et nende toimet tõhusamaks muuta. Mõningaid lihtsamaid antibiootikume valmistatakse ka keemilisel teel. Ravimid on tänapäevani väga head ja peaaegu asendamatud ravimid bakterihaiguste vastu. Antibiootikumid avastanud arst Alexander Fleming sai Nobeli preemia. Antibiootikumide ja selle kõrval paljude teiste uute ravimite kasutuselevõtt on päästnud mitmeid miljoneid elusid. Tänapäeval on väga raske kujutada ette elu ilma antibiootikumideta, sest nad on asendamatud ravimid bakterhaiguste vastu võitlemiseks. Need võitlevad parasiitide ja bakterite vastu, neid hävitades või nende arengut peatades. 8 Arvuti Esimene liitmisarvuti leiutati 1642.aaastal Blaise Pascali käeall, mis võimaldas arvutada kuni 8-kohalisi summasid kümnendsüsteemis, korrutusarvuti leiutas aga Gottfried Wilhelm Leibniz 1673.aastal.
Aja kokkuhoiu mõttes jätsime meie ära tsentrifuugimise ning pipeteerisime transfektsioonisegu kohe klaasile ning alles seejärel inkubeerisime 15 minutit. Rakkude külvamine 24-augulisele plaadile 6. Rakkude vaatlemine mikroskoobis. Rakkude tihedus umbes 100% 7. Rakkudelt imeda vaakumiga sööde, pesta 1 ml PBSiga , PBS ära imeda. 8. Lisada trüpsiin-EDTA lahust 0,2 ml, inkubeerida mitte rohkem kui 5min. 9. Lisada 1ml söödet (DMEM + 10% FBS NB! antibiootikumideta), suspendeeri rakud 1ml automaatpipetiga tassi küljest lahti. 10. Teha söötmega sobiv lahjendus, et rakkude lõpptihedus 24-augulisel plaadil oleks 33,3%. Arvestada 0,5 ml rakususpensiooni augu kohta. Selleks võtta 40 µl rakususpensiooni ja 410 µl söödet augu kohta. 11. Pipeteeri rakususpensioon klaasidel olevatele transfektsioonisegudele, loksuta. 12. Aseta rakud inkubaatorisse: 37°C, 5% CO2 13. 2-4h möödudes pesta rakke 1xPBS-ga ja lisada rakkudele värske sööde (nüüd võib
inkubeerida 10-15 min toatemperatuuril. Selles etapis tekivad DNA ja PEI kompleksid, lahus muutub häguseks. 3. Tõsta katteklaasid steriilsete pintsettide abil 24-augulise plaadi kahte auku. Pipeteerida oma transfektsioonisegud klaasidele. 4. Rakkudelt imeda vaakumiga sööde, pesta 1 ml PBSiga, PBS ära imeda. Lisada 0,2 ml trüpsiin-EDTA lahust, inkubeerida mitte rohkem kui 5 min. Lisada 1 ml söödet (DMEM + 10% FBS NB! antibiootikumideta, kuna koos teiste reagentidega võivad need muutuda rakkudele toksiliseks), suspendeerida rakud automaatpipetiga tassi küljest lahti. 5. Teha söötmega sobiv lahjendus, et rakkude lõpptihedus 24-augulisel plaadil oleks 30%. Meie rakkude algne tihedus oli 95%. tiheduste suhe: 95/30 = 3,16x pindalade suhe: 21/1,9 = 11,05x lahjendus: 3,16 ∙ 11,05 = 34,92x 1200 μl / 34,92 x = 34,36 μl rakke 133
segada, fuugida ja inkubeerida 15 min toatemperatuuril. Selles etapis tekivad DNA ja PEI kompleksid ja lahus muutub häguseks. Tõstsin katteklaasid steriilsete pintsettide abil 24-augulise plaadi kahte auku. Pipeteerisin transfektsioonisegud klaasidele. Rakkudelt imesin vaakumiga sööde ja pestsin 1 ml PBSiga. Lisasin 0,2 ml trüpsiin- EDTA lahust, inkubeerisin 5 min. Lisasin 1 ml DMEM + 10% FBS, seekord ilma antibiootikumideta, et vältida antibiootikumi reaktsiooni teiste komponentidega ja kõrvaldada nende toksilisuse riski, suspendeerisin rakud automaatpipetiga tassi küljest lahti. Rakkude külvamine 24-augulisele plaadile Valmistasin söötmega sobiv lahjendus, et rakkude lõpptihedus 24-augulisel plaadil oleks 30%. Minu rakkude algne tihedus on 90%, seega: • tiheduse suhe: 90%/30% = 3x
annaabi.ee 
