vahevektorisse ehk paljundusplasmiidi. Materjalid: 1,25 µl pSTBlue-1 vektor Lineaarne vahevektor, kus on origin, (16ng/µl) antibiootikumide resistentsusgeen, lacZ üksus ja AccepTor kloneerimissait. 3,75 µl PCR produkt Sisaldab inserti 1 µl 10X ligeerimispuhvrit Loob sobiva keskkonna 0,5 µl T4 DNA ligaasi (5U/µl) Ligeerib inserdi ja vektori kokku 3,5 µl MQ lahusti Arvutused: Vektor: 16/1 = 20/x x = 1,25 µl PCR produkt: 150ng/10µl=15ng/µl PCR vektrori suhe peab olema 3:1. Ehk PCR võtame 3*1,25*3,7 µl 10x puhver: 10/10 = 1 Ligaas: 5U/ µl tahame saada 2,5U ehk võtame 0,5 µl 9 MQ: 10-1,25-3,75-1-0,5 = 3,5
DNA ülekandumisel on kõige olulisemateks valkudeks relaksaas, T4CP (T4SS coupling protein, mis tagab substraadi äratundmine) ja ATPaasid. Need on konjugatsiooni tuumaks. Relaksaas on ainuke valk, mis on olemas kõigil konjugatsiooni käigus ülekanduvatel plasmii-didel (konjugatiivsed pluss mobiliseeritavad plasmiidid). Relaksaas on konjugatsiooni alustamise ja lõpetamise võtmeensüüm, sest ta tunneb ära oriT järjestuse ja initseerib DNA üheahelalise katke, lisaks ligeerib transkonjugandis ülekantud DNA kokku. Mobiliseeritavad plasmiidid kannavad konjugatsiooniks vajalikest geenidest ainult oriT-d, relaksaasi geeni ja veel mõnda abivalgu geeni. Konjugatiivsed plasmiidid sisaldavad nii relaksosoomiks vajalikke geene kui ka MPF geene (T4SS). 10.1.2. Tüüp IV sekretsioonisüsteem Konjugatsiooni toimumiseks on vajalik sugupiili ehk konjugatiivse piili teke. Sugupiili peab tekkima rakk-rakk interaktsiooniks ning DNA transpordiks retsipientrakku
annaabi.ee 
