Töö nr 2: Ligeeritud produktide transformeerimine E.coli rakkudesse. Lähteained: Ligeeritud genoomne DNA (6 l). TE, 10 mM Tris-HCl, pH 7,5; 1 mM EDTA-Na2. E.coli DH5 alfa kompetentsed rakud (valmistamist vaata lisast) Steriilne LB (lysogeny broth) sööde (koostis 1 liitri lahuse kohta , 10 g trüptooni, 5 g pärmi ekstrakti ja 5 g NaCl) agar Ampitsilliini (Amp) vesilahus, 100 mg/ml IPTG (isopropüültio-beta-D-galaktosiid), 0,5 M vesilahus X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indolüül-beta-D-galaktosiid), 20 mg/ml 70% Etanool. Töö käik: (1) Transformatsiooniks lahjenda saadud ligeerimissegu (6 l) TE-ga 10-30 korda (1 osa ligeerimissegu ja 9-29 osa TE-d), sega korralikult ja pipeteeri 10 l lahjendatud segu uude katseklaasi. Võtsin 3 l ligeerimissegu ja 6 l TE-d (tegin 3-kordse lahjenduse). (2) Transformatsioon: 10 l ligeeritud DNA lahjendust 9 l 3-kordset lahjendust + 20 l E
Insert- see fragment, mida kloonitakse. 3 Töö nr 2: Ligeeritud produktide transformeerimine E.coli rakkudesse. Lähteained: Ligeeritud genoomne DNA (6 l). TE, 10 mM Tris-HCl, pH 7,5; 1 mM EDTA-Na2. E.coli DH5 alfa kompetentsed rakud (valmistamist vaata lisast) Steriilne LB (lysogeny broth) sööde (koostis 1 liitri lahuse kohta , 10 g trüptooni, 5 g pärmi ekstrakti ja 5 g NaCl) agar Ampitsilliini (Amp) vesilahus, 100 mg/ml IPTG (isopropüültio-beta-D-galaktosiid), 0,5 M vesilahus X-gal (5-bromo-4-kloro-3-indolüül-beta-D-galaktosiid), 20 mg/ml 70% Etanool. Töö käik: (1) Transformatsiooniks lahjenda saadud ligeerimissegu (6 l) TE-ga 20 korda (1 osa ligeerimissegu ja 9-29 osa TE-d), sega korralikult ja pipeteeri 10 l lahjendatud segu uude katseklaasi. 6*20-6114 l TE. (2) Transformatsioon: 10 l ligeeritud DNA lahjendust + 20 l E.coli DH5 alfa kompetentseid rakke (hoitakse 0 oC juures) (lahus peab kogu aeg olema
mustsõstra antotsüaniidide kontsentraadi manustamisel, paranes silmade pimedusega (15) kohanemisvõime ja kuvariga töötamisel tekkinud silmade väsimus möödus kiiremini. Võib eeldada, et ka mustikas sisalduvate antotsüaanid võiksid seda efekti tekitada. Inimese nägemisele kaitsavat toimet on leitud harilikus mustikas sisalduvate, Cy-3-O-arabinosiid, Cy- 3-O-galaktosiid ja C3G (tsüanidiini ja süsivesiku ühendid), ainete manustamisel (15) silmanhaigusi põdevatele patsientidele. Järelikult on arvestatavat tõestusmaterjali, et mustikas on silmadele kasulik, olemas. Arutelu Antud referaadi põhjal leian, et mustika ja porgandi tarbimine, ja ka nende toimeainetega preparaatide tarbimine annab positiivse panuse silma tervisele.
Valkude isovormid: transkriptide splaissingu alternatiivsed ainevahetusalad (lähedasi omadusi omavad ensüümid/valgud). Üks geen võib moodustada perekonna lähedasi valke eksonite alternatiivse splaissingu tulemusel. "Viga parandab vea" - geenisisene komplementatsioon. Kahe samas geenis asuvate mutatsiooni mõjul moodustub normaalne fenotüüp. Polaarne mutatsioon - mutatsioon, mis takistab endast allavoolu (tavaliselt?) olevate geenide avaldumise. LacZ, beta-galaktosidaas; lacY, beta-galaktosiid permeaas - moodustub multigeenne mRNA, mis annab translatsioonil need 2 ensüümi. Polaarne mutatsioon ei komplementeeru isegi siis mitte kui teine mutatsioon on samas geenis.
DNA superspiralisatsioonil on kaks tähtsust: pakkida DNA-d ning reguleerida replikatsiooni ning transkriptsiooni. Kõrvutades E. coli raku pikkust kromosoomi pikkusega on ilmselge, et bakter on tunduvalt lühem kui tema sees olev DNA. Logaritmilises faasis kasvab bakter kiiresti ning E. coli pikkus ulatub kuni 2 m-ni, samas näiteks E. coli lac-operon koosneb kolmest geenist lacZ, lacY ja lacA (kodeerivad vastavalt -galaktosidaasi, laktoosi permeaasi ja galaktosiid O- atsetüültransferaasi) ning on umbes 1,7 m pikkune kui arvestada nukleotiidse järjestuse pikkust. Kui arvesse võtta 4639 valku kodeerivat geeni, ulatub E. coli tsirkulaarne DNA 1,5 mm-ni. Need võrdlused näitavad ilmekalt, et bakter peab DNA-d väga efektiivselt pakkima ning lisaks veel operatiivselt võimaldama DNA- d replitseerida ning transkribeerida. Mis tähendab, et bakter peab DNA lahti harutama ning uuesti pakkima. 9.1. Geenide asukoht kromosoomis globaalse regulatsiooni 1
annaabi.ee 
