TEMED – 4 µl tõmbekapi all APS – 40 µl 4. Valasime kontsentreeriva geeli lahutava geeli peale, eelnevalt kontrollides lahutava geeli polümeseerimist, ning ettevaatlikult panime paika kammi. Jätsime geel polümeriseeruma. Vlaguproovide valmistamine: 1. Segasime omavahel valgulahus ja 2x laadimispuhver, mille komponendiks on broomfenoolsinine – värv, mis aitab jälgida proovide migreerumist (15 µl valgulahus + 15 µl laadimispuhvri) eppendorfis. 1. Trüpsin 23,8 kDa 2. EPGluC 29 kDa 3. Laktaat dehüdrogenaas 35 kDa 4. HRP 44 kDa 5. Ovalbumiin 44,3 kDa 6. BSA 66,3 kDa 7. Tundmatu valk X kDa 2. Inkubeerisime denatureerimiseks 95oC juures 5 minutit. 3. Jahutasime valguproovid jäävannis.
Materjalid: 18 µl PCR produkt DNA, mida visualiseerima 3,6 µl DNA laadimispuhver DNA visualiseerimiseks ja paremini hambasse vajutamiseks. TAE agaroosgeel GeneRuler 100bp Plus Marker DNA fragmentide pikkuse ning Ladder koguae ligikaudseks kvantifitseerimiseks Arvutused: Meil on 20 µl PCR produkti, kust võeti 2 µl ära. DNA laadimispuhvri koguse jaoks teeme arvutuse: 18/5 =3,6 µl Töö käik: Pipeteerin PCR segule 6x DNA laadimispuhvri. Pipeteerime markeri geeli esimesse hambasse. Pipeteerin enda segu geeli hambasse. Lahutame DNA geelis elektrivoolu toimel (150V ja laseme joosta 20 minutit) Teeme UV valguse all IQ400 geelipildistajas oma geelist pildi. Tulemused: 6 Minu rada: 11 Mida näen geelis oma rajal