suspensiooni, seega plaadile jäi 240 l ning eemaldasin 960 l. 11. a. Lüüsipuhvri valmistamiseks pipeteerisin 15 ml tuubi Tris-HCl (hoiab puhvri pH sobivana), NaCl, Triton-X 100 (detergent, mis lõhub membraanstruktuurid, see vabastab valgud rakusisemusest ja organellidest), glütserooli, EDTA (inhibeerib nukleaase, mis muidu lagundaksid valgud) ning vett. Segasin ning hoidsin puhvrit jääl. b. Sellist valgulüsaati kasutatakse tavaliselt edasi immuunosadestamiseks, Western blotiks või ELISA analüüsiks. Need meetodid võimaldavad uurida rakkude valgulist koostist või eraldada spetsiifilist valku ülejäänud raku komponentidest. 12. a. Kasutasime keemilist meetodit. Selleks lahjendasime DMEM-is eraldi DNA ja PEI ning seejärel segasime lahused kokku. DEI moodustab DNA-ga kompleksid. Pipeteerisime tranfektsioonisegu plaadile ning lisasime rakususpensiooni. DEI soodustab DNA seostumist rakumembraaniga, fagotsütoosi teel sisenevad DNA:DEI kompleksid rakku. b
Lüüsipuhver peab sisaldama puhverdavaid aineid, mis hoiavad pH enam-vähem neutraalse (Tris-HCl, HEPES-NaOH), NaCl osmootse tasakaalu säilitamiseks (100-500 mM), detergenti membraanide lahustamiseks (SDS, Triton X-100, NP-40), lisaks veel glütserooli, vajadusel EDTA-d või muid lisandeid. Lüüsipuhvri koostis sõltub sellest, milliseid valke täpselt uurida soovitakse. 107. Saadud valgulüsaati kasutatakse edasi n. immuunosadestamiseks, Western blotiks, ELISA analüüsiks. 1. Valmistada 15 ml tuubi 5 ml lüüsipuhvrit. Segada: 250 μl 1M Tris-HCl, 150 μl 5M NaCl, 0,5 ml 10% Triton-X 100, 1 ml 50% glütserooli, 20 μl 0,5M EDTA, 3,08 ml MQ-d. Panna puhver jääle. 2. Fuugida trüpsiniseerimisel üle jäänud rakud (3 min 1000 rpm). Eemaldada supernatant. Lisada 1 ml PBSi (et eemaldada söötmejäägid), loksutada õrnalt, fuugida uuesti, eemaldada supernatant. 3
Lüüsipuhver peab sisaldama puhverdavaid aineid, mis hoiavad pH enam-vähem neutraalse (Tris-HCl, HEPES-NaOH), NaCl osmootse tasakaalu säilitamiseks (100-500 mM), detergenti membraanide lahustamiseks (SDS, Triton X-100, NP-40), lisaks veel glütserooli, vajadusel EDTA-d või muid lisandeid. Lüüsipuhvri koostis sõltub sellest, milliseid valke täpselt uurida soovitakse. Saadud valgulüsaati kasutatakse edasi n. immuunosadestamiseks, Western blotiks, ELISA analüüsiks. Lüüsipuhvri valmistamine Segada omavahel 15 ml tuubis: 250 μl 1M Tris-HCl lõppkonts. 50 mM, 150 μl 5M NaCl (lõppkonts. 150 mM) 0,5 ml 10% Triton-X 100 (lõppkonts. 1%) – detergent, lõhestub bilipiidse membraani 1 ml 50% glütserooli (lõppkonts. 10%) 20 μl 0,5M EDTA (lõppkonts. 2 mM) 3,08 ml MQ-d Panna puhver jääle.
annaabi.ee 
