kr T min 1.Otsfrees Ø Frees 100mm, 3500.- koostatav, 1 4 1,302 9765 30 325,5 31,795 Insert HSS inserdiga 90.- (kooriv) Sõrmfrees Frees 1500.- 2 4 0,75 5625 30 187,5 18,375 Insert
aeg arv hind kokku T min 1.Treitera =45° Tera- (160 koostatav kermis + 2, 3, 4, hoidja inserdiga koorivaks 6 0,2 1,22 12200 60 204 4080) 5 160 treimiseks = Insert 20 4240 2.Treitera =45°
Inserdis ei tohi olla ümberkloneerimiseks kasutatave restriktaaside saite, kuna siis lõigataks meie kodeeritava ala keskelt fragment pooleks, aga me tahame tervet kodeeritavat ala saada. Ümberkloneerimist ei saa teha vaid ühte restriktaasi kasutades, kuna pärast me ei saaks kontrollida kumba pidi insert vektorisse siseneb. Meil on vaja aga, et ta õiget pidid siseneks, muidu me ei saa funktsionaalset valku. Doonorplasmiid pSTBlue1 vektor koos meie inserdiga Aktseptor plasmiid pEGDP-C Reportergeen EGFP Insert DST Ümberkloneerimiseks kasutatavad restriktaasid BamHI ja SalI Millistel tingimustel restriktsiooni reaktsioon läbi tuleks viia? Millise pikkusega fragmendid saame ja mida kasutame ligeerimisel? Double Digest soovitaks meie reaktsiooniseguks: 16
Plasmiid peab kandma mingit spetsiifilist tunnust, et eristada plasmiidiga mikroobe nendest, millel plasmiide ei ole (tavaliselt mingi antibiootikumi suhtes resistentsuse geen, nii et saame antibiootikumiga söötmel kasvatada vaid plasmiidiga mikroobe). Unikaalne restriktsiooni sait, see tähendab, et ei tohi olla rohkem kui üks koht, mis lõigatakse läbi restriktsiooni ensüümiga. Siis saab sinna panna sama ensüümiga läbi lõigataud DNA lõigu. Mingi marker, millega saab eristada inserdiga plasmiide, mitte rekombinantsetest (näit. lacZ geen). Milleks cDNA raamatukogu kasutatakse: 1. Isoleerida ja järjestada geene, mis kodeerivad valku 2. Võrrelda eri organismide homoloogseid järjestusi 3. Määrata mRNA hulka ja geeni ekspressiooni taset rakus Restriktsioon analüüs: Geeni struktuuri määramiseks; piiranguks on restriktsiooni saitide olemasolu ja restriktaaside valik. RFLPs on väga oluline analüüs nii kriminalistikas kui
annaabi.ee 
