Alustada ekstrahendi ja karotenoidide segu filtrimist mõõtesilindrisse kasutades lusikat. 3 Martin Tamm (121006YASB) Biokeemia praktikum (töö nr. 2.2 ja 1.3) 7. Jätkata ekstraheerimist ja filtrimist kuni sademe kohal olev ekstrahent on värvusetu. 8. Alustada spektrivõtmist. Neeldumisspektri võtmine ja spektri analüüs Alustatakse spektri võtmist kasutades spektrofotomeetriat. Spektrofotomeetria näitab aine kontsentratsiooni mis on väljendatud optilise tiheduse kaudu. Karotenoidide neeldumisspekter jääb lainepikkuste 350-650 nm vahele ja võrdluslahuseks on orgaaniline solvent mida kasutati ekstraheerimiseks. Ekstraheeritud karotenoide pannakse klaasküvetti kuna neeldumisspektrit mõõdetakse nähtava valguse piirkonnas. 1. Võtta klaasküvett ja panna heptaani küvetti. Heptaan on võrdlemislahuseks. 2
väiksema poorsusega ehk tihedamad Sephadex'i margid, mis on mehhaaniliselt tugevamad ja võimaldavad kolonni kiiret voolutamist. Vältimaks täidise väljavoolamist on kolonni alumine osa täidetud klaasvillaga. Kolonn peab olema kinnitatud sellisele kõrgusele, et selle alla mahuks katseklaas ning täidise kohal peab alati olema mõne cm paksune vaba eluendi kiht. Ainete kontsentratsioonide kindlakstegemiseks eluaadi fraktsioonides kasutatakse selles töös spektrofotomeetriat. 2.1.1.1 Töö käik Antud töös aga automaatset kromatografeerimissüsteemi ei kasutata ning fraktsioonid kogutakse käsitsi. KOLONNI ISELOOMUSTAMINE JA ETTEVALMISTAMINE: 1. Kontrollin, et geelkromatograafia kolonn asuks täpselt vertikaalselt ning sobival kõrgusel. 2. Kolonni täidiseks on Sephadex G-75 ja seda iseloomustav, geeli pundumisastmest sõltuv tegur k = 0,1. 3. Mõõdan geelisamba kõrguse ja diameetri L = 17,8 cm d = 2,7 cm 4
Püütakse saavutada olukord, kus läbi kahe filtri läbitakse võimalikult vähe valgust. ÜLESANNE. Sahharoosi lahus. Eripöörang on +66,65oC. Küvett 20 cm pikk. Pöördenurk oli 12,57o. Protsendiline kontsentratsioon? c = ( *100)/([]*l) c=(12,57*100)/(66,65*2)=9,43% Lora Sulg, Proviisor II, sügis 2010 1.3. SPEKTROFOTOMEETRIA. Spektrofotomeetriat kasutatakse individuaalsete ainete ja segude kvalitatiivseks ja kvantitatiivseks analüüsiks. Reeglina sobib puhaste ainete analüüsil. Teatud juhtudel võib analüüsida ka 2-st kuni 3-st komponendist koosnevat segu. Kvalitatiivne analüüs on raskendatud, kuid kvantitatiivset saab teostada. Vahendiks on spektrofotometer, mis võimaldab mõõta valguse neeldumise intensiivsust proovis. Kuna neeldumisintensiivsus sõltub valguse lainepikkusest, peab spektrofotomeeter võimaldama valida
Siiri Velling (Tartu Ülikool), 2011 CO2+ 2NaOH Na2CO3 + H2O CaSO4(t) + H2O(g) CaSO4·H2O(t) Ebasoovitav nähtus on kaasasadenemine, kus ained, mis peaks sadestustingimustel lahustuma, sadenevad koos analüüdiga kaasa. Selle tulemusena võivad · moodustuda segakristallid · ained adsorbeeruda sademe osakese pinnal ja · võib esineda mehaanilist kaasahaaramist. 4 Instrumentaalmeetodid. Spektrofotomeetria Spektrofotomeetriat saab klassifitseerida erinevate omaduste järgi, näiteks Vastasmõju järgi: · kiirgusspektroskoopia - kiirguse ja aine vastasmõju uurimine · mass-spektromeetria laetud osakeste ja elektromagnetvälja vastasmõju Uurimisobjektidest tulenevalt: Molekulspektroskoopia Aatomspektroskoopia Kiirgusspektroskoopias kasutatavad meetodid ja vastavad lainepikkused: · Röntgenspektroskoopia 0,01-10 nm
järel võetakse reaktsioonisegust proov, milles reaktsioon peatatakse. Kõikides proovides lahutatakse produkt substraadist ja määratakse nende mõlemavõi ühe kontsentratsioon. Produkti kontsentratsioon on määratud iga minuti järel ning kantakse graafikule, kus x-teljel on aeg ning y-teljel produkt. Instrumentaalsed meetodid aktiivsuse määramiseks: Spektrofotomeetria: Spektrofotomeetriat saab kasutada, kui substraat ja produkt neelavad elektromagnetkiirgust erinevalt. Registreeritakse optilise tiheduse muutusi, mis toimuvad spektri nähtava valguse või ultraviolettkiirguse (UV-kiirgus) piirkonnas, lainepikkuste 200- 700 nm vahel. Tavaliselt fikseeritakse optilise tiheduse muutus ühel kindlal lainepikkusel. Nähtava valguse ja ultraviolettkiirguse piirkonnas eelavad ained, millede koostises on kaksiksidemeid, eriti hästi aga aromaatseid tsükleid sisaldavaid rühmi
annaabi.ee 
