1. Fikseerimislahus: 4% PFA 1x PBSis, 10ml. a. 0,4g PFA puru kaaluda väiksesse keeduklaasi b. lisada 1ml 10x PBSi ja 9ml vett c. soojendada magnetsegajal tõmbe all kuni puru on lahustunud. 2. 1xPBS, 50ml. a. 5ml 10x PBS-i. b. Lisada sellele vett (MQ) 50 ml-ni, segada. 3. PBS-Tween: 1xPBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50ml a. 50ml 1xPBS-ile lisada 50 µl 50% Tween-20 lahust, segada. 4. Permeabiliseerimislahus: 50mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 5ml a. 0,25 ml 1M NH4Cl varulahust b. 0,25 ml 10% Triton X-100 c. 0,5 ml 10x PBS-i d. Lisada vett 5 ml-ni, segada (mitte vahtu ajada). 5. Blokklahus: 2% BSA, 0,1% NaN3 PBSis, 2ml a. 0,04 g BSA-d b. 0,02 ml 10% NaN3 c. Lisada 1xPBS-i 2ml-ni. I Fikseerimine 1. Rakkudelt eemaldada vaakumiga sööde 2. Rakud fikseerida 0,5 ml 4% PFAga PBSis, inkubeerida 15 minutit toatemperatuuril. 3. Pesta rakke 3 korda 5 minutit á 1 ml 1x PBSiga. II Neutraliseerimine ja permeabiliseerimine 1
Nendega kokkupuutuvad lahused peavad olema reeglina eelsoojendatud vähemalt toatemperatuurini. 88. Esimene päev – rakkude kasvatamine 89. 1. Söötme valmistamiseks (50 ml) tuleb valada tuubi 44,5 ml DMEMi ja lisada 5 ml FBSi (veise loote seerum). Seerum on hüübinud vere vedel osa. Ta sisaldab rakkude kasvuks ja paljunemiseks vajalikke faktoreid (nt. albumiine, kasvufaktoreid, vitamiine, rasvhappeid, lipiide jm). Lisada 0,5 ml 100x penitsiliini ja streptomütsiini (PEST) varulahust. Segada keerates ettevaatlikult topsi. 2. Soojendada sööde 37 °C vesivannis. Pipeteerida 15 ml tuubi 5 ml söödet ja 6 cm tassile 4 ml söödet. 3. Võtta külmast krüoviaaliga rakud (NIH3T3 – hiire embrüonaalsed fibroblastid) ja sulatada kiirelt (tegin seda käes), kuna külmutussegi sisaldab DMSO-t, mis on soojana rakkudele toksiline. 4. Järgmisena võtta 15 ml tuubist automaatpipetiga 0,5 ml sooja söödet ja lisada viaali, tõsta rakud 15 ml tuubi ringi
Kui indikaator muutub oma värvi, tõenäoliselt tegu on saastusega. Saastunud tassid tuleb viia kiiresti rakukultuuri ruumidest ära ja desinfitseerida. Rakud visata ära) Lisasin 5 ml FBSi, mis sisaldab albumiine, kasvufaktoreid, vitamiine, rasvhappeid, lipiide ja teisi komponenti. Seerum sisaldab rakkude kasvuks ja paljunemiseks vajalikke faktoreid. Lisasin 0,5 ml 100x penitsiliini ja streptomütsiini (PEST) varulahust – et vältida bakterite paljunemist. Segasin ja soendasin 37°C ni Rakkude kasvatamiseks kasutatavate söötmete põhikomponendid: destilleeritud vesi, anorgaanilised soolad – aitavad hoida osmootset tasakaalu ja membraanipotentsiaali; süsivesikud energiaallikaks, näiteks glükoos ja galaktoos; vitamiinid - mitmesuguste kofaktorite eellasteks, näiteks riboflaviin, tiamiin, biotiin;
annaabi.ee 
