külmas kasutamiskõlblikud kaks nädalat). vajalik, et rakkudel oleks piisavalt aega paljuneda ja kolooniad moodustada. Külma panek on vajalik, et kogu plaat ei kasvaks ühtlaselt rakke täis ning oleks võimalik kolooniaid eristada. 15. Päev enne järgmist praktikumi tuleb panna saadud valged kolooniad 1 ml Amp-i sisaldavasse vedelsöötmesse kasvama. Selleks kasutada 1,5 ml eppendorfi, mille kordi sisse torgata nõelaga õhuauk. Tuubid tõsta loksutavasse 37oC inkubaatorisse otimaalselt 16 tunniks kasvama. Vajalik selleks, et välja valida valge koloonia rakud (rakud, millesse on sisenenud inserti sisaldav plasmiid) ning neid paljundada. d) Sulatasime mikrolaineahjus 200ml LB+Agar söödet kuni agari täieliku sulamiseni. Täielikult üles sulatatud söötme jahutasime ~50°C juurde (kõrgemal temperatuuril võib antibiootikum hävida) ning lisasime 200 l X-gal (lõppkonts. 20g/ml) vajalik
Minu tassi peal kasvasid nii valged, kui ka sinised kolooniad (nende suhe oli ~ 50/50). Sinised kolooniad sisaldasid plasmiidi, vaid ei sisaldanud inserdi, aga valged sisaldasid õige plasmiidi. Valisin kõige suurema valge koloonia ja panin neid kasvama: Võtsin epsi, kus tegin augu (ilma hapnikuta bakretid suervad ära) Lisasin 1ml Amp-i sisalav vedelsööde Otsikuga katsusin valge kolooniat ja panin otsik epsi sisse Panin bakterid loksutavasse inkubaatorisse 16 tunniks kasvama 375 C juures 6.1 Praktikum – minipreparatsioon aluselise lüüsi meetodil Eesmärgiks on bakteris paljundatud plasmiidi välja puhastamine. Võtsin üleöö kasvanud bakterid ja fuugisin bakterid põhja Eemaldasin supernatanti Re-suspendeerisin pellet 0,2 ml-s E1 lahuses (50mM glükoos – teeb lahuse isotooniliseks, 25 mM Tris-HCl, pH 8,0, 10nM EDTA-Na2 – seob katioone,
annaabi.ee 
