iseloomustatakse kaudselt aromaatset tuuma sisaldavate aminohapete sisalduse alusel: fenüülalaniin (Phe), türosiin (Tyr) ja trüptofaan (Trp). Nad omavad neeldumismaksimume lainepikkustel 270-280 nm ja on tänu sellele spektrofotomeetriliselt kenasti dekteeritavad. Kaseiini hüdrolüüsi produktide sisaldust väljendatakse aga siiski vaid türosiini kontsentratsioonina mg/mL olemasoleva kaliibrimissirge alusel. Töö käik Valmistan juhendaja näpunäidete järgi sobiva pH-ga esperaasi lahuse, kasutades lahustiks atsetaatpuhvrit. Optimaalne kontsentratsioon esperaasi jaok on 4 mg 1 ml puhvri kohta, seega pean 5 ml lahuse jaoks kaaluma 20 mg ehk 0,0200 g esperaasi analüütilisel kaalul. Seejärel lisan väikese koguse puhverlahust ja segan klaaspulgaga, kuni ensüüm on lahustunud (kuna preparaat sisaldab ka täietainet, mis ei lahustu, siis selget lahust ei teki). Viin mahu 5 ml-ni ja loksutan lahuse läbi, et kontsentratsioon ühtlustuks.
A sisaldus, mg/ml Aeg, sek 0,210 0,033 0 0,280 0,045 345 0,361 0,057 645 0,426 0,067 945 Ensüümipreparaadi proteolüütilise aktiivsuse leian alljärgneva valemiga: CTyr = 0,067 0,045 = 0,022 A= (0,022*1000*26*5*2)/(600*181*1*0,0076)=6,930 kat/g Järeldus: Tulemust 6,930 kat/g võib tõlgendada nii, et 1g esperaasi hüdrolüüsib 30°C juures 1 sekundi jooksul 6,930 mol peptiidsidemeid. Kirjanduse andmetel on alklaas nüüd laiemalt tuntud subtilisiini nime all, mille aktiivsus olenevalt pH-st ja päritoluorganismist vahemikus ~6 - 9,5 kat/g. Minu tulemus langeb sellesse vahemikku. Võrreldes paljude teiste proteolüütiliste ensüümidega on ta üsna madala aktiivsusega ensüüm ning ühe mooli peptiidi hüdrolüüsimiseks on vaja üsna suurt kogust nimetatud ensüümi.
V1 reaktsioonisegu (substraat + ensüüm) üldmaht (ml), V1 = 26 ml V2 valmistatud ensüümilahuse üldmaht (ml), V2 = 5 ml 2 TKÄ lahusest tingitud proovi lahjendus (3 ml 6 ml, seega L = 2), V3 ensüümi maht hüdrolüüsisegus (ml), V3 = 1 ml g proteaasi preparaadi kaalutis (g), g = 0,02 g 181 türosiini molekulmass. Järeldus Esperaasi proteolüütiline aktiivsus on 3,97 kat/g, see tähendab, et 30°C juures 1 sekundi jooksul vabastab ensüüm 3,97 mooli aminohapet.
annaabi.ee 
