Alumise osa lõikame markeri keskelt pooleks- väiksem osa läheb immunoblotti ja suurem osa värvimiseks. Geeli värvimine · Suurema osa geeli värvime seguga: 25% isopropanool, 7% äädikhape, 0,1% Commasie Blue R. · Laseme seista üleöö. · Järgmisel päeval peseme 7% äädikhappega, kuni lilla värv on geelilt eemaldunud (valgud hoiavad värvi tugevamalt kinni kui geel). Esimene marker on ära tulnud, seega loen algusest ühe juurde. Minu valgu suuruseks on umbkaudu 28 kD ja kontsentratsiooniks 150 µg/µl. Immunoblot (Western Blot) Immunoblot on meetod, mis võimaldab uuritavas segus identifitseerida kindlat valku, eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha, ning määrata tema molekulmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1
Nüüd paneme filtri mingisugusesse puhvrisse (vedelikku), kuhul lisame otsitvale järjestusele komplementaarseid nukleiinhappeahelaid. Lisatud komplementaarsed ahelad on kuidagi eelnevalt katseklaasis märgistatud. Kui märgistatudud ahelad vedelas puhvris hulpides leiavad komplementaarse otsitava ahela, siis jääb see sinna kohale filtrile kinni. Võtame filtri lahusest välja ja peseme puhtaks ja paneme peale rüntgenfilmi ja ilmneb soovitud band. Seda protsessi, kus nukleiinhapped kantakse geelilt üle filtrile nimetatakse blottimiseks. Kui geelis ei ole separeeritud nukleiinhappe molekuid vaid valgumolekulid, siis saab ka neid filtrile üle kanda. Kuid hübridiseerimisel tuleb kasutada komplementaarsete nukleiinhapete ahelate asemel spetsiifilisi antikehi. Meetodi välja mõtleja oli Ed Southern, kes demostreeris seda DNA'ga. Õige varsti demostreerisid teised inimesed seda sama RNA puhul. DNA hübridiseerimist hakati selle mehe järgi kutsuma southern blotting
Geelfiltratsioonkromatograafia – väiksed molekulid takerduvad poorsetesse kerakestesse, suured läbivad kolonni vabalt. Afiinsuskromatograafia – keraksetega kovalentselt seotud molekulidele seostuvad neile spetsiifilised molekulid. SDS-polüakrüülamiidgeel elektroforeesi tööpõhimõte. Proov geelile, valgud liiguvad + poole, saab hinnata valkude suurust Valkude ülekanne SDS-polüakrüülamiidgeelilt membraanile ning nende tuvastamine antikehade abil. Geelilt kantakse membraanile, inkubeeritakse antikehadega, loputatakse, inkubeeritakse ensüümiga, loputatakse, kromogenne dekteteerimine Kahedimensionaalse geelelektroforeesi põhimõte. Proteiini segu isoelektriline fokuseerimine, esimene geel teise peale ja SDS elektroforees Erinevad koetüübid. Naha ehitus. Naha epidermise rakkude uuenemine. Alusnahk, pärisnahk, marrasknahk, sarvkiht, karvad(karvanääps, karvasibul) Pärisnaha tüvirakud differentseeruvad
annaabi.ee 
