Lahjendused tehakse samm-sammulisel lahjendamisel. Selleks valmistatakse esmalt standardlahusest kindla kontsentratsiooniga (0,25mg/ml), saadud lahjendatakse kaks korda ning teist lahust veel omakorda kaks korda. Pärast lahjenduste tegemist loksutatakse lahused korralikult läbi. 3. Värvusreaktsiooni labiviimine: Statiivi asetatakse 6 puhast ja kuiva katseklaasi ning nummerdatakse need. Proovid valmistatakse järgnevalt: Katseklaa Katseklaasi sisu millega on tegu? optiline tihedus s 1 1 ml dest vesi + 3ml tööreaktiiv kontrollproov 0,0690 D 2 1ml uuritav lahus + 3ml tööreaktiiv paraleelkatse 0,1222 D 3 1 ml uuritav lahus+ 3ml tööreaktiiv paraleelkatse 0,1156 D 4 1 ml 0,25 mg/ml glükoosilahus+ 3ml standardlahuse 0,2828 D
koostati graafik (Exelis). Ordinaatteljele märgiti reaktsiooni kiirus v mõõdetud aja pöördväärtusena (l/t) ja abstsissteljele naatriumtiosulfaadi kontsentratsioon. Soovitav mastaap: minimaalne Na 2S2O3 sisaldus lahuses 3 cm ja maksimaalne kiirus-8 cm. Saadud tulemuste põhjal koostati järeldus reaktsiooni kiiruse sõltuvuse kohta reageerivate ainete kontsentratsioonist. 3 Katseklaa Na2S2O3 H2O, cm3 Na2S2O3 Aeg, t, Kiirus, 1/t, s-1 si lahus, cm3 (b) lahuses, a/ s (a) (a+b) 1 6 0 2 32 s 2/32 0,0625 2 4 2 4/3 1,33 49 s 2/49 0,0408 3 3 3 2/2 1 65 s 2/65 0,03077
lahjendustega igaühega 1 katse. Katseklaasidesse pipeteeritakse 1 ml lahust ning 3 ml tööreaktiivi ning loksutatakse ühtlase kontsentratsiooni saavutamiseks. Fikseeritakse reaktsiooni algusaeg ning hoitakse 20 minutit toatemperatuuril. Lainepikkusel 410 nm määratakse optilised tihedused kõikides katseklaasides. Kontrollproovi väärtus lahutatakse kõikidest teiste lahuste optiliste tiheduste väärtustest. Katseklaa Kontsentratsioon Optiline tihedus Lahus s nr (mg/ml) ( = 410 nm) 1. destilleeritud vesi 0,031 2. uuritav lahus 0,093-0,031 = 0,062 3. uuritav lahus 0,095-0,031 = 0,064 4
A = CTyr * 103 * V1 * V2 * 2 / t * 181 * V3 * g CTyr - türosiini kontsentratsiooni muutus valitud ajavahemikus (mg/ml) t - hüdrolüüsi kestus st valitud ajavahemik (s) V1 - reaktsioonisegu (substraat + ensüüm) üldmaht (ml) V2 - valmistatud ensüümilahuse üldmaht (ml) 2 - TKÄ lahusest tingitud proovi lahjendus V3 - ensüümi maht hüdrolüüsisegus (ml) g - proteaasi preparaadi kaalutis (g) 181 - türosiini molekulmass Katseandmed: Katseklaa Aeg t (sekundites) D280 CTyr (mg/ml) s nr. 1 30 0,225 0,0355 2 300 0,270 0,043 3 600 0,290 0,046 4 900 0,345 0,055 CTyr = 0,055 - 0,0355 = 0,0195 t = 900 - 30 = 870 V1 = 26 ml V2 = 5 ml V3 = 1 ml g = 0,0075 g
· Teise katseklaasi lisada kaks tilka FeCl3 lahust. Mida võib tähele panna? Kummas suunas nihkub tasakaal? · Kolmandasse katseklaasi lisada kaks tilka NH4SCH lahust. Kummas suunas nihkub tasakaal? Kas muutus on suurem või väiksem võrreldes FeCl3 lisamisega? · Neljandasse katseklaasi lisada tahket NH 4Cl ja loksutada tugevasti. Kuidas muutub lahuse värvus? Anda selgitus. Katsetulemused: Kc = tasakaalukonstandi avaldis reaktsioonile Katseklaa Lisatatud Värvi Tasakaalu nihkumine s aine muutumine (number) 1. Jääb Punakas-oranz Nihkumist ei ole võrdluseks 2. FeCl3 Tume punane Tasakaal nihkub paremale, ehk (+2tilka) saaduse suunas. 3. NH4SCN Tume punane Tasakaal nihkub paremale, ehk (+2 tilka) saaduse suunas. 4
katseklaasidega pliidilt maha, võtta kätte esimese paari katseklaasid, valada lahused kokku, segada ning asetada siis katseklaas sooja vette tagasi. Mõõta aeg lahuse kokkuvalamise momendist kuni hägu tekkimiseni. Aseta keeduklaas uuesti pliidile tagasi ning tõsta temperatuur 42 kraadini ja korrata katset järgmiste lahuse paaridega Katseandmete töötlus ja tulemuste analüüs Katse 1 Katseklaa Na2S2O3 H2O Na2S2O3 Aeg t (min) Reaktsiooni side paar maht maht suhtelin kiirus v=1/t cm3 cm3 e (min-1) kontsen tratsioo n 1 6 0 6 56 s=0,93min V=1,08
annaabi.ee 
