Reaktsiooniproduktideks on vesinikperoksiid ja ,D-glükonolaktoon, mis kiiresti hüdrolüüsudes moodustab D- glükoonhappe. Järgmises etapis kasutatakse POx-i mis sisaldab mittevalgulise komponendina heemi. POx katalüüsib spetsiifiliste substraatide oksüdeerumist kasutades elektronide akseptorina teist substraati, H 2O2, mille oksüdeerumisel moodustub H2O. POx-i toimel oksüdeeruva kromogeense substraadina kasutatakse mitmeid bensidiini derivaate, nagu diaminobensidiin derivaate, mis on detekteeritavad vastavatel lainepikkustel. Töö käik · Õppejõult saadi prooviks sidrunimahl · Sidrunimahlast tehti 20x lahjendus ja filtriti · Valmistati 1mg/ml glükoosilahsest kaliibrimislahus glükoosi sisaldusega 0,25mg/ml ning sellest kaks lahjendust konsentratsioonidega 0,125mg/ml ja 0,062mg/ml · Seati valmis ja nummerdati 6 puhast katseklaasi · Katseklaasi o Nr 1 pipeteeriti 1ml destileeritud vett
valgust hemo- ehk kromoproteiini. POx katalüüsib spetsiifiliste substraatide oksüdeerumist, kasutades elektronide aktseptorina vesinikperoksiidi, mille redutseerumisel moodustub vesi. POx-i reaktsiooni saab jälgida spektrofotomeetriliselt, kui kasutada substraati, mile oksüdeerumisel tekib kromogeenne substraat (värviline produkt). Värvi intensiivsus on võrdeline uuritava proovi glükoosisisaldusega. Kromogeense substraadina kasutatakse mitmeid bensidiini derivaate nagu näiteks diaminobensidiin, tetrametüülbensidiin, samuti 2-tolidiin jt. Antud töös kasutatakse substraadina kaaliumheksatsüanoferraati(II) (K 4[Fe(CN)6]) ehk kollast veresoola. POx katalüüsib raud(II) raud(III)-ks ja vesinikperoksiid redutseerub veeks. Kaaliumheksatsüanoferraat(III) (K3[Fe(CN)6]) ehk punane veresool anna lahusele kollase värvuse, mis on dekteeritav lainepikkusel 410 nm. Reaktsioon kulgeb pH 6 juures. Töö käik
reaktsooni jälgimiseks fotomeetriliselt · Värvilise ühendi kontsentratsioon (lahuse värvuse intensiivsus) on võrdelises sõltuvuses uuritava proovi glükoosisisaldusest. Reaktsiooni mehhanism: Omadused: - Oksüdeerib kromogeenseid substraate nagu bensidiini derivaadid (diaminobensidiin, tetrametüülbensidiin, 2-tolidiin e o-tolidiin jt) - O-tolidiini oksüdeeritud vorm on helesinine, detekteeritav lainepikkusel 630 nm Glükoosisisalduse määramisel ei tohiks bioloogilises objektis lihtsustuse mõttes olla märkimisväärselt värvaineid. POx-i substraadina kasutatakse antud töös kaaliumheksatsüanoferraat (II). 3.3.2. Töö käik TÖÖREAKTIIVI ETTEVALMISTAMINE:
Immunohistokeemia = immunotsütokeemia on uurimismeetod, -määratakse raku antigeene antikehade abil, millega on liidetud fluorestsiini või värvilisi metaboliite tootvad ensüümid. -IHK-meetodi eesmärgiks on rakkude täpsem iseloomustamine IHK-meetod on antigeen - antikeha reaktsioon,põhikomponentideks on: 1) antigeen - olemas koetükis 2) antikeha - toodetakse kommertsiaalselt või teaduslaborites(suurimad tootjafirmad: Dako, Novocastro, Santa Cruz jne) 3) värvaine-kromogeen (DAB-diaminobensidiin, AEC jne) Patoloogiateenistuses on kasutusel _135 antikeha (arv täieneb pidevalt) Immunohistokeemia põhimõte: -Ag-Ak reaktsioon ag lokaliseerimiseks 33 -Värvuva või fluorestseeriva ainega märgistamine -Elektroontiheda aine kasutamine (kuld, ferritiin,peroksüdaaas) 4.Kude fikseerimise eesmärk, fiksatsiooni meetodid 5. Kude fikseerimine formaliinis: positiivsus ja negatiivsus 6. Mis on kiiruuring ehk cito uuring patoloogia laboris 7
annaabi.ee 
