Aluselise reaktsiooni värvid värvivad tuuma, happelise reaktsiooniga aga tsütoplasma. II. Tsentrifuugimine Eesmärk on raku erinevate struktuuride laialijaotamine tihedusgradiendis. Uuritavate rakustruktuuride segu allutatakse raskusjõu kiirendusele. Mida suurem on struktuurmass, seda pikema tee nad selles gradiendis läbivad. Saab eraldada tuumade, plastiidide, mitokondrite, ribosoomide ja membraanide fraktsioone. III. Radioautograafia Radioaktiivsete isotoopide kasutamine eesmärgiga kindlaks teha teatud ainete sünteesi koht ja aktiivsus. Radioaktiivne isotoop viiakse elupuhusesse koekultuuri, võetakse proov, see fikseeritakse radioaktiivne isotoop tuvastatakse (kasutatakse kas fotoemulsioonmeetodit (AgCl) või spetsiaalseid radioaktiivseid loendureid. IV. Rakkude kasvatamine koekultuuris On kaks tasandit:
Aluselise reaktsiooni värvid värvivad tuuma, happelise reaktsiooniga aga tsütoplasma. II. Tsentrifuugimine Eesmärk on raku erinevate struktuuride laialijaotamine tihedusgradiendis. Uuritavate rakustruktuuride segu allutatakse raskusjõu kiirendusele. Mida suurem on struktuurmass, seda pikema tee nad selles gradiendis läbivad. Saab eraldada tuumade, plastiidide, mitokondrite, ribosoomide ja membraanide fraktsioone. III. Radioautograafia Radioaktiivsete isotoopide kasutamine eesmärgiga kindlaks teha teatud ainete sünteesi koht ja aktiivsus. Radioaktiivne isotoop viiakse elupuhusesse koekultuuri, võetakse proov, see fikseeritakse radioaktiivne isotoop tuvastatakse (kasutatakse kas fotoemulsioonmeetodit (AgCl) või spetsiaalseid radioaktiivseid loendureid. IV. Rakkude kasvatamine koekultuuris On kaks tasandit: Taimerakkude puhul ilmneb organogenees, mis lõpeb taime väljakujunemisega;
protsesse, on aine täielikuks iseloomustamiseks mõistlik kasutada tervet komplekti teste nagu näiteks: 1. DNA üleplaaniline süntees. Hindab DNA "remonti" rakku siseneva radioaktiivselt märgistatud tümidiini (3H-TdR - DNA ühe monomeeri) hulga määramise abil. Selleks eksponeeritakse rakukultuuri kemikaaliga teatud aja jooksul (2 tunnist mõne päevani), lisatakse märgistatud tümidiin ning inkubeeritakse. Toimunud DNA remont kvantiteeritakse radioautograafia abil. 2. Salmonella/imetaja mikrosoomi (Amesi) test. Pöörduvate mutatsioonide tekke detekteerimine DNA-s pärast raku eksponeerumist genotoksilisele ainele 3. Õde-kromatiidi (sister-chromatid) vahetustest, aberrantsete värvumismustrite teke leukotsüütide kromosoomides (mikroskoopia) Rakukatsed eriti edukad uute ainete testimisel kosmeetikas (naha ärritatavus jt.). Probleemid rakkude eluajaga. Kasvajarakud. Tulemused tavaliselt alahindavad in vivo mürgisust 16
iseloomustamiseks mõistlik kasutada tervet komplekti teste nagu näiteks: 1. DNA üleplaaniline süntees. Hindab DNA "remonti" rakku siseneva radioaktiivselt märgistatud tümidiini (3H-TdR - DNA ühe monomeeri) hulga määramise abil. Selleks eksponeeritakse rakukultuuri kemikaaliga teatud aja jooksul (2 tunnist mõne päevani), lisatakse märgistatud tümidiin ning inkubeeritakse. Toimunud DNA remont kvantiteeritakse radioautograafia abil. 2. Salmonella/imetaja mikrosoomi (Amesi) test. Pöörduvate mutatsioonide tekke detekteerimine DNA-s pärast raku eksponeerumist genotoksilisele ainele 3. Õde-kromatiidi (sister-chromatid) vahetustest, aberrantsete värvumismustrite teke leukotsüütide kromosoomides (mikroskoopia) Rakukatsed eriti edukad uute ainete testimisel kosmeetikas (naha ärritatavus jt.). Probleemid rakkude eluajaga. Kasvajarakud. Tulemused tavaliselt alahindavad in vivo mürgisust 17