95 kraadi juures 10 sekundit – DNA denatureerimine c. 56 kraadi juures 20 sekundit praimerite hübridiseerimine d. 72 kraadi juures 1 minut – ekstensioon e. Korrata alates punktist b. 24 korda. f. 10 minutit 72 kraadi juures, et pikendada poolikuks jäänud PCRi produktid Millist template DNA-d ja praimereid kasutasin? Mille järgi valitakse PCR praimerite hübridiseerimise ehk annealing temperatuur? Milline sulamistemperatuur on praimeril l 5’- GCCATCTCATGCCCATCGC -3’ standardtingimustel ja millist hübridiseerimistemperatuuri kasutaksin? Kuidas need leidsin? Hübridiseerimise temperatuur ja aeg sõltub kasutavate praimerite sulamistemperatuurist, amplifitseeritava DNA konsentratsioonist ja reaktsioonisegu koostisest. Antud järjestuse sulamistemperatuuriks on 59,3 kraadi, mille leidsin: http://eu.idtdna.com/site/Order/oligoentry/set? seq=GCCATCTCATGCCCATCGC. Kasutaksin hübridiseerimistemperatuuriks 59 kraadi.
lõikamine, geel-sekveneerimine, automaatne DNA sekveneerimine d) PCR protsess (polümeraasahelreaktsioon) kontrollitud temperatuuriprogrammiga tsükliline protsess, mille käigus paljundatakse soovitud DNA järjestust. DNA polümeraas kopeerib üheahelalise DNA in vitro tingimustes. Vajalik on nelja desoksünukleotiidi juuresolek ning lõigu kaheahelalise DNA tekitamine praimeri abil. Praimeril peab olema vaba 3'-OH ots 10. Loetlege DNA denaturatsiooni põhjustavad tegurid. Nimetage, mida mõistetakse DNA sulamise all. Kõrge temperatuur (85-90°C) Ekstreemne keskkonna pH (<3 või >10) Kõrge ioonjõud Uute H-sidemete moodustajad (formamiid, uurea) DNA denaturatsioon temperatuuri toimel tähendab DNA sulamist. 11. On teada, et Homo sapiens'i ja Streptomyces albus'e DNA sulamistemperatuuride Tm väärtused on vastavalt 86,5 ja 100,5 oC. Skitseerige
annaabi.ee 
