samas lugemisraamis uuritavat valku kodeeriv järjestus • replitseerub episomaalsena rakuliinides, kus on ekspresseeritud SV40 viiruse large T- antigen (Cos1, Cos7), mis tähendab tugevamat ekspressiooni Figure 3 pEGFP C1 ekspressioonivetori kaart (Clontech). Joonisel on tähistatud plasmiidi funktsionaalsed osad ning numbriliselt on välja toodud kaugus mõttelisest plasmiidi alguspunktist. Esimene päev – rakkude transfekteerimine PEI (polyethyleneimines)-ga Attachment promoter Polyethyleneimines are used in the cell culture of weakly anchoring cells to increase attachment. PEI is a cationic polymer; the negatively charged outer surfaces of cells are attracted to dishes coated in PEI, facilitating stronger attachments between the cells and the plate. However, polyethylenimine expresses some toxicity if excess is left in solution. Transfection reagent
võimaldab ekspresseerida EGFP liitvalke, kui EGFP geeni ette või järele on kloneeritud samas lugemisraamis uuritavat valku kodeeriv järjestus replitseerub episomaalsena rakuliinides, kus on ekspresseeritud SV40 viiruse large T-antigen (Cos1, Cos7), mis tähendab tugevamat ekspressiooni 124. 125. 126. 127. 128. 129. 130. 131. Esimene päev – rakkude transfekteerimine PEI-ga 132. Esmalt tuleb vaadelda rakkud mikroskoobis ja hinnata nende seisukorra. Rakud ei ole saastanud ega surnud. Rakkude tihedus on umbes 95%. 1. Transfektsioonisegu ettevalmistamine. Võta 3 1,5 ml epsi. Esimeses segada 25 μl DMEMi ja 2 μl pEGFPd. Teises segada 25 μl DMEMi ja 0,5 μl pEGFP/FoxO3a Kolmandas segada 50 μl DMEMi ja 2 μl PEI lahust. 2. Jagada segu kolmandast epsist võrdselt DNA segudele (26 μl kaupa), segada läbi, fuugida ja
annaabi.ee 
