170 M 1 2 100 250 500 130 100 70 55 40 35 25 15 10 Tulemused- uuritav üleekspresseeritud valk on umbes 45 kDA ja üle 250 mikrogrammi/milliliitri kohta. marker Immunoblot Immunoblot on meetod, mis võimaldab uuritavas segus identifitseerida kindlat valku, eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha ning määrata tema molekulaarmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil. 2. Valkude ülekandmine membraanile. Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min. Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Selleks, et seda teha, paneme bloti aparaadi anoodplaadi peale puhvris olnud filter, siis puhvis olnud membraan, siis geel ja jälle filter. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaat peale. Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V.
hoiavad värvi tugevamalt kinni kui geel). Esimene marker on ära tulnud, seega loen algusest ühe juurde. Minu valgu suuruseks on umbkaudu 28 kD ja kontsentratsiooniks 150 µg/µl. Immunoblot (Western Blot) Immunoblot on meetod, mis võimaldab uuritavas segus identifitseerida kindlat valku, eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha, ning määrata tema molekulmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil. 2. Valkude ülekandmine membraanile. · Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min. · Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Paneme bloti aparaadi anoodplaadi peale puhvris olnud filtri, membraani, geeli ja jälle filtri. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaadi peale. · Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V. · Pärast ülekannet tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani
lahusest ära ja pildistame neid. Markerite suuruse järgi määrame uuritava valgu suurus. Seega minu uuritava valgu suurus on liigi kaudu 25 Da. Immunoblot. Immunoblot on meetod, mis võimaldab uuritavas segus identifitseerida kindlat valku, eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha ning määrata tema molekulaarmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil. 2. Valkude ülekandmine membraanile. · Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min. · Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Selleks, et seda teha, paneme bloti aparaadi anoodplaadi peale puhvris olnud filter, siis puhvis olnud membraan, siis geel ja jälle filter. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaat peale. · Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V.
annaabi.ee 
