorestsentsi intensiivsus Io - ergastava kiirguse intensiivsus - ekstinktsioonikoefitsent c - molaarne kontsentratsioon l - neelava kihi paksus Q - kvantsaagis Kui cl on väike, lihtsustub valemiks: kus F on proportsionaalselt sõltuv kontsentratsioonist. Mida madalam on lahuse optiline tihedus, seda korrektsem on spektrofluorimeetriline mõõtmine! Turbidimeetria: Mitmete ensüümreaktsioonide substraadid või produktid ei lahustu vees. Lahustumatud osakesed ehk agregaadid hajutavad oluliselt kiirgust ja nende lahused ei allu
annaabi.ee 
