TTÜ Materjaliteaduse Instituut Füüsikalise keemia õppetool Kolloidkeemia laboratoorne töö 23a Sahharoosi ensüümreaktsiooni kineetiliste parameetrite määramine Eesmärgiks on ensüümreaktsiooni kineetiliste konstantide Km ja vmax määramine Lineweaver- Burki koordinaatides ehitatud graafiku abil (1/v sõltuvana 1/S). Samuti on võimalik määrata ensüümi aktiivsust (1 sekundi jooksul ärareageerivate substraadi moolide arv 1 grammi ensüümi toimel 1 sekundi jooksul ehk teiste sõnadega reaktsiooni kiirus ühikulise hulga ensüümi toimel). Töö ettevalmistamine: Reagentideks on: substraadiks suhkrulahus ja ensüümiks invertaasi lahus. Ensüümi lahus valmistatakse 0,1-0,5% (või kuni 2%) invertaasi lahusena atsetaatpuhvris (0,1M), mille pH 4,8. Sahharoosi algne 0,1M lahus valmistatakse puhvris, mille pH 4,8. Sellest valmistatakse lahjendusega omakorda madalama kontsentratsiooniga lahus (näiteks 0....
TTÜ Materjaliteaduse Instituut Füüsikalise keemia õppetool Kolloidkeemia laboratoorne töö 23a Sahharoosi ensüümreaktsiooni kineetiliste parameetrite määramine Tallinn 2013 Eesmärgiks on ensüümreaktsiooni kineetiliste konstantide Km ja vmax määramine Lineweaver- Burki koordinaatides ehitatud graafiku abil (1/v sõltuvana 1/S). Samuti on võimalik määrata ensüümi aktiivsust (1 sekundi jooksul ärareageerivate substraadi moolide arv 1 grammi ensüümi toimel 1 sekundi jooksul ehk teiste sõnadega reaktsiooni kiirus ühikulise hulga ensüümi toimel). Töö ettevalmistamine: Reagentideks on: substraadiks suhkrulahus ja ensüümiks invertaasi lahus. Ensüümi lahus valmistatakse 0,1-0,5% (või kuni 2%) invertaasi lahusena atsetaatpuhvris (0,1M), mille pH 4,8. Sahharoosi algne 0,1M lahus valmistatakse puhvris, mille pH 4,8. Sellest valmistatakse lahjendusega omakorda madalama...
pH mõju uurimine Tuleb kontrollkatsetega veenduda, et kasutatud erinevad puhvrid ei seganud tulemusi (ensüümreaktsiooni, määramistulemusi). Substraadi ionisatsioon võib ka mõjutada ensüümi pH käitumist. Kui uurida keskkonna efekti mõju, siis tuleks seda teha nii, et uuritakse mõju kineetika parameetritele (mitte ntx pH mõju kiirusele pm). Temperatuuri mõju kiiruskonstandile Aktivatsiooni Gibbsi vabaenergia on alati positiivne. Kiiruskonstandiks on kiiruskonstandi mingi ülemväärtuse astmes smth. Võrrand on tuletatud üleminekuteooria järgi. Aktivatsioonienergia Ea C on konstant. Arheniuse teljestikus y=lnk, x=1/T on tulemuseks sirgjoon ja tõus= -E a/R. Esinevad kõrvalekalded lineaarsusest: Ensüümi kui valgu denaturatsioon. Ntx mõõdame Vmax-i siis võib näha, et kiirus temp kasvades enam ei tõuse, sest ensüüm on denatureerunud (paremalt sirgjoon ja siis
annaabi.ee 
