20. Lb. Plantarum T15 Gram-positiivne. Tüved kepikestena. 1 Bakterite genotüüpide uurimine rep-PCR meetodiga Uuritavad tüved on vedelsöötmes ette kasvatatud. 1 ml rakususpensiooni pipeteeritakse 1,5 ml Eppendorfidesse ja seejärel tsentrifuugitakse 10 minutit. Seejärel supernatant eemaldatakse ja biomass suspendeeritakse 500 l puhvris. Loksutatakse ja segatakse Vortexil. Iga kultuuri puhul kasutatakse uut pipetiotsikut. Rep-PCR viiakse läbi eelnevalt valmistatud Mastermixi segu kasutades. Mastermixi segu jaotatakse PCR katsutitesse. Igasse katsutisse lisatakse 1 l kultuurisuspensiooni ja kontrollproovi pipeteeritakse 1 l MilliQ vett. Proovid tsentrifuugitakse ja asetatakse termotsüklerisse PCR reaktsiooni läbiviimiseks. PCR kestab tunde, seepärast jäetakse proovid üleöö reageerima ja järgmisel päeval viiakse läbi agaroos- geelelektroforees
Lb. Lactis- moodustunud üksikud väiksemad kogumid, ümarad 3. Bakterite genotüüpide uurimine rep-PCR meetodiga Uuritavad tüved on vedelsöötmes ette kasvatatud. 1 ml rakususpensiooni pipeteeritakse 1,5 ml Eppendorfidesse ja seejärel tsentrifuugitakse 10 minutit. Seejärel supernatant eemaldatakse ja biomass suspendeeritakse 500 l puhvris. Loksutatakse ja segatakse Vortexil. Iga kultuuri puhul kasutatakse uut pipetiotsikut. Rep-PCR viiakse läbi eelnevalt valmistatud Mastermixi segu kasutades. Mastermixi segu jaotatakse PCR katsutitesse. Igasse katsutisse lisatakse 1 l kultuurisuspensiooni ja kontrollproovi pipeteeritakse 1 l MilliQ vett. Proovid tsentrifuugitakse ja asetatakse termotsüklerisse PCR reaktsiooni läbiviimiseks. PCR kestab tunde, seepärast jäetakse proovid üleöö reageerima ja järgmisel päeval viiakse läbi agaroos- geelelektroforees
lahjendusfaktor on 101. 13. Kuidas valmistada lahjendusrida, et saada lõpplahjenduseks 10 -10? Tuleb võtta epse ja teha 100 10-1 10-2...10-10.... kokku koos algproovi jaoks 11 epsi. Enne ja pärast lahjenduste tegemist, tuleb epse vortexil segada. nt kui kogulahus on 1ml, siis lisame 0,1 ml uuritavat materjali ja 0,9ml füsioloogilist lahust (0,9% NaCl). 14. Miks on vaja kasutada lahjenduste tegemisel iga järgneva lahjenduse tegemiseks uut pipetiotsikut? Lahjendus vastaks sellele, mis ta olema peaks, ei lisanduks juurde otsikul olevate mikroobide kaudu. Lisaks, et teha protseduuri võimalikult steriilselt. Eelnev lahjendus ei tohi järgmist sellisel viisil mõjutada! 15. Milline on optimaalne kolooniate hulk söötmeplaadil loendamiseks? 30...300. 30 on liiga vähe, et selle põhjal statistilist keskmist võtta ja 300 liiga palju - kolooniate ülekasv. 16. Mida tähistab termin CFU?
annaabi.ee 
