3. Kui praimerid seondunud → vaba 3' DNA ots, kust saab alata DNA süntees. Lisaks praimeritele ja DNA-le peavad sellele segule lisatud olema DNA polümeraas ja nukleotiidid, et süntees saaks toimuda. Ühe suure erinevusena tavalisest replikatsioonist ei pärine PCR-il reegline paljundatav DNA ja reaktsiooni läbi viivad ensüümid üldse samast organismist. Tavaliste eukarüootide ja prokarüootide endüümid lihtsalt ei peaks vastu temp-ile, mida PCRil kasutatakse ning häviks. Seetõttu kasutataksegi kasvavate bakterite ja arhebakterite DNA polümeraasi. Prokarüoodid (eriti arhed) elavad sageli väga ekstreemsetes tingimustes ja osad nendest kohanenud kasvuks nt. Kuumaveeallikates. Taq-polümeraasi PCR-i jaoks saadaksegi ühelt selliselt bakterilt. See polümeraas lisab DNA ahelasse u 100 nukleotiidi/sek, nii et sünteesifaasi pikkus varieerub sõltuvalt sünteesitava DNA fragmendi pikkusest
Vaateakna olemasolu Peale töö lõppu pindadele desinfektsioon! 25. Foreesiruum kõige kontaminatsiooniohtlikum? · DNA jääb käte ja riiete külge sealt edasi on väga tõenäoline, et järgmisel päeval on kõik proovid saastunud taud! · Foreesiruum on protsessile kõige kontminatsiooniohtlikum ruum, siit ruumist pastakaid, kitleid, kindaid tagasi algprotsessi viies kontamineerib protsessi ennast · Siit ruumist ei tohi minna protsessi algusesse! · Eelis reaal-aja PCRil! 26. PCR tugevad küljed · Kiire analüüsi aeg 12 tundi (vastus 1 ööpäevaga) · Tundlik avastab 2-20 patogeenirakku proovist · Tootlik võimalik määrata mitu patogeeni ühest proovist · Vähenõudlik transpordi- ja säilitustingimuste suhtes · Täpne tuvastab patogeeni olemasolu, mitte organismi reaktsiooni patogeenile (s.o antikehade teket) · Lisavõimalused genotüpeerimine, DNA sekveneerimine 27. PCR puudused VALEPOSITIIVNE TULEMUS:
müalgia, köha või hingamisraskused ja kokkupuude SARSipatsiendiga 10 päeva jooksul enne sümptomite teket. 20% tekib ka diarröa. Levib ilmselt hingamissekreetidega, aga virionid olemas ka higis, uriinis, roojas. 8000 infitseeritut oli puhangu ajal. Patogeneesis oluline põletikuvastusest tingitud kahjustus. Diagnostika. Raske isoleerida ja tavalistel kultuuridel kasvatada. Kasutatakse ainult SARSikahtlusel. Valikmeetod RT-PCRil hingamisteede ja roojaproovidest viiruse genoomi detekteerimine. Seerumite hindamiseks ELISA. Elektronmikroskoopia roojast. Ravi ja profülaktika. Levikut hingamisteede kaudu raske kontrollida, mõttetu ka. SARSi puhul range karantiin, reisijate jälgimine. Ravi ega vaktsiini pole. Arenaviirused Struktuur. -ahelaga ümbrisega RNA-viirused. Zoonoos. Pleomorfsed ümbrisega viirused 120 nm diameetriga, liivase välimusega (ribosoomid virionis). Kuigi ribosoomid on
Bakteriaalsete: kuna ribosoomide järjestused on erinevate bakterite liikide korral erinevad, saab rRNA järjestuse põhjal liike määrata. Kui mikrokannukeses olevas uuritavas proovis on RNA molekul olemas, siis ta spiraliseerub kaksikheeliksiks, mille tunnevad ära värvusreaktsiooni katalüüsivate ensüümidega märgistatud antikehad. Meetodi piiranguks on RNA molekulide piiratud arv (10 000) rakus sellepärast amplifitseeritaksegi RNA hulk PCRil (tekib miljardeid koopjaid). [Seda meetodit nimetatakse GenProbe meetodiks] 5. Mis limiteerib GenProbe meetodi (hübridiseerimine) puhul testi tundlikkuse? Nukleiinhapete hübridiseerimine: amplifitseerimise korral nimetatakse oligonukleotiidi praimeriks, hübridiseerimisel sondiks. Ahelad keeratakse lahti ja kui on sondile komplementaarne järjestus, siis renaturatsiooni puhul see lühike sond seondub eelistatult DNA ahelaga, sest alati lühike nukleotiidi
annaabi.ee 
