Reaktsiooniks kulgenud aeg fikseerin stopperiga. 5. Kohe peale reaktsiooni segu läbiloksutamist pipeteerin 1 ml reaktsioonisegu lahust komplekslahusega kolbi (proov 1). 10 minutit peale ensüümireaktsiooni algust pipeteerin 1 ml reaktsioonisegu teise kolbi (proov 2). 20 minutit peale ensüümireaktsiooni algust pipeteerin 1 ml reaktsioonisegu kolmandasse kolbi (proov 3). 6. Koonilised kolvid asetan pliidile püstjahutite alla ja keedan neid 10 minutit. Kolvidesse tekib punane vask (1) oksiidi sade. 7. 10 minuti pärast lõpetan keetmist, lisades igasse kolbi 150 ml destilleeritud vett. Jahutan kolvid kraanivee all toatemperatuurini. 8. Lisan igasse kolbi 0,6 ml mureksiidi. Proovid omandavad violeetset tooni. 9. Tiitrin 0,02 M lahusega kuni roheka värvuse ilmumiseni. Esimesele proovile kuulus 4,5 ml lahust, teisele 17 ml lahust, kolmandale 29,5 ml lahust. 10. Leian taandavate suhkrute sisaldust kaliibrimisgraafiku järgi:
lahustes - Vasksulfaat Töö käik 1. Koonilised kolvid panna elektripliidi peale ja ära ühendada püstjahutitega. 2. Panna elektripliit tööle ja oodata millal kolvi sees olevad lahused hakkavad keema. Lasta lahustel keeda 10 minutit ja aega VÕTTA ALATES SELLES KUI LAHUSED KEEVAD! 3. Mõõta 150 mL destilleeritud vett iga kolvi jaoks. 4. Kui 10 minutit on möödas keemisest siis valada 150 mL destilleeritud vett kolvidesse kasutades lehtrit. 5. Pärast keetmist panna kolvid külma veevanni kuni nad saavutavad toatemperatuuri. 6. Kõikidesse kolvidesse panna 6 tilka ehk 0,3 mL mureksiidi. Kolvisisu võtab violetse tooni. 7. Alustada tiitrimist 0,02M CuSO4 lahusega kuni violetset tooni asendab rohekas toon. Kui rohekas toon on ilmunud kohe kirja panna vasksulfaadi lahuse ruumala mis kulus tiitrimiseks
kolbidest, kus on komplekslahus. Selles määratav taandaavate suhkrute sisaldus iseloomustab 0- proovi. 10 min pärast ensüümi lisamist pipeteeritakse 1 ml reaktsioonisegu teise kolbi ja 20 min. pärast kolmandasse kolbi. 6. Kolvid reaktsiooniseguga asetatakse 10 minutiks elektripliidile püstjahuti alla keema. Keemistemperatuuril toimub vase redutseerimine taandavate suhkrute toimel. Keetmine lõpetatakse 150 ml destilleeritud vee lisamisega kolvidesse läbi püstjahuti. Kolvid võetakse pliidilt ja jahutatakse kraanivee all toatemperatuurini. 7. Reaktsioonil vabanenud triloon-B kogus määratakse 0,02 M CuSO4 lahusega tiitrimisel. Enne tiitrimise alustamist lisatakse igasse kolbi 0,3 ml(umbes 6 tilka) mureksiidi vesilahust, mille toimel värvus kolvi sisu violetseks. Tiitritakse seni, kuni kolvi sisu muutub intensiivselt roheliseks. 8
välja. Reaktsiooniproduktide sisalduse määramine Cu2O formeerumine toimub keemistemperatuuril. Selleks asetatakse kolvid elektripliidile püstjahuti alla. Alates keemise algusest keedetakse kolvide sisu 10 minutit. Pärast seda lisatakse jahuti otsast keemisprotsessi lõpetamiseks igasse kolvi 150 ml destilleeritud vett. Kuumad kolvid võetakse pliidilt ja jahutatakse voolava kraanivee all. Jälgitakse, et kolvidesse ei pritsiks kraanivett, sest see rikub töö tulemuse (triloon-B komplekseerub kraanivees leiduvate metallidega). Pärast keetmist on esimeses, 0-prooviga kolvis sinine lahus. Teises kolvis on tumesinises lahuses veidi punast sadet. Kolmandas kolvis on punane Cu2O sade kõige märgatavam. Igasse kolvi lisatakse 0,2 ml ehk 200 l indikaatori mureksiidi vesilahust (automaatpipetiga). Kõikides kolvides omandavad lahused kerge violetse tooni. Seejärel toimub tiitrimine.
20 minuti möödudes võtsin viimase proovi, et teha kindlaks hüdrolüüsi ulatus 20 min möödudes. Seejärel alustasin taandavate suhkrute reageerima panemist vask(II) triloon B kompleksiga. Selleks ajasin kolvid 10-ks minutiks keema, sest reaktsioon toimub keemistemperatuuril. Pärast 10-t minutit keemist valasin 150 ml destilleeritud vett kolbi läbi püsijahuti, et suureneks vedeliku maht kolvis ning indikaatori värvuse paremini märgatavaks muutmiseks tiitrimisel. Seejärel lisasin kolvidesse mureksiidi vesilahust indikaatoriks tiitrimisel. Seejärel viisin CuSO4 lahusega läbi tiitrimise, et kasutatud titrandi mahu järgi määrata hüdrolüüsunud suhkrute sisaldus mg-des 1 ml-s reaktsioonisegus võetud proovis. Seda kasutades saan arvutada ensüümi preparaadi aktiivsuse. · Töö käik etappide kaupa Ensüümpreparaadi töölahuse valmistamine Praktikumi juhendaja näpunäidete järgi valmistasin vajaliku koguse sobiva ensüümi
annaabi.ee 
