Peale E2 lahuse lisamist ei tohi liiga kaua inkubeerida. Muidu denatureerub ka plasmiidne DNA mis järgmises etapis sadeneb. Laboris puhastati plasmiidset DNA’d, aga saadud plasmiidi kogus tuli liiga väike. Mida korduskatses teisiti teha? E1 lahuse lisamise järel tuleb veenduda et lahusesse ei jääks tükke. Kõik peab olema piimjas mass. Muidu need tükid ei lüüsu täielikult. Jälgida, et peale E2 12 lisamist ei inkubeeriks liiga palju. Jälgida, et etanooliga pesteks kogemata sadet kaasa ei võta! Kasvatada baktereid suuremas mahus. Praktiline töö nr. 8: Kontroll-restriktsioon Eesmärk: Lõigata puhastatud plasmiidset DNA’d restriktaasidega, et kontrollida tekkivate DNA fragmentide suuruste järgi, kas puhastatud plasmiid on õige. 5 µl Puhastatud plasmiidne Seda hakkame kontrollima DNA 3,9 µl MQ
endospooride idanemist vegetatiivseteks rakkudeks, mis järgneva keetmisega hävitatakse). Meetodi pakkus esimesena välja John Tyndall Desinfitseerivad ained ei tapa endospoore ja ka mitmeid viirusi, kuid nad hävitavad enamiku bakterite vegetatiivsed rakud. Iga mikroobi iseloomustab 3 temperatuuri karakteristikutkardinaalpunkti: 1. T min - temperatuur, millest madalamal mikroob ei kasva, ükskõik kui kaua me teda ei inkubeeriks. 2. T opt - temperatuur, mille juures mikroobi kasvukiirus on suurim. 3. T max - temperatuur, millest kõrgemal mikroob ei kasva. Topt on alati lähemal Tmax-le, kui Tmin-le. Osmoprotektorid. Kui keskkonnas osmootne rõhk tõuseb, siis on mikroobil võimalik tõsta ka rakusisest osmootset rõhku. Rakus hakatakse sünteesima osmoprotektoreid. Need on vees hästi lahustuvad väikese molekuliga org. ained. Osmoprotektorid stabiliseerivad ka valke.
koniidid. Akineedid niitjatel tsüanobakteritel moodustuvad niidis kahesugused diferentseerunud rakud: akineedid, mis on säilitusraku funktsiooniga nagu endospoorgi ja heterotsüstid, kus toimub N2 sidumine. Igast aktineedist moodustub uus rakkude niit. 66. Mida näitavad Tmin, Topt ja Tmax? Iga mikroobi iseloomustab 3 temperatuuri: 1. Tmin - temperatuur, millest madalamal mikroob ei kasva, ükskõik kui kaua me teda ei inkubeeriks. 2. Topt - temperatuur, mille juures mikroobi kasvukiirus on suurim. 3. Tmax - temperatuur, millest kõrgemal mikroob ei kasva. 67. Kus võiksid looduses elada hüpertermofiilsed mikroobid? Hüpertermofiilid on enamasti arhed. Ka evolutsiooniliselt vanad bakterid. Neid võib leida merepõhja avanevatest kuumaveeallikatest, kus on kõrge rõhk ja vesi ei kee ka üle 100 kraadi ulatuvatel temperatuuridel. Mustade suitsetajate ümbrusest. 68
Temperatuuri toime mikroobidele. Temperatuuri tõustes teatud piirides ensümaatilised reaktsioonid kiirenevad, ja temperatuuri alanedes aeglustuvad ja samamoodi muutub ka mikroobi kasvukiirus, kuid alates teatud maksimaaltemperatuurist toimub reaktsiooni kiiruse järsk vähenemine ja ensüüm inaktiveerub (denatureerub) Mida näitavad Tmin, Topt ja Tmax? 1. T min - temperatuur, millest madalamal mikroob ei kasva, ükskõik kui kaua me teda ei inkubeeriks. 2. T opt - temperatuur, mille juures mikroobi kasvukiirus on suurim. 3. T max - temperatuur, millest kõrgemal mikroob ei kasva. Psührofiilid ja termofiilid, nende membraanide ja valkude iseärasused. Psührofiilid -10-20/5 Armastavad jahedust. Valgud peavad suutma jahedas töötada, ei tohi olla liiga jäigad. Psührofiilide valkudes on rohkem alfa-heelikseid ja vähem beeta-lehti. Ka on neil vähem stabiliseerivaid sidemeid valgu eri osade vahel, Psührofiilide valgud on paindlikud.
Temperatuuri mõju juures peab arvestama ka seda, et ensümaatilised reaktsioonid toimuvad vesilahustes. Vesi peab rakus olema vedelas olekus. Kõrgel temperatuuril ta aurub ja madalamal jäätub. Jääkristallid lõhuvad raku struktuure. Membraanide olek ka tähtis! Mida näitavad: o Tmin - temperatuur, millest madalamal mikroob ei kasva, ükskõik kui kaua me teda ei inkubeeriks. o Topt - temperatuur, mille juures mikroobi kasvukiirus on suurim. o Tmax - temperatuur, millest kõrgemal mikroob ei kasva. Psühorofiilid - ekstremofiilsed organismid, kelle elutegevuseks on soodsad ebatavaliselt madalad temperatuurid. Nende membraanis on rohkesti küllastumata ja lühikese ahelaga rasvhappeid, et membraan oleks madalal temperatuuril plastiline. Psührofiilide valgud peavad suutma jahedas töötada, ei tohi olla liiga jäigad
XIII 66. Temperatuuri toime mikroobidele. Temperatuuri tõustes teatud piirides ensümaatilised reaktsioonid kiirenevad, ja temperatuuri alanedes aeglustuvad ja samamoodi muutub ka mikroobi kasvukiirus, kuid alates teatud maksimaaltemperatuurist toimub reaktsiooni kiiruse järsk vähenemine ja ensüüm inaktiveerub (denatureerub) 67. Mida näitavad Tmin, Topt ja Tmax? 1. T min - temperatuur, millest madalamal mikroob ei kasva, ükskõik kui kaua me teda ei inkubeeriks. 2. T opt - temperatuur, mille juures mikroobi kasvukiirus on suurim. 3. T max - temperatuur, millest kõrgemal mikroob ei kasva 68. Psührofiilid ja termofiilid, nende membraanide ja valkude iseärasused. Kus võiksid looduses elada hüpertermofiilsed mikroobid, kus psührofiilsed mikroobid? Psührofiilid -10-20/5 Armastavad jahedust. Psührofiilide valkudes on rohkem alfa-heelikseid ja vähem beeta-lehti. Ka on neil vähem stabiliseerivaid sidemeid valgu eri osade vahel, Psührofiilide
annaabi.ee 
