B: PCR (1) Kõigepealt lahjenda plasmiidset DNA-d (~100 ng/l) 50-100 korda. Lahjendus teha TE-s. Ei lahjendanud. (2) Koosta 100 l PCR reaktsioonisegu ehk nn. "master-mix" (üks segu ~10 üliõpilase peale) järgnevatest komponentidest: 62 l H2O 10 l 10x Taq polümeraasi puhvrit 8 l 25 mM MgCl2 10 l 2 mM dNTP 5 l mõlemat nii T3 ja T7 praimerit (100 ng/l) ja viimasena lisa 1 l (5 ühikut) Taq polümeraasi (hoida jääl). Seejärel kanna saadud kogus 9-10 l kaupa kümnesse PCRi mikrotuubi laiali. (3) Lisa PCR tuubi 1 l (1-2 ng) lahjendatud DNA-d. (4) Paiguta tuubid PCRi masinasse ja vali profiil (denaturatsioon 95 oC 30s, hübridisatsioon ehk annealing 50 oC 30s ja ekstensioon 72 oC 1 min; 20 tsüklit). Alusta PCR'i. Tegime 15 tsüklit. (5) Samal ajal valmista 1,2% geel. 40 ml TBE puhvri kohta on vaja kaaluda 0,6 g agaroosi. Valmistamist vaata tööst nr 3. (6) PCRi lõppedes (<1 tund), analüüsi 1/5 saadud produktist agaroosgeelil. Selleks pipeteeri
uuritava DNA kogust. 9 B: PCR (1) Kõigepealt lahjenda plasmiidset DNA-d (~100 ng/l) 50-100 korda. Lahjendus teha TE-s. (2) Koosta 100 l PCR reaktsioonisegu ehk nn. "master-mix" (üks segu ~10 üliõpilase peale) järgnevatest komponentidest: 62 l H2O 10 l 10x Taq polümeraasi puhvrit 8 l 25 mM MgCl2 10 l 2 mM dNTP 5 l mõlemat nii T3 ja T7 praimerit (100 ng/l) ja viimasena lisa 1 l (5 ühikut) Taq polümeraasi (hoida jääl). Seejärel kanna saadud kogus 9-10 l kaupa kümnesse PCRi mikrotuubi laiali. (3) Lisa PCR tuubi 1 l (1-2 ng) lahjendatud DNA-d. (4) Paiguta tuubid PCRi masinasse ja vali profiil (denaturatsioon 95 oC 30s, hübridisatsioon ehk annealing 50 oC 30s ja ekstensioon 72 oC 1 min; 20 tsüklit). Alusta PCR'i. (5) Samal ajal valmista ...% geel. 40 ml TBE puhvri kohta on vaja kaaluda ... g agaroosi. Valmistamist vaata tööst nr 3. (6) PCRi lõppedes (<1 tund), analüüsi 1/5 saadud produktist agaroosgeelil. Selleks pipeteeri 10 l 1 x TBE foreesipuhvrit (lilla)
annaabi.ee 
