Praktiline töö nr. 3: DNA lahutamine agaroosgeelis Eesmärk: PCR produkti lahutamine geelelektroforeetiliselt. Materjalid: 18 µl PCR produkt DNA, mida visualiseerima 3,6 µl DNA laadimispuhver DNA visualiseerimiseks ja paremini hambasse vajutamiseks. TAE agaroosgeel GeneRuler 100bp Plus Marker DNA fragmentide pikkuse ning Ladder koguae ligikaudseks kvantifitseerimiseks Arvutused: Meil on 20 µl PCR produkti, kust võeti 2 µl ära. DNA laadimispuhvri koguse jaoks teeme arvutuse: 18/5 =3,6 µl Töö käik: Pipeteerin PCR segule 6x DNA laadimispuhvri. Pipeteerime markeri geeli esimesse hambasse. Pipeteerin enda segu geeli hambasse. Lahutame DNA geelis elektrivoolu toimel (150V ja laseme joosta 20 minutit) Teeme UV valguse all IQ400 geelipildistajas oma geelist pildi. Tulemused:
(näit. Thermus aquaticus ja temalt saadud ensüümi nimetatakse TaqI). 8. Milleks kasutatakse kvantitatiivset polümeraasi ahelreaktsiooni (RT-PCR), milliseid põhikomponente selleks vajatakse, millised on RT-PCRi põhietapid? Kasutatakse: viiruste kvantiteerimiseks, geeniekspressiooni kvantiteerimiseks, DNA kahjustuse mõõtmiseks, kvaliteedikontrolliks ja proovide valideerimiseks, genotüpiseerimiseks, patogeenide detekteerimiseks. Kvantifitseerimiseks, kasutatakse fluorestseeruvaid värvaineid (fluorofoore). Põhietapid: 1) PCR produkti kogust mõõdetakse pärast iga tsüklit (reaalajas) 2) Fluorestseeruvat signaali jälgitakse reaktsiooni kestel ja tema intensiivsus korreleerub moodustunud PCR produkti hulgaga 3)Seatakse mingi värvi fluorestsentsi intensiivsuse lävi ülalpool baasfluorestsentsi ja allpool maksimaalset fluorestsentsi 4)Ct (threshold cycle) – lävetsükkel, s.o tsükli number, mil fluorestsents ületab seatud läve 9
hinnanguid ning tõendeid ühe või teise hüve nõudluse kohta. Tuleb selgitada, kui palju tarbijad oleksid nõus ühe või teise toote ja teenuse eest maksma, kuigi seda tasu tegelikult keegi ei nõua. Tarbija hinnavaru kui väärtuse mõõt Tarbija hinnang erinevatele hüvedele avaldub tema maksevalmiduses, s.o. valmiduses loobuda teistest asjadest või tulust. Tarbija maksevalmidus väljendub nõudluskõveras. Hüve väärtuse kvantifitseerimiseks oleks seetõttu tarvis tuletada nõudluskõver. Joonisel 8.1. on tüüpiline langev nõudluskõver DD´. Kui hüve müüakse turuhinnaga 0P, on müüdav kogus 0X ja summa, mida ostjad maksavad 0PP´X. Väärtus, mida tarbijad selle hüve tarbimisest saavad, on võrdne turuhinnaga. Kolmnurk PDP´näitab, et mõned tarbijad oleksid nõus turuhinnast rohkem maksma. Seda summat, mida tarbijad oleksid nõus enam maksma, nimetatakse tarbija hinnavaruks.
annaabi.ee 
