Tüüpiline kromatografeerimissüsteem koosneb kolonnist, eluendi reservuaarist ja automaatsest franktsioonikogust ehk kollektorist. Ainete kontsentratsioonide kindlakstegemiseks eluaadi fraktsioonides kasutataksse käesolevas töös spektromeetrilist meetodit. Töö käik Kolonni iseloomustamine ja ettevalmistamine. Kolonni täidiseks oli SephadexG75 ning seda iseloomustav tegur k, mis sõltub kasutatava geeli pundumisastmest, oli 0,1. Geelisamga kõrgus L oli 22,2 ja diameeter d oli 1,8 Täidise kogumaht Vt= r 2 * L = *( 1,8/2)2 * 22,2= 56,46 Geelmaatriksi maht Vg= k*Vt= 0,1 * 56,46= 5,6 Maksimaalne elueerimismaht Vxmax= Vt-Vg = 56,46 5,6=50,86 Fraktsioonide üldarv n, arvestades ühe fraktsiooni maht on 2ml, seega n=Vxmax/2 =50,86/2=25,2 Katseklaasistatiivi asetasin 25 nummerdatud klaasi, kus olid eelnevalt tehtud 2ml piirid.
min Vx - Vx R f = max min Vx - V x Kromatogramm on eluaadi fraktsioonides sisalduva aine kontsentratsiooni ja eluaadi mahu vaheline graafiline sõltuvus. Töö käik Kolonni iseloomustramine ja ettevalmistamine: · Kontrollin kolonni vertikalsust. On vertikaalne. · Märgin üles kasutatava kolonni täidiseks oleva Sephadex'i mark ja seda iseloomustav tegur k , mille väärtus sõltub kasutatava geeli pundumisastmest. Sephadex G-75, pundumistegur k= 0,1. · Mõõden geelisamba (täidise) kõrgus L ja diameeter d, kasutades sobiva joonlauda. L=32,5 cm. d=1,9 cm. · Arvutan täidise kogumaht Vt . · Arvutan geelimaatriksi maht Vg . · Arvutan kolonni iseloomustav maksimaalne elueerimismaht Vxmax. · Arvutan fraktsioonide üldarv n, arvestades, et ühe fraktsiooni mahuks on 2 ml. n= Vxmax/2 =82,89/2=41,445=~42
Eluendi lisamine kolonni ja fraktsioonide kogumine toimub käsitsi. Antud töös kasutatakse spektrofotomeetrilist meetodit. Töö käik: Kolonni iseloomustamine ja ettevalmistamine ·Kontrollisin kolonni vertikaalsust, asendit korrigeerida polnud vajalik. ·Kolonnis oleva Sephandex'i mark: Sephandex G75 fraktsioonimispiirkond 3000-80000 D, k=0.1 (väärtus sõltub kasutatava geeli pundumisastmest) ·Mõõtsin geelisamba kõrguse L ja diameetri,kasutades sobivat joonlauda.n L=28cm; d=2.2cm. ·Arvutasin täidise kogumahu Vt= r 2 *L= *1.1²*28=106 cm³ ·Arvutasin geelimaatriksi mahu Vg=k*Vt=0.1*106=10.6 ja sellest lähtuv kolonni iseloomustav maksimaalne elueerimistmaht Vx;max=Vt-Vg=106-10.6=95.4 ·Arvutasin fraktsioonide üldarvu, arvestan kindlaks mahuks 2ml. n=Vx;max/2=95.4/2=47.7. (Kuigi selline arvutus, läks mul vaja 36 katseklaasi).
Kolonn on kinnitatudstatiivi külge sellisele kõrgusele, et selle alla mahuks katseklaas. Ainete kontsentratsioonide kindlakstegemiseks eluaadi fraktsioonides kasutatakse käesolevas töös spektrofotomeetrilist meetodit Töö käik Kolonni iseloomustamine ja ettevalmistamine · Kontrollisin kolonni vertikaalsust. · Märgisin üles kasutatava kolonni täidiseks oleva Sephadex'i mark ja seda iseloomustav tegur k, mille väärtus sõltub kasutatava geeli pundumisastmest ning sain teada et see on võrdne 0,1-ga. · Mõõtsin geelisamba (täidise) kõrgus L ja ja diameeter d, kasutades sobivat joonlauda. Sain, et L=31cm ja d=1,8 cm · Arvutasin täidise kogumaht Vt Selleks, et leida kogumahu, tuleb esiteks leida aluse pindala: S = r2 = · 0,92 2,54cm2 Ning arvutasin kogumaht: Vt = S · L = 2,54 · 31 78,74cm3 · Arvutasin geelimaatriksi maht Vg = k · Vt ja sellest lähtuvalt kolonni iseloomustav maksimaalne elueerimismaht Vxmax = Vt Vg: Vg = 0,1 · 78
kiht. Ainete kontsentratsioonide kindlakstegemiseks eluaadi fraktsioonides kasutatakse selles töös spektrofotomeetriat. 2.1.1.1 Töö käik Antud töös aga automaatset kromatografeerimissüsteemi ei kasutata ning fraktsioonid kogutakse käsitsi. KOLONNI ISELOOMUSTAMINE JA ETTEVALMISTAMINE: 1. Kontrollin, et geelkromatograafia kolonn asuks täpselt vertikaalselt ning sobival kõrgusel. 2. Kolonni täidiseks on Sephadex G-75 ja seda iseloomustav, geeli pundumisastmest sõltuv tegur k = 0,1. 3. Mõõdan geelisamba kõrguse ja diameetri L = 17,8 cm d = 2,7 cm 4. Arvutan täidise kogumahu Vt = = 3,14 5. Arvutan geelimaatriksi mahu Sellest lähtuvalt saab leida kolonni iseloomustava maksimaalse elueerimismahu 6. Arvutan fraktsioonide üldarvu n, arvestades ühe fraktsiooni mahuks 2 ml, mistõttu 7
Kolonn on kinnitatudstatiivi külge sellisele kõrgusele, et selle alla mahuks katseklaas. Ainete kontsentratsioonide kindlakstegemiseks eluaadi fraktsioonides kasutatakse käesolevas töös spektrofotomeetrilist meetodit Töö käik Kolonni iseloomustamine ja ettevalmistamine · Kontrollisin kolonni vertikaalsust. · Märgisin üles kasutatava kolonni täidiseks oleva Sephadex'i mark ja seda iseloomustav tegur k, mille väärtus sõltub kasutatava geeli pundumisastmest ning sain teada et see on võrdne 0,1-ga. · Mõõtsin geelisamba (täidise) kõrgus L ja ja diameeter d, kasutades sobivat joonlauda. Sain, et L=31cm ja d=1,8 cm · Arvutasin täidise kogumaht Vt Selleks, et leida kogumahu, tuleb esiteks leida aluse pindala: S = r2 = · 0,92 2,54cm2 Ning arvutasin kogumaht: Vt = S · L = 2,54 · 31 78,88cm3 · Arvutasin geelimaatriksi maht Vg = k · Vt ja sellest lähtuvalt kolonni iseloomustav maksimaalne elueerimismaht Vxmax = Vt Vg: Vg = 0,1 · 78
käesolevas töös spektrofotomeetrilist meetodit (vt 2B. Spektroskoopilised meetodid). Töö käik Kolonni iseloomustamine ja ettevalmistamine · Kontrollitakse kolonni vertikaalsust ja vajadusel korrigeeritakse kolonni asendit. · Märgitakse üles kasutatava kolonni täidiseks oleva Sephadex'i mark ja seda ise- loomustav tegur k, mille väärtus sõltub kasutatava geeli pundumisastmest. · Mõõdetakse geelisamba (täidise) kõrgus L ja ja diameeter d, kasutades sobivat joonlauda. NB! Täidise diameetri mõõtmine eeldab kolonni sisediameetri võimalikult täpset määramist nihkkaliibri või joonlaua abil. · Arvutatakse täidise kogumaht Vt. · Arvutatakse geelimaatriksi maht Vg = k · Vt ja sellest lähtuvalt kolonni iseloomustav maksimaalne elueerimismaht Vxmax = Vt Vg.
annaabi.ee 
