mõistmiseks kasutatakse nn.elementaar--akti polünoomiga. -Leitud polünoomi on lihtne (kontsentratsiooni ja temperatuuri) valikuga, -siis ), , - reaktsioonitingimused ja -suhteliselt kõrge saagis. mõistet,s.o.reaktsiooni kõige väiksemat koostisosa, diferentseerida -ja nii arvutada vajalikud jadareaktsioonide puhul tähtsaim protsessi -muutuja on . - Elusrakude -sisaldavad tavaliselt mitu ensüümi -milles osaleb minimaalne arv aineosakesi.
PCR reaktsioon toimub kolme-etapiliselt: DNA ahelate denatureerimine, praimerite seondumine DNA ahelatega ning DNA süntees. 20. Oma töös kasutasin Reverse (vastassuunilise) praimerina SV-40 poly A, Forward (pärisuunalise) praimerina EGFP-3-170, ning plasmiidina pEGFP-FoxO3a-wt. Oodatav produkti pikkus – 2400 aluspaari. 21. Töö käik: 1. Pipeteerisin kokku PCRi reaktsioonisegu (20μl): 11,3 μl vett 2 μl 10x polümeraasi puhvrit – tagab vajalikud reaktsioonitingimused, nagu pH, soolade kontsentratsioon jt μl 25 mM MgCl2 (lõppkonts. 2,5 mM) – Mg2+ ioonid on vajalikud polümeraasi töötamiseks 2,4 μl 2 mM dNTP (lõppkonts. 240 μM) – sisaldab 4 liiki nukleotiide 1 μl 10 μM Reverse ja 1 μl 10 μM Forward praimerit (lõppkonts. 0,5 μM) – komplimentaarsed vastassuunaliste ahelate otsadele 0,2 μl 25 ng/μl template-DNAd (lõppkonts
konstantide Km ja Vmax väärtustega ning substraadi kontsentratsiooniga [S]. Samuti ilmneb Michaelis-Menten'i võrrandist, et kui · [S] = Km , siis v = Vmax / 2, · [S] >> Km, siis v Vmax. Michaelis-Menteni kiiruse võrrandi graafiline väljendus ehk küllastuskõver võimaldab määrata Vmax ja Km ligikaudseid väärtusi. Väga kõrgetel substraadi kontsentratsioonidel limiteerivad kiirust ainult ensüümi hulk ja reaktsioonitingimused temperatuur, pH, ioonjõud. Substraadi suhtes on reaktsioon sellisel juhul ,,0-järku". Kineetiliste konstantide Vmax ja Km väärtuste täpsemaks määramiseks kasutatakse mitmeid Michaeli-Menten'i kiiruse võrrandi lineariseeritud vorme, millistest üks levinumaid on Lineweaver-Berk'i versioon. Selle puhul tuuakse välja kiiruse pöördväärtuse sõltuvus substraadi kontsentratsiooni pöördväärtusest (nn topelt pöördväärtuste sõltuvus):
annaabi.ee 
