Immunoblot on meetod, mis võimaldab uuritavas segus identifitseerida kindlat valku, eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha ning määrata tema molekulaarmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil. 2. Valkude ülekandmine membraanile. Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min. Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Selleks, et seda teha, paneme bloti aparaadi anoodplaadi peale puhvris olnud filter, siis puhvis olnud membraan, siis geel ja jälle filter. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaat peale. Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V. Pärast ülekannet, tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani 3% BSA , 0,05% TBS/Tween-20 lahusele üheks tunniks. Edasi toimub primaarse antikeha sidumine ja inkubeerimine 4 kraadi juures üleöö. Peseme membraani 4x5min TBS/Tween.
Immunoblot on meetod, mis võimaldab uuritavas segus identifitseerida kindlat valku, eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha, ning määrata tema molekulmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil. 2. Valkude ülekandmine membraanile. · Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min. · Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Paneme bloti aparaadi anoodplaadi peale puhvris olnud filtri, membraani, geeli ja jälle filtri. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaadi peale. · Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V. · Pärast ülekannet tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani 3% BSA , 0,05% TBS/Tween-20 lahusesse (piimalahus) üheks tunniks. · Meie primaarse antikehaga ei sidunud, panime otse sekundaarse. · Peseme membraani 4x5 min TBS/Tweenis
eeldusel, et on olemas sellevastane antikeha ning määrata tema molekulaarmassi. Töö koosneb kolmest etapist: 1. Valkude lahutamine SDS-polüakrüülamiid geelektroforeesil. 2. Valkude ülekandmine membraanile. · Pärast elektroforeesi hoiame geeli bloti puhvris umbes 10 min. · Valkude ülekandmine geelist membraanile bloti aparaadis. Selleks, et seda teha, paneme bloti aparaadi anoodplaadi peale puhvris olnud filter, siis puhvis olnud membraan, siis geel ja jälle filter. Rullime kõik mullid välja ja paneme katoodplaat peale. · Ülekanne toimub 15-25min, 10-15V. · Pärast ülekannet, tuleb blokeerida membraani vaba osa, selleks asetame membraani 3% BSA , 0,05% TBS/Tween-20 lahusele üheks tunniks. · Edasi toimub primaarse antikeha sidumine ja inkubeerimine 4 kraadi juures üleöö.
annaabi.ee 
