Joogivee epidemioloogiline ohutus mratakse fekaalsete coli-laadsete bakterite, coli-laadsete bakterite ja aeroobsete heterotroofsete (saproftsete) bakterite arvu alusel. Saproftsed bakterid on heterotroofsed mesofiilsed aeroobsed ja fakultatiivsed anaeroobsed bakterid, mis kasvavad lihapeptoonagaril 22 oC (72h) ja 37 oC (48h) tunni jooksul. Keskkonnamikrobioloogia konspekt 2005; Tri Kolledz 15 Coli-laadsete ja fekaalsete coli-laadsete mramiseks kasutatakse piirlahjenduste ja membraanfiltrite meetodeid. Veel rakendatakse on/ei ole ehk +/- (presence/absence) teste, mis phinevad coli-laadsete bakterite omadusel lagundada teatuid substraate, mille tulemusena tekib vrviline produkt. Coli-laadsete bakterite puhul on substraadiks isopropl-.-D- tiogalaktopranosiid (IPTG) - kasutatakse .galaktosidaasi detekteerimiseks. E. coli puhul on substraadiks o-nitrofenool-.-D- galaktopranosiid-4metlbelliferl- .-D-glkouroniid (MUG)- kasutatakse .-glkouronidaasi detekteerimiseks. Tuntumad
sünteesil vajalik vaba 3´ OH. DNA- fragmendid eraldatakse ahela pikkussõltuval polüakrüülamiidelektroforeesil (PAAG). Maxami ja Gilberti meetod seisneb kemikaalidega DNA ahela nukleotiidispetsiifiliste üksikkatkestamiste osalises läbiviimises kindlatüübiliste nukleotiidide juures, DNA 5 ´ otsa radioaktiivses märgistamises ning 3´ otsaliselt eripikkuseliste DNA segmentide parve analüüsis PAAG- elektroforeesil, pärast southern- ülekannet fragmnetide visualiseerimises membraanfiltrite autoradiograafial. DNA ahel katkestatase keemiliste ainetega. Sangeri meetod põhineb in vitro DNA sünteesil radioaktiivselt märgistatud nukleotiidide ja spetsiifiliste DNA ahela terminaatornukleotiidide juuresolekul. Ka siin on erinevaid reaktsioonisegusid 4, kus lisaks radioaktiivselt märgistatud nukleotiididele on ka üks terminaatornukleotiid, mis lõpetab DNA sünteesi kas A, G, C või T-terminaatoriga, enamasti kasutatakse ddTNP-sid. Tänapäeval kasutatakse
reid. Taaselustamiseks võib kasutada veel ka membraanfiltreid. Näitena võib esitada Andersoni ja Baird-Parkeri meetodit E. coli detekteerimiseks. Analüüsitava toidu lahjendatud suspensioon külvatakse trüptoon-soja agarile asetatud memb- raanfiltri ülemisele pinnale. Pärast neljatunnist inkubeerimist 37 ºC juures aseta- takse filter trüptoon-soja-sapi agarile ning jätkatakse inkubeerimist 42 ºC juures 18 tundi. Membraanfiltrite kasutamise negatiivseks küljeks on nende küllaltki kõrge hind. Rikastamismeetodid. Rikastamismeetodit kasutatakse kõige sagedamini juhtudel, kui proovimaterjalis arvatakse olevat väga väike kogus sihtmärk-mikroorganisme 36 või on proovis arvatavalt suures koguses teisi baktereid (konkurentsmikrofloora). Teatud juhtudel näevad metoodikad ette kaheetapilist rikastamist (tabel 3.2). 1. Eelrikastamine mitteselektiivsel söötmel, et võimaldada kahjustunud rakkudel taastuda