idea was taken seriously as a solution to traffic congestion. London Underground full map The Underground serves 268 stations by rail; an additional six stations that were on the East London line are served by Underground replacement buses. Fourteen Underground stations are outside Greater London, of which five (Amersham, Chalfont & Latimer, Chesham, Chorleywood, Epping) are beyond the M25 London Orbital motorway. Of the 32 London boroughs, six (Bexley, Bromley, Croydon, Kingston, Lewisham and Sutton) are not served by the Underground network, while Hackney only has Old Street and Manor House on its boundaries. The end Thank you
molekulist 5, 15, 30 tsükliga? 5 tsükliga-32 15- 215 30- 230 Praktikas tunduvalt vähem. 14 Töö nr 5: Rekombinantse DNA sekveneerimine ,,DYEnamic ET Terminator Cycle Sequencing Kit" abil. Lähteained: Rekombinantne, inserti sisaldav DNA (~100 ng/l) T7 RNA polümeraasi promootori praimer (100 ng/l) "Sequencing reagent premix" (Amersham), sisaldab fluorestsents-märgitud nukleotiide, puhvrit ja Taq polümeraasi (hoida jääl!) vt lisa. ja www aadress: http://www.gelifesciences.co.jp/tech_support/manual/pdf/us81050pl_rev_c.pdf 75% isopropanool 99% formamiidi 5 mM EDTA-Na2 lahus. Töö käik: (1) PCR tuubis sega kokku järgmine reaktsioonisegu (nn Mastermix, võib olla valmis tehtud juhendaja poolt): 1,5 l H2O 0,5 l 10x reaktsiooni-puhvrit kokku 4 l 1 l T7 praimerit (100 ng) 1 l premix (dNTP + Taq)
Mitu DNA fragmenti on teoreetiliselt võimalik saada ühest DNA molekulist 5, 15, 30 tsükliga? Ühest DNA molekulist on võimalik saada 5 tsükliga 2 5 fragmenti, 15 tsükliga215 fragmenti ja 30 tsükliga 230 fragmente. 11 Töö nr 5: Rekombinantse DNA sekveneerimine ,,DYEnamic ET Terminator Cycle Sequencing Kit" abil. Lähteained: Rekombinantne, inserti sisaldav DNA (~100 ng/l) T7 RNA polümeraasi promootori praimer (100 ng/l) "Sequencing reagent premix" (Amersham), sisaldab fluorestsents-märgitud nukleotiide, puhvrit ja Taq polümeraasi (hoida jääl!) vt lisa. ja www aadress: http://www.gelifesciences.co.jp/tech_support/manual/pdf/us81050pl_rev_c.pdf 75% isopropanool 99% formamiidi 5 mM EDTA-Na2 lahus. Töö käik: (1) PCR tuubis sega kokku järgmine reaktsioonisegu (võib olla valmis tehtud juhendaja poolt): 1,5 l H2O 0,5 l 10x reaktsiooni-puhvrit kokku 4 l 1 l T7 praimerit (100 ng) 1 l premix (dNTP + Taq)
Asetada valmistatud bakterite suspensioon PCR masinasse, kuumutada suspensioone 950 C juures 10 min jooksul (spetsiaalne programm). II RAPD-PCR REAKTSIOONI ETAPP – VAHETU PCR REAKTSIOONI TEOSTAMINE 3) PCR segu valmistamine. PCR reaktsiooni toimumiseks on vajalikud järgmised komponendid: sihtmärk DNA (bakterilt), spetsiifilised praimerid , Taq-polümeraas, nukleotiidid, puhvrid ja soolad. Ready-To-GoTM PCR Beads on kommertsiaalne kit (Amersham Pharmacia Biotech), mille puhul on tegemist 0,2 ml PCR katsutitega, mis sisaldavad lõppreaktsiooni mahu tingimustes (25 µl) alljärgnevaid komponente: • ~1,5 U Taq-DNA polümeraasi; • 10 mM Tris-HCL (pH 9,0); • 50 mM KCL; • 1,5 mM MgCl2; • 200 µM igat dNTP; Töö käik. 1. Lisa katsutisse, mis sisaldab PCR kuulikest, reagendid alljärgnevas järjestuses: 1.1. 2 µl praimerit ERIC1 R (5’-ATG TAA GCT CCT GGG GAT TCA C-3’); 1.2
annaabi.ee 
