Korralikult suspendeerida ning asetada epsid rakkudega 30 minutiks +4°C juurde Pärast tsentrifuugida 3 mint, et lahusesse jäid valgud ja sade koosneks membraani komponendidest ja nukleiinhappetest Teha proovidest uude epsi 2x lahjendus lüüsipuhvriga (selleks pipeteerida 15 μl lüsaati ja 15 μl puhvrit kokku) Mõõta saadud lüsaatide kontsentratsioonid BSA kitiga BSA lahjendusterea ettevalmistamine BSA standardlahuse kontsentratsioon on 2 mg/ml. Sellest tuleb teha 2x lahjenduste rida: 1 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,25 mg/ml, 0,125 mg/ml ja 0 mg/ml ehk puhas MQ. Panna ritta kuus epsi, kirjutada peale vajalikud kontsetratsioonid (esimene on 2 mg/ml). Pipeteerida igasse epsi 50 μl MQ. Esimesse epsi lisada 100 μl alglahust (konts-ga 2 mg/ml). Teisse epsi lisada esimesest epsist 50 μl. Suspendeerida korralikult 5 korda. Saadud
Punaselt on värvunud tsütoplasmavõrgustik, näha on värvumata ümarad tuumad. Rakkudest lüsaadi valmistamine BCA töölahuse valmistamine Standardvalguga kalibreerimiskõvera jaoks valmistasime 1000 µl lahust, oma proovi jaoks 440 µl lahust (400 µl + 40 µl varu). Oma lahuse jaoks võtsin 431,4 µl reagenti A ja 8,6 µl reagenti B. Segasin hoolega ja jagasin 100 µl kaupa 96-se plaadi aukudesse. BSA lahjendusterea ettevalmistus 1. Võta 5 epsi, kirjuta peale kontsentratsioonid 2. Pipeteeri igasse 50 µl lüüsipuhvrit 3. Võta 50 µl BSA 2 mg/ml lahust ja lisa esimesse epsi, suspendeeri korralikult. 4. Tõsta sama otsikuga 50 µl lahust järgmisse epsi ja suspendeeri. 5. Korda tegevust, kuni oled jõudnud 0,125 mg/ml epsini. 6. Viimasesse epsi jääb puhas puhver, ära sinna midagi juurde pane. Oma proovi ettevalmistus Tsentrifuugisin valguprepsi 1 minut max pööretel
3. Asetada rakud jääle, lisada 200 μl lüüsipuhvrit ja 4 μl 50x proteaaside inhibiitorite segu. Korralikult suspendeerida ning asetada epsid rakkudega 30 minutiks +4°C juurde. 4. Pärast fuugida 3 minutit, et lahusesse jäid valgud ja sadenesid membraanid ja nukleiinhapped. Teha oma proovidest uude epsi 2x lahjendus lüüsipuhvriga (selleks pipeteerisin 15 μl lüsaati ja 15 μl puhvrit kokku). 5. Mõõdame saadud lüsaatide kontsentratsioonid BSA kitiga. 108. 109. BSA lahjendusterea ettevalmistamine 110. BSA standardlahuse kontsentratsioon on 2 mg/ml. Sellest tuleb teha 2x lahjenduste rida: 1 mg/ml, 0,5 mg/ml, 0,25 mg/ml, 0,125 mg/ml ja 0 mg/ml ehk puhas MQ. 1. Panna ritta kuus epsi, kirjutada peale vajalikud kontsetratsioonid (esimene on 2 mg/ml). 2. Pipeteerida igasse epsi 50 μl MQ. 3. Esimesse epsi lisada 100 μl alglahust (konts-ga 2 mg/ml). 4. Teisse epsi lisada esimesest epsist 50 μl. Suspendeerida korralikult 5 korda. Saadud lahuse
Üldvalgu normiväärtused vereseerumis 63-85 g/l Töö eesmärk Tavaliselt koosneb kvantitatiivne analüüs, sõltumata määratavast komponendist ja kasutatavast meetodist, kahest etapist: standardlahuse valmistamisest ja standardgraafiku konstrueerimisest. Kindla kontsentratsiooniga lahust nimetatakse standardlahuseks. Standardlahuse lahjendamisel saadakse rida teatud kontsentratsiooniga lahuseid. Selles töös mõõdetakse lahjendusterea lahuste ekstinktsioonid, konstrueeritakse standardgraafik ja selle abil leitakse valgu kontsentratsioon uuritavas lahuses. Töövahendid • Statiiv ja plastviaalid • klaasviaal reaktiiv C valmistamiseks • automaatpipetid • mikser • spektrofotomeeter Uuritav lahus: Tundmatu kontsentratsiooniga valgulahus Standardlahus ja kasutatavad reaktiivid 1. Valgu standardlahus: albumiinilahus, milles üldvalgu kontsentratsioon on 320 µg/ml (lahus on valmis). 2
annaabi.ee 
