L.Webber 1981. aastal. Muusikali kirjutades toetus ta raamatule Old Possum's Book of Practical Cats. Muusikali ´´CATS´´ esmalavastus toimus 11. mail 1981 Londonis West Endis. Pärst seda tegi muusikal debüüdi Broadwayl 7. oktoobril 1982. Muusikali on mängitud Londonis üle 9000 korra ja New Yorgis üle 8000 korra. 1998 aastal salvestati ´´Cats´´ videversioon. See salvestati VHSile ja DVDle. Samuti näidati seda üle kogu Ameerika ja ka PBSis. See muusikal on üks enim mängitud muusikale maailmas, ning seda mängitakse ikka veel kogu maailmas. ´´CATS´´ on tõlgitud 20 keelde. Olenematta sellest et see muusikal on üks populaarsematest, kritiseeritakse seda ikka veel jõudsalt. ´´CATS´´on üks armastatumaid ja kritiseeritumaid muusikale. Muusikal ´´CATS´´ räägib ühest kasside hõimust (Jellicle kassid), kes on kogunenud prügimäele, et otsustada, kes neist saab õiguse uuesti sündida. Iga kass
kasvada ja transfektsioonisegud lisatakse kinnitunud rakkudele. Meie kasutame vastupidist tehnikat aja kokkuhoiu huvides. c. Rakud elasid tranfektsiooni üle edukalt mikroskoobi all oli näha, et rakkude tihedus oli kasvanud uuesti 100%-ni. d. Transfektsiooni efektiivsus oli umbes 30%. 13. a. Rakkude fikseerimise ja antikehadega märgistamise protokoll: Vajalike lahuste valmistamine: 1. Fikseerimislahus: 4% PFA 1x PBSis, 10ml. a. 0,4g PFA puru kaaluda väiksesse keeduklaasi b. lisada 1ml 10x PBSi ja 9ml vett c. soojendada magnetsegajal tõmbe all kuni puru on lahustunud. 2. 1xPBS, 50ml. a. 5ml 10x PBS-i. b. Lisada sellele vett (MQ) 50 ml-ni, segada. 3. PBS-Tween: 1xPBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50ml a. 50ml 1xPBS-ile lisada 50 µl 50% Tween-20 lahust, segada. 4. Permeabiliseerimislahus: 50mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 5ml a. 0,25 ml 1M NH4Cl varulahust b. 0,25 ml 10% Triton X-100 c
konjugeeritud antikehasid. 143. Enamasti tehakse kahekihiline reaktsioon, asmalt kasutatakse uuritava valgu vastaseid primaarseid antikehasid ja seejärel fluorokroomiga konjugeeritud sekundaarseid antikehi, mis seostuvad primaarse antikeha konstantsete regioonidega. See võimaldab signaali amplifitseerimist. 144. 145. Esimene päev – rakkude fikseerimine 1. Valmistada vajalikud lahused: Fikseerimislahus: 4% PFA 1x PBSis, 10 ml (oli valmis) 146. 0,4 g PFA puru + 1 ml 10x PBSi + 9 ml vett 1x PBS, 50 ml 147. 5 ml 10x PBSi + 45 ml MQ, segada PBS-Tween: 1x PBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50 ml 148. 5 ml 10x PBSi + 45 ml MQ + 50 μl Tween 20 Permeabiliseerimislahus: 50 mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 1 ml 149. 50 μl 1M NH4Cl + 50 μl 10% Triton X-100 + 100 μl 10x PBSi + 800 μl MQ
Esimene päev – rakkude fikseerimine Enne antikehadega värvimist tuleb rakud fikseerida, ehk töödelda neid kemikaalidega, mis peatavad neis bioloogilist protsessi, seega ka lagunemist. Rakud muutuvad vastupidavamaks. Antud juhul fikseerimiseks kasutame PFA lahust, kuid saab fikseerida ka teiste meetoditega, kuid PFA on üks õrnemastest ja ei muutu valke nii tugevalt nagu näiteks atsetoon. Fikseerimiseks on vaja valmistada lahused: 1) Fikseerimislahus: 4% PFA 1x PBSis, 10 ml o 0,4 g PFA puru o 1 ml 10x PBSi o 9 ml vett 2) 1x PBS, 50 ml o 5 ml 10x PBSi o 45 ml MQ3 3) PBS-Tween: 1x PBS, millele on lisatud 0,05% Tween 20, 50 ml o 5 ml 10x PBSi o 45 ml MQ o 50 μl Tween 4) Permeabiliseerimislahus: 50 mM NH4Cl, 0,5% Triton X-100 PBSis, 1 ml. Raku membraan permeabiliseeritakse ehk muudetakse läbilaskvaks detergendiga (Triton-X-100, saponiin, jt
annaabi.ee 
