5 A (nm) 0.4 0.3 0.2 0.1 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 -0.1 V (ml) A B C C. Kõige esimesena väljus kolonnist dekstraansinine, kõige suurema molekulmassi tõttu. järgmisena väljus müglobiin millel on väiksem molekulmass kui dekstraansinisel, kuid suurem kui D-aspartaadil. Viimasena väljuski kõige väiksema molekulmassiga D-aspartaat. Vxmin=Vv=> 27,45 ml Vx=> 41,45 ml Vxmax= 67,45 ml D. Arvutuslik Vxmax=> 64,38 cm3 ja viimasena väljunud komponendi Vxmax=> 67,45 ml, mis pole väga trastiliselt erinev. E. Rf = (Vx – Vx min) / (Vx max – Vx min) Rf = (41,45-27,45)/(67,45-27,45)= 0,35
20 54 0,055 KROMATOGRAMM Miks komponendid väljusid just niisuguses järjekorras? Kõige enne väljub kõige suurema molekulmassiga aine, kõige hiljem aga kõige väiksema molekulmassiga aine. Ained väljusid sellised järjekorras: sinine (dekstraansinine), pruun (müoglobiin), kollane (DNP- aspartaat). Sellest saab järeldada, et kõige suurem molekulmass on dekstraansinisel, kõige väiksem DNP-aspartaadil ning müoglobiini molekulmass jääb nende ainete vahele. Eluaadi maht kuni dekstraansinise kõrgeima kontsentratsiooniga fraktsiooni väljumiseni Vx min = Vv = 17,5 ml Eluaadi maht kuni valgu kõrgeima kontsentratsiooniga fraktsiooni väljumiseni Vx = 23,5 ml Eluaadi maht kolonnist viimasena väljunud komponendi kõrgeima kontsentratsiooniga fraktsiooni väljumiseni Vx max = 46,5 ml
siis V3max ja arvutatud Vxmax peavad kokku langem. Arvutatud Vxmax on 74,9 ml.....siis kõik on õige. ·Arvutame liikuvusteguri Rf väärtus müoglobiini jaoks: Kasutame antud valemi Rf= Vx Vxmin / Vxmax -Vxmin Rf = 34-24/74-24= 0,2 Kokkuvõte: Antud eksperiment demonstreerib ainete segu lahutamise meetodi. Geelkromatograafia meetodi põhimõtteks on ainete segu lahutamine molekulmassi järgi. Meie juhul kõige suuremad molekulid oli dekstraansinisel, mis tõestatakse sellega, et dekstraansinine väljub kolonnist esimesena. Müoglobiini mass oli väiksem ja DNP-aspartaati kõige väiksem , mille tulemusena elueeris viimasena.
eluaadi kogumaht kuni müoglobiini kõrgeima kontsentratsiooniga fraktsiooni väljumiseni Vx2= 33 + 2 8= 49 ml eluaadi kogumaht kuni DNP-aspartaadi kõrgeima kontsentratsiooniga fraktsiooni väljumiseni Vx3= Vxmax= 33 + 2 29= 91 ml Arvutatud Vxmax= 91,8 cm3 Mõõdetud Vxmax= 91 cm3 Müoglobiini liikuvusteguri Rf väärtus, kasutades arvutuslikku Vxmax väärtust Rf= (Vx-Vxmin)/(Vxmax-Vxmin)= (49-37)/(91,8-37)0,22 Järeldused Katse põhjal võis kindlaks teha, et suurim molekulmass on dekstraansinisel, talle järgneb väikese vahega müoglobiin ning väikseimat molekulaarmassi omab DNP-aspartaat. Kromatogrammil on ainete kontsentratsioonide üleminekud kindlalt piiritletud ning sujuvad.
Seda kasutatakse selleks, et ainete lahutamise piir oli nähtav, kuna DNP-aspartaadi lahusel on kollane värv. Tema neeldusmaksimum on lainepikkusel 360 nm. Kolonni voolutamine. Kui kõik uuritav segu jõuab geeli sisse, saab lisada voolutit 4-5cm kõrgusega ja avata väljavooluavat. Ning mõne aega pärast, segu hakkab lahutama: allpool on dekstraansinine, keskel müoglobiin ja üleval on kollase värvusega DNP-aspartaam. See on sellepärast, et kõige suurem molekulmass on dekstraansinisel st. 2·106, ning müoglobiini molekulmass on 16800 ja DNP- aspartaadi mass on kõige väiksem. Kui dekstraansinine jõuab kolonni põhjale siis hakatakse eluaadi kogumist 2ml mahuga fraktsioonidena kaliibritud ja eelnevalt nummerdatud katseklaasidesse. Kogu voolutamise vältel tuleb · jälgida, et kolonni täidise kohal oleks piisavalt eluenti ja seda vastavalt vajadusele juurde lisada, · vahetada õigeaegselt katseklaase, et eluaat saaks kogutud täpselt 2 ml fraktsioonide kaupa.
Aspartaami lahusel on kollane värv. Tema neeldusmaksimum on lainepikkusel 360 nm. Kolonni voolutamine. Kui kõik uuritav segu jõuab geeli sisse, saab lisada voolutit 4-5cm kõrgusega ja avata väljavooluavat. Ning mõne aega pärast, segu hakkab lahutama: allpool on dekstraansinine, keskel müoglobiin ja üleval on kollase värvusega DNP-aspartaam. See on sellepärast, et kõige suurem molekulmass on dekstraansinisel st. 2·106, ning müoglobiini molekulmass on 16800 ja aspartaami mass on kõige väiksem st 294,301. Kui dekstraansinine jõuab kolonni põhjale siis hakatakse eluaadi kogumist 2ml mahuga fraktsioonidena kaliibritud ja eelnevalt nummerdatud katseklaasidesse. Kogu voolutamise vältel tuleb · jälgida, et kolonni täidise kohal oleks piisavalt eluenti ja seda vastavalt vajadusele juurde lisada, · vahetada õigeaegselt katseklaase, et eluaat saaks kogutud täpselt 2 ml
annaabi.ee 
